隨著分子醫(yī)學(xué)進(jìn)展和靶向藥物的不斷涌現(xiàn)，與其相關(guān)的分子病理檢測也備受關(guān)注，其中有一種技術(shù)成熟的分子檢測更是分子檢測技術(shù)當(dāng)中的佼佼者，這種檢測是為數(shù)不多的可以進(jìn)入醫(yī)保報銷范圍的分子病理檢測項目也是被各種指南所推薦的檢測項目。這就是要跟大家分享的病理科的那條“魚”-熒光原位雜交（FISH），其原理是利用熒光素標(biāo)記的核酸探針（魚餌）與組織細(xì)胞中待測的核酸（DNA/RNA）按堿基配對的原則進(jìn)行特異性結(jié)合，在熒光顯微鏡下顯示基因狀態(tài)的方法，以實現(xiàn)其對特定基因的檢測。

20世紀(jì)50年代以后，隨著分子遺傳學(xué)的發(fā)展，尤其是沃森和克里克提出DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)以后，人們進(jìn)一步認(rèn)識了基因的本質(zhì)，即基因是具有遺傳效應(yīng)的DNA片段,現(xiàn)已證實的基因數(shù)目已20000-25000個之多。隨著外界環(huán)境和生物內(nèi)在的各種因素的影響，導(dǎo)致人體的基因發(fā)生各種改變，從而導(dǎo)致疾病的發(fā)生。

實驗室一般使用不同的平臺檢測各種基因變異包括：基因點突變、基因易位、基因或染色體數(shù)量異常，基因突變通常使用PCR、sanger測序或NGS高通量測序進(jìn)行研究，而我們今天為大家介紹的FISH能夠檢測范圍非常廣，基因易位、基因或染色體數(shù)量異常都可以通過使用不同性質(zhì)的探針進(jìn)行檢測。具體包括如下幾種形式：

現(xiàn)在就來講講怎么來“釣魚”，我們需要準(zhǔn)備的主要材料和設(shè)備包括：探針、樣本處理試劑盒、原位雜交儀和熒光顯微鏡。檢測流程包括樣本處理、片子準(zhǔn)備、預(yù)處理、蛋白酶消化、變性、雜交、雜交后洗滌、復(fù)染DAPI以及最后的信號判讀過程。其中重點說明一下我們的魚餌-探針，探針是依據(jù)檢測的目的選擇相應(yīng)的探針，主要分為：1數(shù)量探針 （染色體或基因缺失/增多）2移位，融合探針 （易位/倒位）3移位，分離探針 （易位/倒位）

根據(jù)探針標(biāo)記的不同位置可以在熒光顯微鏡下通過不同熒光通道觀察到細(xì)胞核內(nèi)不同探針的位置，整合之后就可以得出是否發(fā)生基因變異的判讀和診斷結(jié)果。熒光顯微鏡下顯示以HER-2、ALK為例如下圖所示。

FISH被廣泛應(yīng)用于乳腺癌、膀胱癌，宮頸癌，肺癌和淋巴瘤等實體腫瘤的靶向治療和輔助診斷。乳腺癌細(xì)胞中Her-2基因的擴增常預(yù)示著患者預(yù)后較差，25% ~ 30%的乳腺癌患者有Her-2基因的擴增和/或過度表達(dá)。同時發(fā)生Her-2基因擴增的患者使用分子靶向藥物赫賽汀也會有更好的治療效果，赫賽汀也是全球第一個靶向藥物，也開啟了靶向藥物與基因伴隨診斷的全新局面。

熒光原位雜交技術(shù)在基因定性、定量，整合、表達(dá)等方面的研究中頗具優(yōu)勢，目前已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于遺傳病診斷、病毒感染分析、產(chǎn)前診斷、腫瘤遺傳學(xué)和基因組研究等許多領(lǐng)域，在臨床檢驗、教學(xué)和研究等方面扮演著重要的角色。

當(dāng)前可以成熟開展的FISH檢測的腫瘤項目如下：

王延文   主管技師

中國醫(yī)學(xué)裝備人工智能聯(lián)盟病理委員會委員

上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院病理科

分子及免疫病理技術(shù)組 組長