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是時(shí)候繼續(xù)填信號(hào)通路是什么鬼第一季的文獻(xiàn)篇了 ，看了看大概還差個(gè)三四篇吧。今天就講一講FoxO信號(hào)通路的文獻(xiàn)吧 …… FoxO信號(hào)通路，我估計(jì)你們都已經(jīng)把我講的忘光光了 ，F(xiàn)oxO信號(hào)通路 ，其實(shí)經(jīng)常作為PI3K/AKT信號(hào)通路的下游，AKT磷酸化激活后，會(huì)使得FoxO磷酸化，導(dǎo)致被降解抑制，差不多就是這樣 。今天看的這篇，是NC上的文章 ： 
要說NC吧，大家都覺得是高分灌水 ，但實(shí)際上，我看了看這篇文章，含金量其實(shí)不低 。 首先由于PTEN的表達(dá)對(duì)于腫瘤抑制起到了比較重要的作用 ，那為啥會(huì)起作用呢？ 如果記得夏老師講的PI3K/AKT信號(hào)通路的話，可能會(huì)記得PTEN是通過逆轉(zhuǎn)PIP3形成，來阻止AKT激活的。 于是他們對(duì)PTEN的穩(wěn)定性做了個(gè)初步的分析，第一步他們做了個(gè)AlphaScreen：
那啥是AlphaScreen呢，這里用這個(gè)要做啥呢？AlphaScreen是一種技術(shù)，通過包埋抗體的兩種小珠，用類似夾心法結(jié)合底物，比如一個(gè)結(jié)合AKT，另一個(gè)結(jié)合AKT的磷酸化位點(diǎn)，兩個(gè)小球接近后就可以激發(fā)產(chǎn)生熒光：
為了研究PTEN的穩(wěn)定性，他們分析的是PTEN的去泛素化酶對(duì)PTEN下游AKT磷酸化激活的影響。也就是從上游，用去泛素化酶的siRNA庫的敲減細(xì)胞，然后用AlphaScreen看下游AKT磷酸化情況。由此，他們找到一個(gè)去泛素化酶——USP11。 這種去泛素化酶，對(duì)于PTEN的維持，有很大的影響，敲減或者突變后，PTEN就會(huì)被泛素化，無法穩(wěn)定表達(dá)了：
接著，他們驗(yàn)證了USP11對(duì)于表型的影響：
也就是USP11缺失后，會(huì)促進(jìn)腫瘤生長：
于是他們做了與PTEN相關(guān)的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證：
接著是臨床樣本中，二者的表達(dá)相關(guān)性，高表達(dá)USP11的，也會(huì)高表達(dá)PTEN（不知道有誰還記得米勒五法中的共變法）：
接著他們分析了高密度生長和低密度生長情況下PTEN的表達(dá)和維持，這里用來CHX（蛋白合成抑制劑），抑制蛋白合成后，就是為了看蛋白的泛素化降解情況：
差不多就是高密度生長情況下，PTEN蛋白會(huì)維持更久，這可能和USP11是密切相關(guān)的。而USP11的表達(dá)，又受到了轉(zhuǎn)錄因子的影響，這個(gè)轉(zhuǎn)錄因子就是FoxO（終于到FoxO了，要是不記得這個(gè)通路的話，建議好好回憶回憶）。這里就分析了FoxO對(duì)于USP11啟動(dòng)子的影響，做了ChIP和Luciferase（反正他們真的是不怕燒錢，實(shí)驗(yàn)管夠）：
如果還記的FoxO信號(hào)通路的話，可能還記得FoxO信號(hào)通路中，當(dāng)FoxO入核后，還有一個(gè)乙?；倪^程，乙?；腇oxO活性會(huì)減弱，而去乙?；枰猄IRT1的參與：
于是他們用白藜蘆醇（促進(jìn)SIRT1介導(dǎo)的去乙?；?/span>）以及敲減SIRT1，來對(duì)USP11以及PTEN的表達(dá)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)FoxO在某種程度上確實(shí)能激活下游的USP11的mRNA表達(dá)，借此維持PTEN的蛋白表達(dá)：
但理論上PTEN又是FoxO的上游……如果你們還記得的話，是PTEN抑制AKT磷酸化，AKT磷酸化被抑制才能使得FoxO入核激活轉(zhuǎn)錄。于是他們分析了PTEN缺失后（這里還用了PI3K的抑制劑以及PTEN的抑制劑進(jìn)行互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)），F(xiàn)oxO的磷酸化情況（FoxO被AKT磷酸化后，即會(huì)泛素化降解）：
這個(gè)結(jié)果就是個(gè)很有意思的結(jié)果——我生我自己……這就是個(gè)正反饋通路……
PTEN通過逆轉(zhuǎn)PIP3的形成，抑制了AKT的激活。沒有激活的AKT無法使得FoxO磷酸化后被降解，也就算PTEN間接促進(jìn)了FoxO的入核轉(zhuǎn)錄激活，而FoxO會(huì)激活USP11的表達(dá)，USP11則會(huì)抑制PTEN的降解。以此循環(huán)下去…… 好吧，這篇十分的文章做得其實(shí)還是蠻有意思的，不像之前的一些文章在上下游驗(yàn)證過程中的顧此失彼，這次在上游、中間、下游三者的影響上，都基本上做得算是比較完整的論證，而最終又形成了一個(gè)上下貫通的正反饋通路。當(dāng)然，錢也沒少燒。有興趣的話，可以自己去下載了看看，PMC上都是有全文的。或者，回復(fù)“公克”（不要在評(píng)論區(qū)回復(fù)），要么就星球上見（當(dāng)然進(jìn)不去也無所謂）。好了，今天就先策到這里吧，祝你們心明眼亮。
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