肝癌是全球第六大常見(jiàn)癌癥，也是癌癥相關(guān)死亡的第四大原因，其5年生存率為18%。肝細(xì)胞癌(HCC)占90%。乙型肝炎病毒(HBV)感染是主要危險(xiǎn)因素，占50%。其他病因包括丙型肝炎病毒(HCV)感染、長(zhǎng)期飲酒和非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)。盡管疫苗(針對(duì)HBV)和最近的抗病毒治療(針對(duì)HCV)降低了病毒性HCC的發(fā)病率，但HCC的發(fā)病率仍在增長(zhǎng)，主要原因是在西方國(guó)家酗酒和肥胖/糖尿病。HCC的病理生理學(xué)是一個(gè)復(fù)雜的多步驟過(guò)程，具有異質(zhì)性的突變景觀和組織學(xué)特征。TERT啟動(dòng)子突變/重排誘導(dǎo)的端粒酶激活見(jiàn)于80%的HCC。二代測(cè)序能夠鑒定HCC中的候選癌癥驅(qū)動(dòng)基因，如TP53(28-36%)、CTNNB1(17-37%)、AXIN1(4-14%)、ARID1A(16.8%)和ARID2(5.6%)，影響細(xì)胞周期控制、Wnt/β-catenin通路和表觀遺傳機(jī)制。

目前，只有25%的HCC患者至少有一個(gè)潛在的可作為治療靶點(diǎn)的突變，而主要的癌癥驅(qū)動(dòng)基因仍然無(wú)法用藥。不幸的是，HCC對(duì)經(jīng)典的化療無(wú)效，肝切除和肝移植是主要的治愈性治療。自2010年以來(lái)，基于酪氨酸激酶抑制劑(TKI)的全身性治療改善了患者結(jié)局。索拉非尼通過(guò)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2 (VEGFR2)靶向RAF-MEK-ERK級(jí)聯(lián)反應(yīng)和血管生成，并被用作一線治療，但與安慰劑相比僅帶來(lái)2.8個(gè)月的生存獲益。2018年，REFLECT 3期研究報(bào)告了侖伐替尼的療效，侖伐替尼是另一種對(duì)VEGF-受體和FGFR家族具有更強(qiáng)活性的TKI，與索拉非尼相比，侖伐替尼的中位總生存期略有延長(zhǎng)(13.6個(gè)月vs 12.3個(gè)月)。晚期HCC的二線治療方案包括其他TKI(瑞戈非尼和卡博替尼)和雷莫蘆單抗(ramucirumab)，雷莫蘆單抗是一種特異性VEGFR2的單克隆抗體，它對(duì)索拉非尼治療失敗后血清AFP濃度高的患者顯示出特異性獲益(REACH研究)。

自2017年以來(lái)，調(diào)節(jié)肝臟腫瘤微環(huán)境的其他療法相繼出現(xiàn)。帕博利珠單抗和納武利尤單抗是兩種靶向程序性細(xì)胞死亡受體-1 (PD-1)的免疫檢查點(diǎn)抑制劑(ICI)，已被FDA批準(zhǔn)用于晚期HCC的二線治療(它們未能證明在總生存期方面顯著優(yōu)于索拉非尼)。納武利尤單抗聯(lián)合伊匹單抗(一種靶向細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)蛋白4 [CTLA-4]的單克隆抗體)已被FDA批準(zhǔn)用于晚期HCC的二線治療。2020年，在3期IMBRAVE-150研究(NCT03434379)中，阿替利珠單抗(抗PD - L1)和貝伐珠單抗(抗VEGF)聯(lián)合治療顯示出優(yōu)于索拉非尼的優(yōu)勢(shì)(中位無(wú)進(jìn)展生存期為6.8個(gè)月，而索拉非尼為4.3個(gè)月)，之后FDA批準(zhǔn)阿替利珠單抗(抗PD - L1)和貝伐珠單抗(抗VEGF)聯(lián)合治療用于晚期HCC的一線治療。然而，盡管有這些前所未有的和令人鼓舞的結(jié)果，只有20-30%的患者對(duì)免疫療法有應(yīng)答，到目前為止，生物標(biāo)志物未能清楚地闡明有應(yīng)答的人群。綜上所述，我們迫切需要更好地表征肝癌微環(huán)境，以便設(shè)計(jì)新的聯(lián)合療法，以抑制腫瘤發(fā)生和/或恢復(fù)對(duì)免疫治療耐藥腫瘤的敏感性。此外，識(shí)別應(yīng)答和耐藥的生物標(biāo)志物將改善患者個(gè)性化治療的選擇。

本文就肝臟腫瘤微環(huán)境(TME)在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用作一綜述。此外，我們總結(jié)了目前關(guān)于髓系細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的可行治療方法、新療法和目前的臨床試驗(yàn)。雖然血小板現(xiàn)在被認(rèn)為是HCC和HCC腫瘤微環(huán)境的重要調(diào)節(jié)因子，但考慮到血小板的獨(dú)特性質(zhì)(它們是缺乏細(xì)胞核的巨核細(xì)胞碎片)，它們?cè)谄渌恼轮羞M(jìn)行了綜述。

肝臟免疫微環(huán)境

肝臟含有大量免疫細(xì)胞:中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、常駐巨噬細(xì)胞(Kupffer細(xì)胞，KC)、自然殺傷細(xì)胞(NK)、自然殺傷T細(xì)胞(NKT)以及肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)和/或常駐淋巴細(xì)胞(B、CD8 T、CD4 T和γδ T細(xì)胞)(圖1)。肝臟環(huán)境對(duì)腸道來(lái)源的微生物代謝物具有高度耐受性，以維持整體穩(wěn)態(tài)。這種免疫耐受是由于肝臟常駐細(xì)胞(肝細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、KC和樹(shù)突狀細(xì)胞/DCs)和外周血白細(xì)胞之間在沒(méi)有共刺激分子的情況下持續(xù)的抗原提呈，使KC來(lái)源的IL-10誘導(dǎo)的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)擴(kuò)增成為可能?？寡准?xì)胞因子(IL-10、IL-13和TGF-β)和促炎細(xì)胞因子(IL-2、IL-7、IL-12、IL-15和IFN-γ)之間存在總體平衡，維持著體內(nèi)穩(wěn)態(tài)。

 慢性肝病導(dǎo)致炎癥信號(hào)上調(diào)，并引起與壞死性炎癥相關(guān)的穩(wěn)態(tài)失衡。在慢性HBV感染期間，循環(huán)中的HBV或HBV衍生抗原的載量促進(jìn)T細(xì)胞的失活(耗竭)和隨后的死亡，這與整體免疫功能的減弱相關(guān)。由于HCV的高突變率和病毒因子對(duì)抗DNA感受器，HCV避免了免疫系統(tǒng)的識(shí)別。另一方面，長(zhǎng)期飲酒和NAFLD的特征是無(wú)菌性炎癥，可放大促炎信號(hào)，并激活單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞。近十年來(lái)，免疫細(xì)胞參與慢性肝損傷(CLD)的研究不斷深入，并顯示出其在支持疾病進(jìn)展中的關(guān)鍵作用。此外，越來(lái)越多的證據(jù)表明腸道通透性、微生物組和微生物代謝物在CLD和HCC中發(fā)揮作用。最近，一項(xiàng)離體研究表明，來(lái)自NAFLD-HCC患者的細(xì)菌提取物可誘導(dǎo)T細(xì)胞免疫抑制環(huán)境，同時(shí)減少細(xì)胞毒性T細(xì)胞。靶向腸道-微生物-肝軸代表了一個(gè)令人興奮的臨床機(jī)會(huì);然而，我們需要開(kāi)展更多工作來(lái)從臨床和功能上驗(yàn)證以微生物組為靶點(diǎn)的治療潛力。

 大多數(shù)HCC是在這種慢性免疫抑制性壞死-炎癥環(huán)境中演變的。與免疫檢查點(diǎn)分子增加相關(guān)的T細(xì)胞共刺激因子減少導(dǎo)致T細(xì)胞效應(yīng)功能受損。在癌癥，尤其是HCC中，TME促進(jìn)癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，并為癌細(xì)胞形成一個(gè)安全的生態(tài)位，以抵消免疫系統(tǒng)的激活。此外，HCC腫瘤呈現(xiàn)中間突變負(fù)荷和許多不同的免疫逃避機(jī)制。最近基于單細(xì)胞RNA測(cè)序(scRNAseq)的研究表明，HCC細(xì)胞表現(xiàn)出高度的患者間變異性，而TME顯示出在患者之間更一致的重復(fù)基因表達(dá)標(biāo)簽。這些結(jié)果提示靶向TME的策略，如免疫治療，可能對(duì)HCC患者更有效。

中性粒細(xì)胞:朋友還是敵人?

中性粒細(xì)胞是固有免疫細(xì)胞，在感染、損傷或腫瘤發(fā)生過(guò)程中，它是最早浸潤(rùn)組織的細(xì)胞之一。在一些實(shí)體人類腫瘤中，腫瘤相關(guān)中性粒細(xì)胞(TANs)的高浸潤(rùn)水平已被證明與腫瘤生長(zhǎng)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后相關(guān)。然而，TAN有兩種不同的類型:抗腫瘤(N1)或促腫瘤(N2) 。促腫瘤N2 TAN具有形成嵌有顆粒狀蛋白質(zhì)的解壓縮染色質(zhì)的能力，稱為中性粒細(xì)胞胞外誘捕網(wǎng)(NETs)，已知支持腫瘤生長(zhǎng) 。在HCC中，腫瘤周?chē)鷧^(qū)域富集的CD66b 中性粒細(xì)胞與總生存率下降相關(guān)(n=149)。

多項(xiàng)研究強(qiáng)調(diào)了腫瘤細(xì)胞、TANs和癌癥相關(guān)成纖維細(xì)胞(CAFs)之間的交互作用在影響HCC進(jìn)展中的重要性。CAFs可通過(guò)SDF1a/CXCR4/IL-6通路抑制中性粒細(xì)胞功能，誘導(dǎo)CD66b、PD-L1、CXCL8/IL-8、TNF和CCL2的表達(dá)，從而抑制T細(xì)胞的功能和增殖。CAFs分泌的心肌營(yíng)養(yǎng)素樣細(xì)胞因子因子1 (CLCF1)可介導(dǎo)CXCL6和TGF-β的腫瘤表達(dá)，分別負(fù)責(zé)中性粒細(xì)胞募集和“N2”極化。在人肝癌中，TANs在腫瘤進(jìn)展的中晚期獲得了與CLCF1水平升高相關(guān)的腫瘤前N2表型。事實(shí)上，CLCF1可能是HCC的潛在預(yù)后生物標(biāo)志物，選擇性阻斷CLCF1信號(hào)通路可能是HCC患者的有效治療(圖2)。

N2 TAN可以誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞的干細(xì)胞樣表型。TANs與肝癌細(xì)胞系共培養(yǎng)增強(qiáng)了肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲和死亡逃逸等致瘤特性。將HCC細(xì)胞和TANs注射到NOD-SCID小鼠(B細(xì)胞和T細(xì)胞缺陷)中，與單獨(dú)的HCC細(xì)胞相比，促進(jìn)了HCC的生長(zhǎng)。在機(jī)制上，TANs分泌骨形態(tài)發(fā)生蛋白2 (BMP2)和TGF-β2，導(dǎo)致癌細(xì)胞中miR-301b-3p的表達(dá)，這增加了干細(xì)胞特性和CXCL5 -中性粒細(xì)胞趨化因子作為正反饋環(huán)。在三個(gè)隊(duì)列的HCC患者(n=919)中進(jìn)行的多變量分析表明，CXCL5過(guò)表達(dá)，單獨(dú)或聯(lián)合瘤內(nèi)中性粒細(xì)胞存在，是總體生存的獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)。HCC腫瘤的CXCL5分泌是由TGF-β和AXL途徑誘導(dǎo)的，這表明靶向這些途徑可能是對(duì)抗TGF-β陽(yáng)性患者HCC進(jìn)展的有效治療策略。這些研究表明，抑制CXCL5可能是減少TAN浸潤(rùn)的潛在治療靶點(diǎn)，可以與腫瘤靶向治療相結(jié)合。有趣的是，索拉非尼治療通過(guò)HIF1a/NF-kB/CXCL5通路增加TAN在動(dòng)物模型和HCC患者(n=46)中的浸潤(rùn)，并通過(guò)抑制凋亡促進(jìn)其生存。在荷瘤小鼠中，TANs通過(guò)分泌CCL2和CCL17招募巨噬細(xì)胞和Treg細(xì)胞誘導(dǎo)索拉非尼耐藥。事實(shí)上，具有低水平CCL2 或CCL17 細(xì)胞的人HCC腫瘤有較長(zhǎng)的生存期。在荷瘤小鼠中使用抗Ly6G抗體去除TAN后，與索拉非尼聯(lián)合使用時(shí)，腫瘤生長(zhǎng)和新生血管的抑制程度比單獨(dú)使用索拉非尼更大。在荷瘤小鼠中使用抗Gr1抗體去除TANs減少了侵襲性腫瘤邊緣的腫瘤大小和微血管密度 (圖2)。

N2 TAN還具有形成NETs的能力，NETs可在NAFLD期間促進(jìn)HCC的發(fā)展。在STAM小鼠模型(新生期鏈脲佐菌素和高脂飲食誘導(dǎo)的NAFLD)中，通過(guò)DNase處理抑制NET形成不影響脂肪肝的發(fā)展，但減少了腫瘤的生長(zhǎng)，主要是通過(guò)降低IL-6水平。NETs通過(guò)調(diào)節(jié)氧化磷酸化途徑(OXPHOS)促進(jìn)CD4 T細(xì)胞分化為Treg，從而將固有免疫和適應(yīng)性免疫聯(lián)系起來(lái) 。此外，在晚期HCC階段，NETs可以通過(guò)激活TLR4/9-COX2促進(jìn)炎癥反應(yīng)來(lái)促進(jìn)侵襲 。體內(nèi)應(yīng)用抗炎藥物(阿司匹林)和DNAse I阻斷COX2及其上游通路，可有效抑制肝癌轉(zhuǎn)移。此外，通過(guò)抑制組織蛋白酶G (NETosis過(guò)程中釋放的一種絲氨酸蛋白酶)來(lái)阻斷NETs，可以在體外阻止癌細(xì)胞的侵襲，并減少小鼠的肺轉(zhuǎn)移 。有轉(zhuǎn)移的肝癌患者癌旁組織中cathepsin G蛋白密度高于無(wú)轉(zhuǎn)移的肝癌患者。這些發(fā)現(xiàn)提示NASH-HCC和HCC晚期存在NETs，提示消除NETs可能會(huì)減少肝癌的發(fā)生或進(jìn)展(圖2)。

 TANs還可以釋放許多免疫調(diào)節(jié)和血管生成因子，從而操縱TME或影響癌細(xì)胞。多項(xiàng)研究提供的證據(jù)表明，血中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞比值(NLR)升高與HCC患者的不良結(jié)局相關(guān)。改變TAN的募集、遷移或激活可能是一種有趣的治療策略，但臨床試驗(yàn)中明顯缺乏這一策略。侖伐替尼通過(guò)誘導(dǎo)TME中CXCL2和CXCL5的分泌并迫使其向N2表型極化來(lái)增加TAN募集，這一發(fā)現(xiàn)支持了這一觀點(diǎn)。然而，侖伐替尼與COX-2抑制劑塞來(lái)昔布聯(lián)用減少了體內(nèi)NET浸潤(rùn)，并且使T細(xì)胞發(fā)生PD-1耗竭。此外，TGF-β通路具有促進(jìn)N2 TANs的能力，但在多個(gè)信號(hào)通路中也具有多效性作用，可以直接干預(yù)腫瘤的發(fā)展，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展并驅(qū)動(dòng)癌細(xì)胞的免疫逃逸。在HCC中，TGF-β通常發(fā)揮雙重作用，在早期發(fā)揮腫瘤抑制作用，在晚期促進(jìn)腫瘤進(jìn)展。一些靶向TGF-β及其受體的臨床試驗(yàn)正在肝癌患者中進(jìn)行。Galunisertib/ LY2157299是一種新型TGF-β受體1激酶抑制劑，目前正在進(jìn)行2期試驗(yàn)，研究其與納武利尤單抗(NCT02423343)、索拉非尼或雷莫蘆單抗(ramucirumab) (NCT02240433、NCT02178358和NCT01246986)聯(lián)用。  

單核細(xì)胞: Dr Jekyll 還是Mr Hide?( Jekyll and Hyde是英國(guó)作家Stevenson的作品，是一部膾炙人口的經(jīng)典小說(shuō)。書(shū)中的主角是善良的醫(yī)生Jekyll，他將自己當(dāng)作實(shí)驗(yàn)對(duì)象，結(jié)果卻導(dǎo)致人格分裂，變成夜晚會(huì)轉(zhuǎn)為邪惡Hyde的雙重人格，最后Jekyll以自己的自盡，來(lái)停止hyde的作惡。)

 單核細(xì)胞是一種固有免疫細(xì)胞，在腫瘤中發(fā)揮著雙重作用。它們經(jīng)常通過(guò)腫瘤CCL2的產(chǎn)生被募集到腫瘤中。在肝癌中，不同的單核細(xì)胞亞群在腫瘤形成過(guò)程中被表征。在早期階段，募集的單核細(xì)胞能夠殺傷腫瘤細(xì)胞;然而，逃避免疫監(jiān)視的腫瘤通過(guò)將單核細(xì)胞重編程為免疫抑制細(xì)胞來(lái)阻礙單核細(xì)胞誘導(dǎo)的死亡。這已經(jīng)在移植了人肝癌細(xì)胞系的人源化小鼠模型中得到了證明，在該模型中，注射來(lái)自早期肝癌患者的CD14 單核細(xì)胞能夠殺死移植的HepG2細(xì)胞。然而，來(lái)自同一患者進(jìn)展至晚期后的CD14 單核細(xì)胞缺乏抗腫瘤活性，并表達(dá)PD-L1/2，這抵消了CD8 T細(xì)胞對(duì)HepG2和Huh7細(xì)胞的抗腫瘤活性。PD-L1/2 CD14 單核細(xì)胞患者的總生存期較其他CD14 細(xì)胞患者短(n=87)。這些PD-L1/2 CD14 單核細(xì)胞也表達(dá)免疫抑制細(xì)胞因子，如IL-10和CCL1。受腫瘤影響的CCR1 CD14 單核細(xì)胞表達(dá)PD-L1, B7-H3和TIM-3，并上調(diào)耐受性代謝酶，促進(jìn)血管生成和轉(zhuǎn)移 。通過(guò)對(duì)HCC細(xì)胞系和組織中趨化因子表達(dá)的分析，發(fā)現(xiàn)CCL15是CCR1 CD14 亞群在腫瘤浸潤(rùn)邊緣的主要招募者(72例)，并且在兩組患者(n=360和n=253)中，CCL15高表達(dá)的患者預(yù)后較差。阻斷CCL15-CCR1軸顯著抑制體內(nèi)原位腫瘤生長(zhǎng)和肺轉(zhuǎn)移，可能是一種有趣的臨床策略，以避免CCR1 CD14 單核細(xì)胞的募集。重要的是，CCL15可在血液中測(cè)定，并可作為生物標(biāo)志物 (圖3)。

 另一種治療方案可能是通過(guò)抑制必需代謝酶來(lái)避免產(chǎn)生致瘤性單核細(xì)胞。據(jù)報(bào)道，腫瘤周?chē)?/span>CD86 HLA-DR 單核細(xì)胞的糖酵解開(kāi)關(guān)可調(diào)節(jié)HCC患者的TME。機(jī)制上，PFKFB3糖酵解酶在單核細(xì)胞代謝轉(zhuǎn)換過(guò)程中被誘導(dǎo)，從而導(dǎo)致PD-L1表達(dá)，從而促進(jìn)人HCC中CD8 T細(xì)胞失活、免疫逃避和疾病進(jìn)展。同樣的單核細(xì)胞群也可以通過(guò)CXCL2/CXCL8在腫瘤內(nèi)募集中性粒細(xì)胞，這反過(guò)來(lái)產(chǎn)生有利于疾病進(jìn)展的促轉(zhuǎn)移因子制瘤素M (圖3)。研究發(fā)現(xiàn)制瘤素M的水平與HCC患者的轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。

髓源性抑制細(xì)胞(MDSC)是一種異質(zhì)性髓系細(xì)胞亞群，已被證明在癌癥和HCC中可抑制T細(xì)胞應(yīng)答。MDSC有兩個(gè)不同的群體:單核細(xì)胞型(M-MDSC-CD14 )和多形核型(PMN-MDSC-CD11b CD33 HLA-DR -)。兩者分別與單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞具有相同的表型和形態(tài)特征 。在HCC患者(77例)的外周血(n=111)和腫瘤(n=12)中觀察到特異性M-MDSC亞群的增加。在體外共培養(yǎng)過(guò)程中，該群體能夠誘導(dǎo)CD4 CD25 Foxp3 Tregs并通過(guò)NKp30依賴的細(xì)胞接觸抑制自體NK細(xì)胞的細(xì)胞毒性。在表達(dá)致癌細(xì)胞周期相關(guān)激酶(CCRK)的腫瘤中，MDSC在HCC患者的腫瘤和血液中聚集，CCRK/IL-6/CD11b/CD33高表達(dá)與最差的預(yù)后相關(guān)。臨床前肝癌小鼠模型表明，CCRK信號(hào)通路通過(guò)招募MDSCs來(lái)協(xié)調(diào)免疫抑制性TME的建立，而這一過(guò)程可通過(guò)靶向CCRK或IL-6來(lái)抵消。肝星狀細(xì)胞(HSCs)也可以通過(guò)CD44依賴的接觸和未知的伴侶，從循環(huán)的CD14 HLA-DR高單核細(xì)胞誘導(dǎo)M- MDSCs。在一組患者中(n=31)， CD33 CD-11b - MDSCs富集于腫瘤周?chē)睦w維化肝臟。作者還發(fā)現(xiàn)在人HSC-PBMC共培養(yǎng)系統(tǒng)中，活化的HSC細(xì)胞釋放因子激活單核細(xì)胞-內(nèi)源性p38信號(hào)，導(dǎo)致M-MDSC特異性基因表達(dá)。MDSCs中p38的活化是募集C/EBPβ和p300到染色質(zhì)的必要條件，從而促進(jìn)H3K27乙?；?/span>BRD4在增強(qiáng)子上的結(jié)合。在HCC患者來(lái)源的PBMCs中，用i-BET762阻斷增強(qiáng)子導(dǎo)致M-MDSC減少。此外，i-BET和抗PD-L1通過(guò)減少M-MDSC和增加CD8 T細(xì)胞來(lái)提高抗腫瘤活性，從而提高了CCL4誘導(dǎo)的纖維化HCC模型的長(zhǎng)期生存率。小鼠對(duì)這一聯(lián)合治療的耐受性良好，可能代表了一種新興的患者治療策略。i-BET762 (Molibresib/GSK525762)目前正在進(jìn)行1 / 2期臨床試驗(yàn)(NCT02964507/NCT03150056)，用于治療晚期或轉(zhuǎn)移性乳腺癌和去勢(shì)抵抗性前列腺癌(圖3)。單核細(xì)胞譜可能為HCC提供診斷或預(yù)后標(biāo)志物。此外，針對(duì)單核細(xì)胞募集或分化的治療方法的開(kāi)發(fā)可能是改變中性粒細(xì)胞募集和CD8 T細(xì)胞抑制的有趣方式。

巨噬細(xì)胞:堅(jiān)韌的細(xì)胞

 在穩(wěn)態(tài)中，單核細(xì)胞來(lái)源的細(xì)胞發(fā)育為肝臟DCs或巨噬細(xì)胞。此外，肝臟中存在巨噬細(xì)胞庫(kù)，即庫(kù)普弗細(xì)胞(Kupffer cell)，它來(lái)源于胚胎發(fā)生期間的卵黃囊來(lái)源的前體細(xì)胞。庫(kù)普弗細(xì)胞被危險(xiǎn)信號(hào)激活，然后通過(guò)誘導(dǎo)包括單核細(xì)胞在內(nèi)的免疫細(xì)胞募集來(lái)促進(jìn)肝臟慢性炎癥。根據(jù)環(huán)境刺激的不同，巨噬細(xì)胞可分為M1和M2兩種主要亞型。M1型巨噬細(xì)胞由微生物成分或促炎細(xì)胞因子(TNF、IFN-γ、TLR)誘導(dǎo)，通過(guò)釋放一氧化氮、活性氧以及促炎細(xì)胞因子IL-1、IL-6、IL-12、TNF-α、CXCL5和CXCL8/10發(fā)揮促炎功能。而M2型巨噬細(xì)胞在IL-4、IL-10、IL-13和糖皮質(zhì)激素的作用下極化，發(fā)揮免疫抑制功能，促進(jìn)組織修復(fù)。CD68標(biāo)志物是肝臟腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAM)定位和分布的常用標(biāo)志物，而CD86 (M1)、CD163 (M2)和CD206 (M2)的表達(dá)水平在體外被接受來(lái)區(qū)分M1和M2型巨噬細(xì)胞。然而，M1/M2的命名存在爭(zhēng)議，因?yàn)榇嬖谠S多不同的極化表型，這些表型在組織中可見(jiàn)，并由許多不同的刺激驅(qū)動(dòng)。在M2亞型中，根據(jù)其激活刺激，有幾個(gè)亞型(M2a, M2b, M2c和M2d)。然而，由于這些亞類具有廣譜的激活狀態(tài)和標(biāo)記物，因此很難在體內(nèi)識(shí)別。

巨噬細(xì)胞是HCC TME的主要組成部分，并具有多種促腫瘤作用，包括免疫抑制、轉(zhuǎn)移、血管生成、維持癌細(xì)胞干性和耐藥。不同的研究報(bào)道，高水平的TAMs，尤其是在癌旁區(qū)域，與HCC患者的不良預(yù)后相關(guān)。腫瘤內(nèi)或邊緣部位的TAM高浸潤(rùn)也可預(yù)測(cè)腫瘤切除術(shù)后的不良預(yù)后。對(duì)肝硬化HBV陽(yáng)性患者隊(duì)列(n=137)中CD68 -TAMs的分析表明，邊緣巨噬細(xì)胞密度與血管侵犯、腫瘤多發(fā)和纖維包膜形成相關(guān)。此外，在HBV 相關(guān)的肝硬化/HCC隊(duì)列(n=253)中，CD206 M2巨噬細(xì)胞失衡與腫瘤-淋巴結(jié)-轉(zhuǎn)移分期較晚、總生存期較差和復(fù)發(fā)時(shí)間較短的侵襲性表型相關(guān)。在一個(gè)小隊(duì)列的患者中(n=26)， TAMs的密度也與經(jīng)動(dòng)脈化療栓塞的抵抗相關(guān)。因此，靶向TAMs的免疫療法已成為治療HCC患者的一種有前景的方法，可分為不同的機(jī)制，包括抑制單核細(xì)胞募集、消除腫瘤組織中預(yù)先存在的TAMs、重塑TAM極化、促進(jìn)吞噬作用和中和TAMs分泌的促腫瘤因子(圖4)。

 一些研究已經(jīng)探討了HCC中單核細(xì)胞募集和TAM蓄積的機(jī)制。HCC細(xì)胞中發(fā)生的線粒體分裂與CD163 -TAMs的浸潤(rùn)相關(guān)(n=69)。事實(shí)上，分裂誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞胞漿線粒體DNA，激活TLR9/NF-κB通路，進(jìn)而增加CCL2的產(chǎn)生，TAM的化學(xué)吸引。阻斷CCL2/CCR2信號(hào)通路似乎可以抑制單核細(xì)胞/TAM募集和M2極化，從而激活抗腫瘤CD8 T細(xì)胞應(yīng)答。此外，CCL2在人肝癌中高表達(dá)，并與不良預(yù)后相關(guān)。納武利尤單抗(抗PD1)聯(lián)合CCR2 /5抑制劑目前正在進(jìn)行2期臨床試驗(yàn)(NCT04123379)。骨橋蛋白/CSF1/CSF1R通路是導(dǎo)致TAMs積累和ICI失敗的另一個(gè)因素。在人肝癌腫瘤中，骨橋蛋白表達(dá)與PD-L1表達(dá)以及TAM浸潤(rùn)呈正相關(guān)。在一些肝癌小鼠模型中，骨橋蛋白通過(guò)激活CSF1受體促進(jìn)肝癌細(xì)胞的趨化遷移和M2極化，并促進(jìn)PD- L1的表達(dá)。因此，CSF1/CSF1R阻斷可能通過(guò)劫持TAMs來(lái)增強(qiáng)抗PD-1/L1免疫治療的療效。CSF-1R抑制劑PLX3397能夠抑制荷瘤小鼠的腫瘤生長(zhǎng)，促進(jìn)向M1表型的極化轉(zhuǎn)移，MDSCs的減少，腫瘤中的CD4 T細(xì)胞與CD8 T細(xì)胞數(shù)量的增加相平衡。目前，一項(xiàng)1期研究正在包括HCC在內(nèi)的晚期實(shí)體瘤患者中測(cè)試MET/CSF1R/SRC抑制劑(TPX-0022) (NCT03993873)(圖4)。

 抑制TAMs是治療HCC的潛在策略。索拉非尼與TAM清除劑(氯滴立或唑來(lái)膦酸)聯(lián)用可誘導(dǎo)抗轉(zhuǎn)移和抗血管生成作用。有趣的是，索拉非尼治療導(dǎo)致血液和腫瘤內(nèi)F4/80和CD11b陽(yáng)性細(xì)胞的出現(xiàn)率較高。在裸鼠肝癌模型中，索拉非尼誘導(dǎo)腫瘤壞死與HNF-1α分泌和TAMs趨化有關(guān)。聯(lián)合抗巨噬細(xì)胞藥物可降低VEGF，增強(qiáng)對(duì)腫瘤生長(zhǎng)和肺轉(zhuǎn)移的抑制作用。此外，索拉非尼和唑來(lái)膦酸聯(lián)合使用可以協(xié)同降低腫瘤中CXCR4 的血管密度。事實(shí)上，在經(jīng)TACE和唑來(lái)膦酸治療的大鼠肝癌模型中也觀察到了類似的臨床前觀察結(jié)果。有趣的是，唑來(lái)膦酸已被廣泛應(yīng)用于多種癌癥中，通過(guò)抑制破骨細(xì)胞活性來(lái)預(yù)防骨轉(zhuǎn)移和減少骨骼腫瘤負(fù)荷，并且在患者中具有良好的耐受性。

對(duì)TAMs的補(bǔ)救可能是治療HCC的一種潛在的替代策略。事實(shí)上，肝癌細(xì)胞分泌的miR-146a-5p包埋外泌體可以培養(yǎng)巨噬細(xì)胞并促進(jìn)M2極化，從而產(chǎn)生促腫瘤效應(yīng)，尤其是通過(guò)誘導(dǎo)PD-L1上調(diào)和T細(xì)胞耗盡。最近，細(xì)胞外囊泡通過(guò)激活糖酵解在單核細(xì)胞分化中發(fā)揮作用。由單核細(xì)胞系THP-1分化而來(lái)的M2型巨噬細(xì)胞通過(guò)HGF/c-Met信號(hào)通路在體外誘導(dǎo)肝癌對(duì)索拉非尼耐藥。HGF還增加了單核細(xì)胞從血液中的募集，形成了一個(gè)前饋循環(huán)。在荷瘤小鼠中，M2型TAMs在索拉非尼耐藥腫瘤中比索拉非尼敏感腫瘤中聚集更多，并產(chǎn)生大量HGF。這些新見(jiàn)解為cMET/HGF抑制劑(卡博替尼或特泊替尼)單獨(dú)或聯(lián)合使用以提高全身性治療療效提供了理論基礎(chǔ)。特泊替尼目前處于用于晚期HCC患者的Ib/2期試驗(yàn)，而卡博替尼聯(lián)合阿替利珠單抗用于晚期HCC患者的III期臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行中(NCT02115373- NCT03755791)。TAM向M1樣表型的極化也可以被IFN-α誘導(dǎo)，并且在原位肝癌種植模型中與索拉非尼有協(xié)同作用，抑制肝癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。另一種策略可能是通過(guò)疫苗將TAM極化從M2傾斜到M1，在荷瘤小鼠模型中，疫苗已顯示出與抗PD-1免疫治療的協(xié)同抗腫瘤效應(yīng)。

中和TAMs分泌的促腫瘤因子是另一種可能的策略。HCC患者血清中IL-6的升高與HCC單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中PD-L1的表達(dá)有關(guān)。值得注意的是，IL-6的表達(dá)與干性和腫瘤進(jìn)展相關(guān)，這種細(xì)胞因子可以由TAMs和MDSCs產(chǎn)生。托珠單抗是FDA批準(zhǔn)的用于治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的人源化抗IL6受體抗體，能夠抑制肝腫瘤的發(fā)生。有趣的是，一項(xiàng)招募患者的臨床試驗(yàn)(NCT04524871)將嘗試在晚期肝癌患者中評(píng)估基于免疫療法的多種聯(lián)合治療(阿替利珠單抗、貝伐珠單抗和托珠單抗)的療效和安全性?？?/span>IL-6抗體司妥昔單抗(siltuximab)可能是另一種方法，因?yàn)?/span>FDA已批準(zhǔn)其用于特發(fā)性多中心卡斯?fàn)柭　?/span>

最近，通過(guò)結(jié)合人類胎肝和HCC (n=14)的單細(xì)胞圖譜，一種新的TAM亞群被發(fā)現(xiàn)可以分泌VEGF并促進(jìn)TME和HCC嚴(yán)重程度的癌胎重編程。這些胎肝相關(guān)CD163 -TAMs能夠通過(guò)免疫檢查點(diǎn)受體和其他配體(CD40LG/CD40、CD28/CD86、SIRPA/CD47和CD86/CTLA4)與免疫細(xì)胞相互作用。有趣的是，VEGF通路以不同的方式促進(jìn)免疫抑制，包括抑制抗原呈遞細(xì)胞和激活抑制性MDSCs、TAMs和Treg細(xì)胞，這為ICI與抗血管生成藥物聯(lián)合應(yīng)用提供了理論基礎(chǔ)。IMBrave150 HCC臨床試驗(yàn)(NCT03434379)聯(lián)合了VEGF抑制劑貝伐珠單抗和阿替利珠單抗，最近顯示出與索拉非尼單藥治療相比結(jié)局改善，因此獲得了FDA批準(zhǔn)。通過(guò)抑制免疫抑制細(xì)胞，增加DC成熟和細(xì)胞毒性T細(xì)胞活性，VEGF抑制劑可以允許從冷腫瘤轉(zhuǎn)變?yōu)闊崮[瘤。然而，大劑量或長(zhǎng)期使用抗VEGF藥物治療可能導(dǎo)致血管過(guò)度減少并促進(jìn)缺氧，這凸顯了使用抗VEGF治療的挑戰(zhàn)。值得注意的是，瑞戈非尼和索拉非尼具有相似的靶點(diǎn)，但瑞戈非尼具有更強(qiáng)的抗血管生成作用。

巨噬細(xì)胞和TAMs在HCC中的作用是一把雙刃劍，因?yàn)檫@些細(xì)胞同時(shí)具有抗腫瘤和促腫瘤功能。針對(duì)這些人群或通過(guò)強(qiáng)迫表型轉(zhuǎn)換對(duì)他們進(jìn)行重新補(bǔ)救可能代表了一種潛在的治療方法。此外，提高巨噬細(xì)胞的吞噬能力可以降低其他實(shí)體癌的腫瘤負(fù)荷。

樹(shù)突狀細(xì)胞使T細(xì)胞滾動(dòng)

樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)是連接固有免疫和適應(yīng)性免疫的重要環(huán)節(jié)，它協(xié)調(diào)抗原呈遞，導(dǎo)致T細(xì)胞的活化和分化。與巨噬細(xì)胞相比，DCs具有遷移特性，并在組織引流淋巴結(jié)中將抗原提呈給T細(xì)胞;然而，許多DC - T細(xì)胞之間的相互作用也發(fā)生在肝臟。CD8 T細(xì)胞的激活依賴于CD4 輔助性T (Th)細(xì)胞之前對(duì)DC的激活。一個(gè)完全功能的免疫突觸由三個(gè)受調(diào)控的步驟定義。首先DC必須將MHCⅡ類分子上的抗原提呈給CD4 輔助性T細(xì)胞，將MHCⅠ類分子上的抗原提呈給CD8 T細(xì)胞。其次，免疫球蛋白超家族(CD80-CD86/CD28)和TNF超家族(CD40L/CD40、4-1BBL/4-1BB、CD27/CD70、CD30L/CD30和HVEM/LIGHT)的共刺激分子必須發(fā)生相互作用，從而觸發(fā)刺激CD8 T細(xì)胞擴(kuò)增和分化的細(xì)胞因子的產(chǎn)生(第三步)，如IL- 12和Ⅰ型IFN(圖5A)。CD8 T細(xì)胞許可可由CD4 輔助性T細(xì)胞(“經(jīng)典許可”)或NKT細(xì)胞(“替代許可”)促進(jìn)。這三個(gè)步驟中的任何一個(gè)受到干擾都會(huì)導(dǎo)致適應(yīng)性反應(yīng)功能失調(diào)。因此，癌細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視的主要機(jī)制之一是破壞這種免疫突觸，通常是通過(guò)表達(dá)抑制性配體來(lái)阻止T細(xì)胞活化T細(xì)胞耗竭的定義為T細(xì)胞增殖和分泌細(xì)胞因子的能力受損，可通過(guò)抑制性免疫檢查點(diǎn)受體(如PD1、CTLA4;LAG3 lymphocyte-activating 3;甲型肝炎病毒細(xì)胞受體2 (TIM3)。如前所述，抑制性免疫檢查點(diǎn)配體不僅在HCC腫瘤細(xì)胞中表達(dá)，而且在髓系細(xì)胞(如DCs、TAMs和中性粒細(xì)胞)中也有表達(dá)。

DC群體的異質(zhì)性取決于其發(fā)育譜系、分化階段和生理病理微環(huán)境。它們通常分為:傳統(tǒng)樹(shù)突狀細(xì)胞(cDC)、漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞(pDC;CD303 CD304 ，分泌I型IFN)和炎癥DCs (infDCs, SIGN ，在慢性炎癥環(huán)境中從單核細(xì)胞分化而來(lái)，誘導(dǎo)輔助性T細(xì)胞(Th)-17分化)。cDCs又稱髓系DCs，可進(jìn)一步分為CD141 /CD14 ^- 1型cDCs (cDC1)和CD1c /CD14 ^- 2型cDCs (cDC2)。

在HCC患者的外周血中，與健康對(duì)照相比，一些研究觀察到循環(huán)pDC和cDC的減少，以及這些DCs上共刺激分子的表達(dá)降低，與IL-10濃度呈負(fù)相關(guān)。在3組患者(n=1065)中，發(fā)現(xiàn)CD303 pDC在人HCC腫瘤中聚集(n=39)，并與1型Treg (P3 - CD49 LAG-3 )定位相關(guān)，并與不良預(yù)后相關(guān)。事實(shí)上，腫瘤內(nèi)大量的BDCA2 pDCs與甲胎蛋白(AFP)水平高、腫瘤-淋巴結(jié)-轉(zhuǎn)移分期高以及Treg和IL-17產(chǎn)生細(xì)胞的腫瘤浸潤(rùn)增加相關(guān)。在體外，pDCs能夠通過(guò)ICOS- l /ICOS相互作用，從初始CD4 T細(xì)胞誘導(dǎo)出1型Treg (Tr1)，從而產(chǎn)生Tr1型IL-10(圖5B)。此外，在人肝癌(n=59中，腫瘤cDC表達(dá)抑制性配體，如PD-L1, Gal9 (TIM3的配體)，MHC-II (LAG3)， CD86和CD80 (CTLA4)。scRNAseq目前正在幫助發(fā)現(xiàn)新的突出DC異質(zhì)性的DC子集和標(biāo)志物。在一個(gè)小的肝癌患者隊(duì)列中(n=18)，與133個(gè)PBMC DC相比，腫瘤DC表達(dá)高水平的MHC-II分子，但低水平的MHC-I分子。cDC1和cDC2被區(qū)分出來(lái)，但只有cDC2聚集在腫瘤中，并且可能能夠?qū)⑻禺愋钥乖岢式oCD4 T細(xì)胞。此外，在HCC患者中發(fā)現(xiàn)了一個(gè)新的cDC分類(cDC3)，其表達(dá)CCL19、LAMP3和CCR7。最近，scRNAseq在16例未經(jīng)治療的肝癌患者的腫瘤中發(fā)現(xiàn)了三個(gè)在腫瘤中富集的DC亞群:DC-c1- CD1C, DC-c3- CLEC9A和DC-c4- LAMP3。在HCC核心富集的DC-c4 LAMP3 亞群表達(dá)成熟和遷移標(biāo)志物(LAMP3, CD80, CD83, CCR7)，但也表達(dá)PD-L1/2，預(yù)測(cè)可結(jié)合并抑制PD-1 T細(xì)胞。對(duì)肝HCC TCGA數(shù)據(jù)的分析表明，LAMP3 DC標(biāo)簽與T細(xì)胞的耗竭/調(diào)節(jié)之間有強(qiáng)相關(guān)性(圖5B)。

增強(qiáng)DC/CD8 T細(xì)胞對(duì)話的策略已被開(kāi)發(fā)，如過(guò)繼免疫療法和基于DC的疫苗，試圖恢復(fù)有效的抗腫瘤反應(yīng)。對(duì)臨床試驗(yàn)進(jìn)行的一項(xiàng)薈萃分析(n= 1,276例患者，19項(xiàng)試驗(yàn))強(qiáng)調(diào)，基DC的免疫療法獲得了更好的結(jié)局，提高了CD4 T/CD8 T比值，并且對(duì)患者是安全的。由鏈球菌來(lái)源的抗癌免疫治療藥物(OK432)產(chǎn)生的DC -OK432能夠產(chǎn)生大量的Th1細(xì)胞因子(IL-12和IFN- γ)，并通過(guò)CD40/CD40L相互作用增強(qiáng)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性。這DC -OK432可以從獲取的患者單核細(xì)胞中產(chǎn)生，先用IL-4和粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)刺激，然后用OK432刺激。13例肝細(xì)胞癌患者在經(jīng)導(dǎo)管肝動(dòng)脈栓塞術(shù)中應(yīng)用DCs-OK432后無(wú)復(fù)發(fā)生存期延長(zhǎng)。

以DC為基礎(chǔ)的疫苗接種是另一種治療方法，其基礎(chǔ)是在體外將單核細(xì)胞來(lái)源的DC暴露于腫瘤抗原(腫瘤裂解物或腫瘤相關(guān)抗原- TAAs)，并伴隨刺激信號(hào)(GM-CSF, IL-4, TNF-α)，當(dāng)引入患者體內(nèi)時(shí)觸發(fā)抗腫瘤反應(yīng)。幾年前，盡管DC疫苗具有安全性和耐受性，但未能改善HCC患者的結(jié)局。然而，AFP負(fù)載DC能夠刺激特異性的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞對(duì)AFP產(chǎn)生的肝癌細(xì)胞進(jìn)行殺傷。最近，DC疫苗與ICI的聯(lián)合應(yīng)用顯示出了有希望的結(jié)果。在預(yù)先建立的體內(nèi)皮下和原位肝癌中，AFP-DCs單獨(dú)誘導(dǎo)腫瘤生長(zhǎng)顯著降低和輕微延遲，而AFP-DCs和表達(dá)CD40l的DCs聯(lián)合具有協(xié)同作用，與Th1細(xì)胞因子水平增加，細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)和腫瘤凋亡相關(guān)。此外，DC疫苗聯(lián)合PD-1抑制劑治療的原位肝癌小鼠模型顯示出比單藥治療更長(zhǎng)的總生存期，并通過(guò)誘導(dǎo)凋亡使腫瘤體積更大的縮小。來(lái)自臨床試驗(yàn)的數(shù)據(jù)表明，最有希望的策略是與ICI的聯(lián)合，可能代表了黑色素瘤和前列腺癌的潛在治療。

對(duì)包含3,756例患者的22項(xiàng)研究進(jìn)行的一項(xiàng)薈萃分析報(bào)告，細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK)的DC免疫療法聯(lián)合各種標(biāo)準(zhǔn)治療可改善患者預(yù)后。DC-CIK療法是指來(lái)源于患者的單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)活化、擴(kuò)增、修飾后介導(dǎo)CIK活化，主要為CD3 CD56 Ⅱ型殺傷T淋巴細(xì)胞(NKTs)。DC-CIK療法最近在一個(gè)小隊(duì)列的HCC患者中進(jìn)行了研究(n=36)，其中負(fù)載CD24(癌癥干細(xì)胞的標(biāo)志物)的DC細(xì)胞能夠降低血清Treg濃度，并導(dǎo)致CD3 、CD4 和CD56 標(biāo)志物的增加，并改善生存。本研究強(qiáng)調(diào)了DC-CIK療法可以改變免疫平衡，在長(zhǎng)期控制腫瘤進(jìn)展方面具有潛在的治療獲益。

DC介導(dǎo)的抗原交叉呈遞功能障礙和隨后的T細(xì)胞抑制是腫瘤免疫逃逸的核心機(jī)制。過(guò)繼性DC免疫療法和基于DC的疫苗是增強(qiáng)DC/T細(xì)胞對(duì)話和恢復(fù)高效抗腫瘤應(yīng)答HCC的有前景的免疫策略(圖5B)。然而，需要強(qiáng)調(diào)的是，這些療法是基于DCs的最佳成熟狀態(tài)、腫瘤抗原的選擇、劑量和給藥途徑。

NK細(xì)胞進(jìn)行殺傷

NK細(xì)胞是一種顆粒狀的CD3 -淋巴細(xì)胞群，可觸發(fā)針對(duì)病原體和惡性細(xì)胞的直接固有免疫反應(yīng)。它們約占人外周血淋巴細(xì)胞的10%，并細(xì)分為兩個(gè)主要群體:免疫調(diào)節(jié)劑(CD56 bright /CD16 -)亞群和細(xì)胞毒性(CD56 dim /CD16 )亞群。NK細(xì)胞表達(dá)抑制性受體，如抑制性殺傷免疫球蛋白樣受體(iKIRs)和c型凝集素樣受體NKG2A，分別結(jié)合MHC-I和非經(jīng)典MHC-I復(fù)合物HLA-E。細(xì)胞上缺乏這些配體會(huì)與活化的NK受體(NKp30、NKp46、NKp44、NKG2D和NKG2C)結(jié)合，這些受體與感染或腫瘤轉(zhuǎn)化細(xì)胞上表達(dá)的假定配體結(jié)合 (圖6A)。外周血NK細(xì)胞的高細(xì)胞毒活性與癌癥風(fēng)險(xiǎn)降低呈正相關(guān)。樹(shù)突狀細(xì)胞在NK細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤活性中也發(fā)揮著重要的作用，通過(guò)直接接觸和大量的炎癥細(xì)胞因子(IL-15, IL-12, IL-18)促進(jìn)NK細(xì)胞增殖，刺激細(xì)胞因子產(chǎn)生和誘導(dǎo)細(xì)胞殺傷活性。

肝臟NK細(xì)胞，尤其是富含免疫調(diào)節(jié)劑CD56 bright (CXCR6 CCR5 CD69 )亞群的NK細(xì)胞，代表了肝內(nèi)淋巴細(xì)胞中最豐富的群體(高達(dá)50%)，而浸潤(rùn)HCC的NK細(xì)胞表達(dá)記憶樣NK細(xì)胞標(biāo)志物，如KLRC1和KLRC2。在人肝癌中，高數(shù)量的NK和CD8 T細(xì)胞預(yù)示著疾病早期階段較好的預(yù)后，并與凋亡腫瘤細(xì)胞呈正相關(guān)。盡管如此，NK細(xì)胞通常會(huì)失去抗腫瘤特性。在Ⅲ期HCC患者(n=110)中，外周血和肝臟CD56 dim NK細(xì)胞的頻率降低，而免疫調(diào)節(jié)劑NK細(xì)胞的頻率增加(156)。腫瘤內(nèi)的CD56 dim NK細(xì)胞表達(dá)免疫檢查點(diǎn)分子PD-1和NKG2A，與不良預(yù)后相關(guān)(n=207) (圖6A)。在體外，阻斷IL-10特異性地抑制了NK細(xì)胞中NKG2A的表達(dá)，表明靶向IL-10可以通過(guò)逆轉(zhuǎn)NK細(xì)胞耗竭來(lái)恢復(fù)免疫。此外，MDSCs和腫瘤細(xì)胞通過(guò)NKp30對(duì)NK細(xì)胞產(chǎn)生抑制作用。來(lái)自HCC組織的單核細(xì)胞與循環(huán)中的NK細(xì)胞一起孵育，導(dǎo)致短暫的活化，然后通過(guò)CD48/2B4對(duì)話觸發(fā)與細(xì)胞死亡相關(guān)的強(qiáng)烈耗竭。最后，索拉非尼在體外和荷瘤小鼠中通過(guò)巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子(IL-12,IL-18, IL-1β)誘導(dǎo)NK細(xì)胞活化，提示增強(qiáng)NK功能可能是索拉非尼抗腫瘤作用的機(jī)制?？偟膩?lái)說(shuō)，在肝癌中，NK細(xì)胞由于其不同亞群之間的失衡而失去抗腫瘤功能，促使免疫調(diào)節(jié)亞群劫持免疫監(jiān)視。這些研究為NK介導(dǎo)的治療策略開(kāi)辟了新的途徑，包括活化NK細(xì)胞的過(guò)繼轉(zhuǎn)移、給予激活NK細(xì)胞功能的分子，以及使用阻斷抑制性受體與其配體之間相互作用的抗體。

作為免疫治療的NK細(xì)胞過(guò)繼轉(zhuǎn)移需要其體外擴(kuò)增和隨后的強(qiáng)體內(nèi)活性、持久性和細(xì)胞毒性。NK細(xì)胞可來(lái)源于干細(xì)胞、健康供者的外周血NK細(xì)胞(異基因狀態(tài))、患者(自體狀態(tài))或NK-92細(xì)胞系。有趣的是，注射來(lái)自外周血的同種異體NK細(xì)胞聯(lián)合HCC冷凍消融改善了整體免疫功能，降低了AFP的表達(dá)，并與較長(zhǎng)的無(wú)進(jìn)展生存期相關(guān)(n=61)。在兩項(xiàng)III期臨床試驗(yàn)中，NK細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷(CIK)療法耐受性良好，改善了總生存期(n=200;n = 270)。最近，一項(xiàng)I期研究報(bào)告了使用同種異體CIK預(yù)防肝移植后HCC復(fù)發(fā)(n=18, NCT01147380)。類似地，人NK-92細(xì)胞系表現(xiàn)出高細(xì)胞毒活性，并且可以在良好的制造條件下擴(kuò)增，當(dāng)注射到患者體內(nèi)時(shí)顯示出有希望的抗腫瘤反應(yīng)。在13例難治性肺癌患者中，兩次注射NK-92細(xì)胞均足以引發(fā)抗腫瘤反應(yīng)，且未觀察到長(zhǎng)期副作用，表明它們可作為一種有前景的治療方法(171例)。此外，經(jīng)遺傳修飾以表達(dá)嵌合受體NKG2D-CD3ζ-DAP10(分別包括受體、信號(hào)結(jié)構(gòu)域和信號(hào)銜接子)的同種異體NK細(xì)胞在體外和免疫缺陷荷瘤小鼠中被證明可增強(qiáng)抗HCC細(xì)胞毒性。

近年來(lái)，嵌合抗原受體CAR-T細(xì)胞的出現(xiàn)為癌癥治療帶來(lái)了革命性的變化。簡(jiǎn)而言之，CAR是由一種人工修飾的融合蛋白組成，該融合蛋白結(jié)合了細(xì)胞外抗原識(shí)別域、間隔區(qū)和跨膜區(qū)，并與廣泛的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)域融合。CAR-NK細(xì)胞現(xiàn)在被用于提高NK細(xì)胞的靶向性和療效。在肝癌中，使用CAR修飾的NK-92細(xì)胞特異性靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 (GPC3)陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞。最近，NKG2D-CAR-NK細(xì)胞能夠延緩3例化療難治性轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌患者的結(jié)直腸癌進(jìn)展，這提示使用CAR-NK細(xì)胞治療患者的可能性 (圖6B)。

  NK細(xì)胞在HCC中的功能挽救可能代表了新的免疫治療的另一種策略。HCC患者循環(huán)NK細(xì)胞的代謝缺陷和功能受損可部分歸因于TGF-β信號(hào)。用抗TGF-β劑孵育健康供者的NK細(xì)胞可部分恢復(fù)NK細(xì)胞的功能缺陷，表明TGF-β可能是一個(gè)合適的免疫治療靶點(diǎn)。盡管IL-15具有潛在毒性，但由于其在NK細(xì)胞增殖、存活和細(xì)胞毒性中的作用，也有人提出將其作為癌癥治療的潛在候選藥物 (圖6B)。另外，在腫瘤發(fā)生過(guò)程中增強(qiáng)NK細(xì)胞介導(dǎo)的抗體依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)可能是一種激活NK細(xì)胞并殺傷腫瘤細(xì)胞的方法。雙特異性殺傷細(xì)胞銜接器(bispecific killer cell engagers, BiKEs)目前有很大的期望，它由兩個(gè)抗體片段組成，一個(gè)識(shí)別腫瘤抗原，另一個(gè)識(shí)別NK細(xì)胞上的CD16a，使它們更接近并形成免疫突觸，從而誘導(dǎo)NK細(xì)胞的殺傷功能。

新NK細(xì)胞群的發(fā)現(xiàn)使我們能夠推測(cè)，特異性抑制免疫調(diào)節(jié)劑NK亞群可能具有治療潛力。培養(yǎng)的CD96 NK細(xì)胞低表達(dá)穿孔素和顆粒酶B，并伴有PD-1、NKG2A、IL-10和TGF-β的表達(dá)。然而，通過(guò)阻斷CD96及其配體CD155之間的相互作用，在體外逆轉(zhuǎn)NK細(xì)胞的耗竭可以恢復(fù)NK細(xì)胞的細(xì)胞毒性。與其他免疫抑制受體共同靶向CD96可能提供更強(qiáng)大的抗腫瘤免疫應(yīng)答。最近，人源化抗NKG2A抗體monalizumab通過(guò)增強(qiáng)NK細(xì)胞和CD8 T細(xì)胞促進(jìn)的腫瘤免疫，在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中顯示出良好的療效。最后，除了其他抗腫瘤作用，瑞戈非尼還抑制了肝癌細(xì)胞系中ADAM9和ADAM10的表達(dá)，導(dǎo)致膜上MICA NKG2D -配體)的表達(dá)升高和MICA分泌水平降低，從而導(dǎo)致更高的細(xì)胞毒性NK細(xì)胞活性。瑞戈非尼與NK細(xì)胞治療策略的聯(lián)合應(yīng)用有可能增強(qiáng)瑞戈非尼的抗腫瘤作用。

 利用NK抗腫瘤活性作為一種新的免疫治療方法，在實(shí)體腫瘤和血液系統(tǒng)惡性腫瘤中顯示出有前景的效果。所有這些靶向NK細(xì)胞的策略單獨(dú)使用或與其他治療方法聯(lián)合使用，有望增加腫瘤部位NK細(xì)胞的數(shù)量和活化。

T細(xì)胞是抗腫瘤的領(lǐng)頭羊

 在肝癌中，CD8 和CD4 T細(xì)胞分別在腫瘤內(nèi)和瘤周區(qū)域富集。腫瘤內(nèi)低水平的Treg和高數(shù)量的活化CD8 T細(xì)胞與患者的良好預(yù)后相關(guān)(n=302)。在HCC中，Treg細(xì)胞介導(dǎo)T細(xì)胞功能障礙，它們?cè)谀[瘤內(nèi)的存在與較差的預(yù)后相關(guān)。最近，scRNAseq分析了6例HBV treatment-na?ve HCC患者(190例)的T細(xì)胞多樣性。耗竭的CD8 T細(xì)胞(PDCD1 CTLA4 )和Tregs (TIGIT CTLA4 )在腫瘤內(nèi)富集并表達(dá)LAYLIN (LAYN)抑制標(biāo)志物。有趣的是，TCR測(cè)序顯示，在血液和正常肝組織中，10%的CD8 T細(xì)胞攜帶克隆性TCR，而在腫瘤中達(dá)到30%。根據(jù)軌跡分析，耗竭的CD4 和CD8 T細(xì)胞分別與表達(dá)GZMA和GZMK標(biāo)記的中間群體密切相關(guān)，而不是與效應(yīng)群體密切相關(guān)，這表明潛在的治療策略更傾向于激活而不是耗竭。不同的CD4 T細(xì)胞群，包括Th1, Th2, Th17和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，可以被特定的細(xì)胞因子和趨化因子的平衡誘導(dǎo)，包括TGF-β和IL-6。

在HCC中，PD-1及其配體PD-L1/2的表達(dá)已被深入研究。在生理?xiàng)l件下，它們的表達(dá)是一種防御機(jī)制，以防止自身反應(yīng)性T細(xì)胞的激活和健康細(xì)胞的死亡。對(duì)HCC的開(kāi)拓性研究表明，CD8 T效應(yīng)細(xì)胞上的PD-1表達(dá)增加，并且PD-1與表達(dá)PD-L1/2的腫瘤相互作用，從而阻斷T細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)、增殖和細(xì)胞因子分泌。在HBV感染患者隊(duì)列中，隨著疾病進(jìn)展，循環(huán)PD-1 CD8 T細(xì)胞的頻率增加。CD8 T細(xì)胞通過(guò)IFN γ依賴方式誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞表達(dá)PD-L1，進(jìn)而促進(jìn)T細(xì)胞凋亡。具有離散的PD1高表達(dá)細(xì)胞群的HCC更具侵襲性，但預(yù)計(jì)對(duì)抗PD1治療有應(yīng)答 (圖7A)。2018年，James P. Allison和Tasuku Honjo因發(fā)現(xiàn)免疫檢查點(diǎn)(即癌癥免疫治療的靶點(diǎn))而被授予諾貝爾生理學(xué)/醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。針對(duì)免疫檢查點(diǎn)(如PD-1和CTLA-4)的抗體可破壞共抑制性T細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)，從而重新激活針對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫應(yīng)答。針對(duì)PD-1(納武利尤單抗和帕博利珠單抗)和PD-L1(阿替利珠單抗、durvalumab和阿維魯單抗)的ICI已經(jīng)在包括HCC患者的一系列臨床試驗(yàn)中進(jìn)行了測(cè)試。最近一項(xiàng)包含8項(xiàng)試驗(yàn)的薈萃分析顯示，與非病毒相關(guān)的HCC相比，ICIs在病毒性肝炎患者中更有效，而在接受TKI/抗VEGF治療的患者中，在病因?qū)W方面沒(méi)有觀察到差異。此外，接受抗PD1或抗PDL1治療的兩個(gè)NASH驅(qū)動(dòng)的HCC隊(duì)列顯示，與其他病因的患者相比，總生存期縮短，這強(qiáng)化了NASH驅(qū)動(dòng)的HCC似乎對(duì)免疫治療反應(yīng)較差的假設(shè)。鑒于本研究中NAFLD患者數(shù)量相對(duì)較少(198例)，我們?nèi)孕枰罢靶则?yàn)證來(lái)加強(qiáng)這些數(shù)據(jù)。有趣的是，與這項(xiàng)工作一致，Dudek等發(fā)現(xiàn)，在膽堿缺乏的高脂飲食(CD- HFD)小鼠模型和人類NASH組織中，非常規(guī)的駐地活化和耗竭的肝臟CXCR6 PD1 CD8 T細(xì)胞增加:這些細(xì)胞參與組織的自身攻擊，并可能通過(guò)加強(qiáng)慢性肝損傷促進(jìn)HCC發(fā)展。

大多數(shù)肝癌不富集炎癥TME反應(yīng)，因此構(gòu)成了一大類對(duì)ICI可能幾乎沒(méi)有反應(yīng)的腫瘤。免疫活性肝癌的特征是活躍的輔助性CD4 T細(xì)胞和細(xì)胞毒性CD8 T細(xì)胞浸潤(rùn)，易對(duì)ICI產(chǎn)生應(yīng)答。相反，免疫耗竭的HCC與CD8 T細(xì)胞耗竭、Treg細(xì)胞增加和NK細(xì)胞激活劑下調(diào)相關(guān)。這一組與增殖祖細(xì)胞亞類和CTNNB1突變亞類G5-G6重疊。我們的實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)報(bào)道，CTNNB1突變的腫瘤通過(guò)CCL5細(xì)胞因子的減少發(fā)生免疫逃逸和對(duì)ICI的耐藥，這損害了DC募集和導(dǎo)致無(wú)效的CD8 T細(xì)胞腫瘤清除。最后，放療增強(qiáng)了腫瘤的免疫原性，其與ICI的聯(lián)合正在被評(píng)估用于HCC (NCT03203304, NCT04611165, NCT03482102)(203)。綜上所述，顯然只有一部分患者可從免疫治療中獲益，因此需要確定與ICI應(yīng)答的穩(wěn)健預(yù)測(cè)因素相關(guān)的疾病進(jìn)展標(biāo)志物，以及將耐藥腫瘤轉(zhuǎn)化為有應(yīng)答腫瘤的聯(lián)合策略。

 針對(duì)特異性TAA的CD8 T細(xì)胞應(yīng)答被認(rèn)為是潛在的免疫抗腫瘤力量，但它們?cè)?/span>HCC中沒(méi)有很好地?cái)U(kuò)增，提示其誘導(dǎo)效率低和抗原識(shí)別受限。事實(shí)上，在肝細(xì)胞癌患者中，盡管顆粒酶B和效應(yīng)細(xì)胞因子水平低，但TAA特異性CD8 T細(xì)胞(PD-1 TIM3 LAG3 )已被描述為活化標(biāo)志物上調(diào)。有趣的是，接受射頻消融治療的患者表現(xiàn)出TAA特異性T細(xì)胞反應(yīng)，與MDSCs減少和HCC復(fù)發(fā)減少相關(guān)。在HCC中，AFP是研究最多的TAA，因?yàn)?/span>AFP的CTL表位在腫瘤發(fā)生的早期階段被鑒定。在75%的HCC患者(207例)中，AFP被轉(zhuǎn)錄激活并高表達(dá)，血清AFP水平被用作疾病的生物標(biāo)志物，因?yàn)樗c生存期呈負(fù)相關(guān)(208例)?；?/span>AFP肽的免疫在一個(gè)小隊(duì)列的患者中只顯示出適度的臨床反應(yīng)。經(jīng)HLA-A2/AFP復(fù)合物特異性小鼠TCR轉(zhuǎn)導(dǎo)的人T細(xì)胞可識(shí)別HLA-A2 AFP HepG2細(xì)胞，在體外和荷瘤免疫抑制小鼠中導(dǎo)致細(xì)胞因子產(chǎn)生和腫瘤死亡。一項(xiàng)正在進(jìn)行中的1期臨床試驗(yàn)(NCT03132792)正在評(píng)估過(guò)繼轉(zhuǎn)移識(shí)別HLA-A*02限制性AFP158-166肽FMNKFIYEI的工程T細(xì)胞的安全性。雖然在歐洲和北美，HLA-A2是最常見(jiàn)的HLA-A等位基因，但在亞洲并不常見(jiàn)。因此，我們?cè)O(shè)計(jì)了針對(duì)AFP2-11 -HLA-A*24:02限制性肽段KWVESIFLIF (AFP2-11)的特異性KWV3.1-TCR，該肽段能夠殺傷AFP HLA-A*24:02 腫瘤細(xì)胞株。最近，微波消融治療HCC患者(n=23)發(fā)現(xiàn)30%的患者通過(guò)增強(qiáng)TAA產(chǎn)生新的或增強(qiáng)的腫瘤特異性免疫反應(yīng)。這一緩解與長(zhǎng)期生存相關(guān)，因此支持局部消融聯(lián)合免疫治療。此外，HCC-TAAs如GPC3和AFP也正在測(cè)試作為CAR-T的靶點(diǎn)。在終末期HCC患者中，輸注自體HBV特異性CAR-T細(xì)胞能夠靶向表達(dá)HBsAg的HCC細(xì)胞，而不會(huì)加重肝臟炎癥或毒性。GPC3- CAR - T細(xì)胞能夠在患者來(lái)源的異種移植中清除GPC3 HCC細(xì)胞和腫瘤，最近已在Ⅰ期臨床試驗(yàn)中驗(yàn)證了其在晚期GPC3 HCC患者中的安全性和潛在療效(NCT02395250和NCT03146234, n=13)。通過(guò)CRISPR/Cas9干擾PD-1或共表達(dá)共刺激分子ICOSL-41BB的方式制備了第二代和第三代CAR-T細(xì)胞(圖7B)。兩者都提高了CAR-T細(xì)胞在荷瘤小鼠體內(nèi)的持久性和浸潤(rùn)性。此外，在兩個(gè)GPC3 ASGR1 HCC異種移植模型中，針對(duì)GPC3和去乙?；堑鞍资荏w(ASRG1)的雙靶向CAR-T細(xì)胞發(fā)揮了優(yōu)于單獨(dú)GPC3-CAR-T細(xì)胞的抗癌活性和持久性?；?/span>NKG2D的CAR-T細(xì)胞在體外和NKG2DL 肝癌異種移植中顯示出對(duì)NKG2DL 肝癌細(xì)胞的有效破壞。一項(xiàng)II期臨床試驗(yàn)(NCT02541370)最近報(bào)道，靶向腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物CD133的CAR-T-133細(xì)胞在晚期HCC患者中表現(xiàn)出抗腫瘤活性和可控的安全性(n=21)。最后，兩種CD19-CAR-T療法被FDA批準(zhǔn)用于治療復(fù)發(fā)性和難治性前b細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病和彌漫性大b細(xì)胞淋巴瘤，作為首批基因療法的例子。

B細(xì)胞聯(lián)合起來(lái)抑制或促進(jìn)癌癥

 B淋巴細(xì)胞在ADCC和抗原呈遞中具有不同的功能，越來(lái)越多的證據(jù)表明，通過(guò)產(chǎn)生細(xì)胞因子，B淋巴細(xì)胞在調(diào)節(jié)固有和適應(yīng)性免疫中發(fā)揮另外的作用。雖然B細(xì)胞曾被認(rèn)為是HCC的被動(dòng)參與者，但腫瘤浸潤(rùn)B細(xì)胞(tumor-infiltrating B cells, TIBs)的作用仍存在爭(zhēng)議。

 腫瘤邊緣區(qū)域CD20 B細(xì)胞的增加與良好的預(yù)后相關(guān)，與較小的腫瘤大小、無(wú)血管侵犯和CD8 T淋巴細(xì)胞密度增加相關(guān)，尤其是在HBV相關(guān)的HCC (n=120)。同樣，在兩個(gè)獨(dú)立的HCC隊(duì)列(n = 619)中，高密度B細(xì)胞亞群延長(zhǎng)了生存期。漿細(xì)胞是最豐富的群體，提示B細(xì)胞反應(yīng)發(fā)生在TME中。此外，定義為CD20 - CD79α 細(xì)胞的漿細(xì)胞與較好的預(yù)后顯著相關(guān)。此外，TIBs的密度與T細(xì)胞和NK細(xì)胞的數(shù)量和活化狀態(tài)呈正相關(guān)，并與腫瘤細(xì)胞活力的降低相吻合(n=112)。TIBs密度與腫瘤細(xì)胞凋亡密度呈正相關(guān)，與腫瘤細(xì)胞增殖呈負(fù)相關(guān)。此外，對(duì)全癌癥轉(zhuǎn)錄組(n=2,158例患者)進(jìn)行的無(wú)監(jiān)督基因表達(dá)分析顯示，CD20細(xì)胞和CD79a細(xì)胞的浸潤(rùn)與患者生存期延長(zhǎng)和免疫球蛋白分泌相關(guān)?；诿庖呓M織化學(xué)的深入研究表明，非典型CD20 記憶性B細(xì)胞(IgD - IgG CD27 - CD38 -)具有腫瘤殺傷潛能，并與CD8 T細(xì)胞合作，與良好的預(yù)后相關(guān)。這些結(jié)果提示B細(xì)胞亞群可能增強(qiáng)肝癌的抗腫瘤作用。使用二乙基亞硝胺(DEN)誘導(dǎo)的肝癌小鼠模型表明，T細(xì)胞阻止初始腫瘤形成，而B細(xì)胞限制生長(zhǎng)。缺乏B細(xì)胞的Igh6 -/-小鼠比WT小鼠發(fā)生更多更大的腫瘤。用CD20抗體去除B細(xì)胞導(dǎo)致移植的肝癌細(xì)胞(Hepa1-6)在小鼠體內(nèi)的腫瘤生長(zhǎng)增強(qiáng)，主要是由于CD4 T細(xì)胞活化減少。此外，CD20清除還與CD8 T細(xì)胞上PD-1表達(dá)增強(qiáng)相關(guān)，表明CD8 T細(xì)胞活化可受到CD20 B細(xì)胞的影響 (圖8A)。

B細(xì)胞也可能發(fā)揮促腫瘤作用。最近的一項(xiàng)研究報(bào)道，在HCV誘導(dǎo)的HCC患者中，腫瘤內(nèi)CD20 B細(xì)胞的高浸潤(rùn)與低分化和低無(wú)病生存率相關(guān)。在肝癌小鼠模型(Mdr2 - / -小鼠)的肝臟中，B細(xì)胞分泌促炎細(xì)胞因子如TNF-α。因此，在慢性炎癥驅(qū)動(dòng)的HCC小鼠模型中，IgA B淋巴細(xì)胞通過(guò)積極對(duì)抗CD8 (PD-1 Tim3 ) T細(xì)胞功能來(lái)支持腫瘤生長(zhǎng)。PD-L1阻斷足以降低肝臟IgA IL-10 細(xì)胞豐度和增加CD8 T細(xì)胞。其他B淋巴細(xì)胞也參與了HCC的進(jìn)展，包括B調(diào)節(jié)性細(xì)胞(Bregs)， Bregs通過(guò)產(chǎn)生IL-10發(fā)揮強(qiáng)大的免疫抑制功能，其作用正在被深入研究。在HBV相關(guān)的HCC患者(n=28)中，CD4 T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性被Tim-1 IL -10表達(dá)的B細(xì)胞負(fù)性控制。Breg群體在人類中的特征為CD19 CD24 hi CD38 hi，在小鼠中的特征為CD19 CD21 hi CD23 hi IgM hi CD24 hi?？傊?，Bregs在HCC TME中富集，并與腫瘤進(jìn)展相關(guān)。與健康人相比，HCC患者(n= 80)循環(huán)中Bregs聚集，而B記憶細(xì)胞(CD24 CD38 - /CD19 )減少。在嚴(yán)重的聯(lián)合免疫缺陷(SCID)異種移植小鼠中，B細(xì)胞和T細(xì)胞缺乏，注射Bregs通過(guò)遷移到腫瘤和產(chǎn)生IL-10影響HCC腫瘤的生長(zhǎng)。給予抗CD154 (CD40L)抗體可抑制腫瘤生長(zhǎng)。在Bregs和HCC細(xì)胞共培養(yǎng)中，抑制CD40/CD40L軸導(dǎo)致TGF-β1和IL-10的分泌減少，而TNF-α的分泌增加，表明Bregs促進(jìn)了一個(gè)強(qiáng)大的抗炎環(huán)境。另一個(gè)Breg亞群在人肝癌中的特征是高水平的PD-1和IL-10的表達(dá)(CD5 hi CD24?/ CD27 hi/ CD38 dim)。PD-1高表達(dá)B細(xì)胞比例較高的患者在12個(gè)月后出現(xiàn)早期復(fù)發(fā)。本研究提示PD-1高表達(dá)的B細(xì)胞可能被PD-L1 單核/巨噬細(xì)胞激活，從而產(chǎn)生IL-10，隨后CD8 T細(xì)胞失活。在另一個(gè)人肝癌隊(duì)列(n=35)中，50%的B細(xì)胞表現(xiàn)出CD20 FcγRII(CD32)低/?活化表型，并且它們?cè)谀[瘤中的聚集與患者的腫瘤-淋巴結(jié)-轉(zhuǎn)移分期呈正相關(guān)。有趣的是，這一特殊的B細(xì)胞亞群的激活是由半成熟的樹(shù)突狀細(xì)胞協(xié)調(diào)的CD95L依賴方式觸發(fā)的。然而，CD20 FcγRII高亞群是小鼠產(chǎn)生IL-10的主要來(lái)源。事實(shí)上，靶向CD95軸可以抑制Breg的活化和IL-10的產(chǎn)生。一項(xiàng)基于索拉非尼治療晚期HCC的臨床試驗(yàn)(n=62)表明，外周血Breg比例降低的患者預(yù)后較好。這些數(shù)據(jù)提示，外周血中的breg比例可能預(yù)示索拉非尼的療效(圖8B)。

B細(xì)胞亞群具有高度異質(zhì)性，部分B細(xì)胞亞群在腫瘤微環(huán)境中共存。未來(lái)需要對(duì)B細(xì)胞譜進(jìn)行進(jìn)一步研究，以確定潛在的靶向亞群和分子，并在未來(lái)的臨床試驗(yàn)中探索治療方法。

總結(jié)

HCC腫瘤呈現(xiàn)出腫瘤細(xì)胞與其他細(xì)胞群相互作用的復(fù)雜環(huán)境。TME由一系列免疫細(xì)胞、癌癥相關(guān)成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞組成，它們通過(guò)生長(zhǎng)因子促進(jìn)癌細(xì)胞生長(zhǎng)，并促進(jìn)增殖、免疫逃逸和血管生成。單細(xì)胞RNA測(cè)序研究最近強(qiáng)調(diào)，與HCC腫瘤細(xì)胞相比，肝臟TME在患者之間表現(xiàn)出更一致的模式，這提示治療TME可能是比單獨(dú)治療腫瘤細(xì)胞更好的策略，以繞過(guò)腫瘤的變異性和多樣性。這一觀點(diǎn)進(jìn)一步得到以下事實(shí)的支持:HCC中主要的突變驅(qū)動(dòng)基因仍然無(wú)法被藥物治療。理解TME的作用越來(lái)越受到關(guān)注，因?yàn)樗谂R床結(jié)局和治療反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用。新型免疫療法的出現(xiàn)已經(jīng)開(kāi)始改變肝癌治療的格局。去年，阿替利珠單抗(抗PD- L1)和貝伐珠單抗(抗VEGF)聯(lián)合治療被美國(guó)FDA批準(zhǔn)作為晚期HCC的一線治療，代表著HCC治療的新時(shí)代。然而，只有免疫活性的HCC亞型被認(rèn)為對(duì)治療有反應(yīng)，并且沒(méi)有特異性的血液標(biāo)志物可以輕易識(shí)別有反應(yīng)的患者。在這種情況下，了解致癌通路和免疫反應(yīng)之間的相互作用對(duì)于提高當(dāng)前和未來(lái)治療的療效至關(guān)重要。此外，了解不同免疫細(xì)胞之間以及免疫細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞(如HSC或CAFs)之間的相互作用，對(duì)于開(kāi)發(fā)腫瘤微環(huán)境的治療至關(guān)重要。例如，根據(jù)不同的環(huán)境，衰老的HSC可以通過(guò)與免疫系統(tǒng)的環(huán)境依賴性相互作用來(lái)限制或促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。在未來(lái)，精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)將徹底改變HCC的治療，越來(lái)越多的證據(jù)表明，接受個(gè)性化治療的患者將獲得更好的臨床結(jié)局。

文獻(xiàn)來(lái)源：Donne R, Lujambio A. The Liver Cancer Immune Microenvironment: Therapeutic Implications for Hepatocellular Carcinoma. Hepatology. 2022 Aug 21.