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沙門氏菌常用培養(yǎng)基的配方及原理!

 食品微生物檢測 2023-05-05 發(fā)布于山東

食品微生物檢測


沙門氏菌簡介


沙門氏菌病的病原體,屬腸桿菌科,革蘭氏陰性腸道桿菌。已發(fā)現(xiàn)的近一千種(或菌株)。菌體大小(0.6~0.9)×(1~3)微米無芽胞,一般無莢膜,除雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌外,大多有周身鞭毛。


 


檢測流程



 


培養(yǎng)基原理


緩沖蛋白胨水Buffered Peptone Water

用途:用于沙門氏菌、阪崎桿菌前增菌培養(yǎng)。

配方:(g/L)

反應原理: 蛋白胨提供菌體生長所需的碳源、氮源等營養(yǎng)元素; 

氯化鈉維持體系滲透壓平衡; 

磷酸鹽作為緩沖劑。 

目的食品加工中采用的各種工藝冷凍、加 熱干燥、高鹽使得細胞不同程度的受損BPW 作為非選擇型的增菌培養(yǎng)基,其較高的pH的緩沖體系有利于受損細胞的恢復到穩(wěn)定的生理狀態(tài)。

四硫磺酸鹽煌綠增菌液基礎(TTB) Tetrathionate Broth Base

用途:用于沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng),需加入煌綠和碘液。

配方:(g/L)

基礎液:

反應原理蛋白胨、牛肉膏氮源、碳源及其他營養(yǎng)元素; 

氯化鈉維持培養(yǎng)基體系滲透壓; 

CaCO3中和吸收有毒性的代謝物質主要是培養(yǎng) 基酸堿度的變化對菌生長的影響); 

牛膽鹽抑制革蘭氏陽性菌的生長;

硫代硫酸鈉經(jīng)氧化生成四硫磺酸鈉對大腸菌群有抑制作用沙門氏菌可產(chǎn)四硫磺酸酶分解四硫磺酸,因而能在此培養(yǎng)基中生長繁殖。

亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)Selenite Cystine Broth

用途:用于沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng)。

配方:(g/L)

反應原理蛋白胨碳源氮源維生素及礦物質元素; 

乳糖作為碳水化合物通過代謝提供能量; 

亞硒酸鹽抑制革蘭氏陽性菌及除沙門氏菌以 外的大多數(shù)革蘭氏陰性腸道菌 

L-半胱氨酸培養(yǎng)基中作為還原劑

用法除亞硒酸氫鈉和L胱氨酸外,將各成分加入蒸餾水中,煮沸溶解,冷至55以下,以無菌操作加入亞硒酸氫鈉和1g/L L-胱氨酸溶液10mL(稱取0.1 gL-胱氨酸,加1mol/L氫氧化鈉溶液15mL,使溶解,再加無菌蒸餾水至100 mL即成,如為DL-胱氨酸,用量應加倍)。搖勻,調節(jié)pH至7.0士0.2。

亞硫酸鉍瓊脂(BS)(GB4789)

配方:(g/L)

反應原理蛋白胨牛肉粉氮源碳源、維生素及礦物質等營養(yǎng)元素;葡萄糖作為碳水化合物提供細菌代謝所需的能量; 

磷酸鹽緩沖培養(yǎng)環(huán)境pH; 

亞硫酸鈉檸檬酸鉍銨反應生成亞硫酸鉍,

煌綠和亞硫 酸鉍能抑制大腸桿菌、變形桿菌和革蘭氏陽性菌的生長, 但是對傷寒、副傷寒等沙門氏菌的生長沒有影響; 傷寒沙門氏菌及其他沙門氏菌能夠利用葡萄糖,亞硫酸鹽還原成硫化物并與硫酸鹽鐵反應使菌落呈黑色;此外還可以將鉍離子還原成金屬鉍,使菌落呈現(xiàn)金屬光澤,從而使沙門氏菌得到分離。 

使用注意事項不可過度加熱;使用前一天配 ,且在48h內(nèi)使用; 傾注平板前需搖勻不能反復溶解平板需避光保存于室溫環(huán)。 

XLD培養(yǎng)基XyloseLysineDeso

用途:選擇性培養(yǎng)基,主要用于分離志賀氏菌屬,亦可用于分離沙門氏菌。

配方:(g/L)

反應原理酵母膏為細菌生長提供維生素和輔助因子; 

木糖、乳糖和蔗糖作為可發(fā)酵的碳源除志賀氏菌外,其 他大多數(shù)腸桿菌均能發(fā)酵木糖; 

賴氨酸可鑒別沙門氏菌;沙門氏菌發(fā)酵木糖產(chǎn)酸形成 酸性環(huán)境有利于產(chǎn)生脫羧酶,沙門氏菌使賴氨酸脫羧從而使培養(yǎng)基的pH值升高向堿性轉變,但這種轉變可因其 他菌發(fā)酵乳糖和蔗糖產(chǎn)生大量的酸而被阻止

堿性條件下,硫代硫酸鈉檸檬酸鐵銨與沙門氏菌產(chǎn)生 的硫化氫反應使菌落的顏色呈黑色;但是酸性條件下這種 反應被抑制 

酚紅作為酸堿指示劑;

氯化鈉維持培養(yǎng)基的滲透壓; 

去氧膽酸鹽抑制革蘭氏陽性菌的生長。 

使用注意事項 使用前一天配制避免過度加熱!室溫避光儲存。 

HE瓊脂

用途:用于沙門氏菌的選擇性分離培養(yǎng)(GB標準)。

配方:(g/L)

反應原理蛋白胨牛肉粉:提供菌體細胞生長所需的氮源、碳源等; 

氯化鈉:維持體系滲透壓平衡; 

膽鹽、去氧膽酸鈉:主要抑制革蘭氏陽性菌的生長; 

蔗糖、水楊素乳糖:作為鑒別系統(tǒng); 

溴麝香草酚藍酸性復紅:作為酸堿指示劑,能把發(fā)酵糖和 不發(fā)酵糖類的細菌區(qū)分開前者為橘黃色菌落,后者為無色; 

檸檬酸鐵銨硫代硫酸鈉分別作為產(chǎn)硫化氫的指示劑和底物能產(chǎn)生硫化氫但不發(fā)酵糖類的沙門氏菌為無色半透明菌落,中心為黑色

使用注意事項本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌,在制備過程中不宜過分加熱,避免降低其選擇性。


 


生化培養(yǎng)基


三糖鐵(TSI)瓊脂Triple Sugar Iron Agar

用途:生化培養(yǎng)基,用于腸桿菌科細菌的生化反應篩選

配方:(g/L)

原理:該培養(yǎng)基含有三種可發(fā)酵的碳源葡萄糖 1g/L、蔗糖10g/L乳糖10g/L),這些碳 源被菌體利用產(chǎn)酸,可使酚紅指示劑變色。另外某些 菌能還原Na2S2O3產(chǎn)生H2S,硫酸亞鐵銨反應生成黑 色的FeS,而使培養(yǎng)基變黑。

尿素瓊脂(pH 7.2)

用途:生化培養(yǎng)基,用于細菌脲酶檢測

配方:(g/L)

原理某些細菌在酸性厭氧環(huán)境,且有賴氨酸底物存在的情況下能誘導產(chǎn)生 賴氨酸脫羧酶,使賴氨酸脫羧產(chǎn)生尸胺,導致培養(yǎng)基變紫,而不產(chǎn)生賴氨酸 脫羧酶的細菌只能代謝葡萄糖產(chǎn)酸,使培養(yǎng)基變黃。 

糖發(fā)酵管

配方:(g/L)

制法:①葡萄糖發(fā)酵管按上述成分配好后,調節(jié)pH。按0.5%加入葡萄糖,分裝于有一個倒置小管的小試管內(nèi),121℃高壓滅菌15min 。

②其他各種糖發(fā)酵管可按上述成分配好后, 分裝每瓶100mL,121℃高壓滅菌15min.另將各種糖類分別配好10%溶液,同時高壓滅菌。將5mL糖溶液加入于100mL培養(yǎng)基內(nèi),以無菌操作分裝小試管。

注:蔗糖不純, 加熱后會自行水解者,應采用過濾法除菌。

試驗方法:從瓊脂斜面上挑取小量培養(yǎng)物接種,于36℃±1℃培養(yǎng), 一般2d~3d。

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