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組織解離酶怎么選?一文教會你!

 優(yōu)寧維 2023-01-03 發(fā)布于上海

不同的組織分離試劑,可以滿足不同的組織樣本(如內(nèi)皮細(xì)胞、結(jié)腸、神經(jīng)系統(tǒng)等)的解離需求,本文就主要針對以下幾種酶及試劑盒產(chǎn)品,為大家介紹不同的組織該選擇什么樣的酶:

膠原酶(Collagenase, type I/ type II/ type IIII/ type IV)
木瓜蛋白酶
DNA酶
神經(jīng)組織分離試劑盒
廣譜組織解離試劑盒

1. 膠原酶(Collagenase)

膠原酶(Collagenase)是一種蛋白酶,來源于溶組織梭菌的膠原酶,可以廣泛應(yīng)用于各種組織的解離,在細(xì)胞培養(yǎng)、間充質(zhì)干細(xì)胞的分離及獲取、3D及類器官培養(yǎng)、單細(xì)胞測序、腫瘤研究領(lǐng)域都有著重要的作用。

根據(jù)不同的酶活性,膠原酶可以被分為不同類型,主要包括:膠原酶I型、II型、III型、IV型,可以用做不同類型組織樣本的解離。
 
1.1膠原酶I型(Collagenase, Type 1)

I型膠原酶含有比較均勻的酶活性(包括膠原酶,酪蛋白酶,梭菌蛋白酶,胰蛋白酶活性),通常用作上皮細(xì)胞、肝、肺、脂肪和腎上腺等組織來源的細(xì)胞的制備。

1.2膠原酶II型(Collagenase, type 2)

II型膠原酶含有更高的梭菌蛋白酶活性,通常用于心臟、骨、肌肉、肝、甲狀腺和軟骨等組織來源的細(xì)胞制備。

1.3膠原酶III型(Collagenase, type 3)

III型膠原酶,次要蛋白酶的含量最低,常用于乳腺細(xì)胞的制備。

1.4膠原酶IV型(Collagenase, type 4)
IV型膠原酶含有較低的胰酶活性,因此可以減少對膜蛋白及受體的損傷。常用于胰島細(xì)胞的制備,或者是需要維持受體完整性的細(xì)胞的制備實(shí)驗。

膠原酶部分產(chǎn)品清單:

產(chǎn)品酶活性貨號規(guī)格
Collagenase, Type 1 (凍干粉) ≥125 units per mg dry weightLS004194100mg
LS0041961g
LS0041975g
Collagenase, Type 2 (凍干粉) ≥125 units per mg dry weightLS004174100mg
LS0041761g
LS0041775g
Collagenase, Type 3 (凍干粉) ≥100 units per mg dry weightLS004180100mg
LS0041821g
LS0041835g
Collagenase, Type 4 (凍干粉) ≥160 units per mg dry weightLS004186100mg
LS0041881g
LS0041895g

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2. 木瓜蛋白酶(Papain)

木瓜蛋白酶是一種半胱氨酸水解酶,在廣泛的條件下是穩(wěn)定和活躍的,甚至可以在高溫的條件下保持酶活性。

木瓜蛋白酶可以用于細(xì)胞培養(yǎng)中的組織解離成單細(xì)胞,用它來進(jìn)行的細(xì)胞分離時會比其他蛋白酶更溫和,因此更適用于皮質(zhì)神經(jīng)元、視網(wǎng)膜和平滑肌的組織分離,尤其適合對神經(jīng)組織進(jìn)行分解。

同時,它還可用于蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)研究中的肽定位;抗體篩選或鑒定中紅細(xì)胞的表面修飾;用IgG和IgM抗體制備Fab片段抗體;對膜蛋白進(jìn)行整體增溶;從純化蛋白多糖中生產(chǎn)糖肽以及酶促傷口的清創(chuàng)。

木瓜蛋白酶部分產(chǎn)品清單:

產(chǎn)品名稱產(chǎn)品描述酶活性貨號規(guī)格
Papain, Suspension 含有0.05M的醋酸鈉的懸液,懸液經(jīng)過兩次結(jié)晶和0.22μm濾網(wǎng)的過濾Activates to ≥ 20 Units per mg proteinLS00312425mg
LS003126100mg
LS0031271g
Papain, Lyophilized 凍干粉,由含醋酸鈉的兩次結(jié)晶懸浮液配制而成。Activates to ≥ 15 Units per mg proteinLS00311825mg
LS003119100mg
LS0031201g
PDS Kit, Papain Vial 凍干粉,經(jīng)過0.22μm膜過濾,在高壓滅菌瓶中進(jìn)行凍干。用5ml EBSS重溶后可以得到每毫升含有20units的papain(溶液中含有1毫摩爾L-cysteine和0.5mm EDTA)Activates to ≥ 100 Units per vialLK0031761 vial
LK0031785 vials

3.  脫氧核糖核酸酶(Deoxyribonuclease I)

牛胰腺脫氧核糖核酸酶(DNase I)是一種內(nèi)切酶,它優(yōu)先分裂與嘧啶核苷酸相鄰的磷酸二酯鍵,產(chǎn)生5 ' -磷酸端多核苷酸,在3 '位置有一個游離羥基。DNase I由外分泌腺體分泌,在胰腺和腮腺中最為豐富。DNase參與細(xì)胞凋亡的過程,并被認(rèn)為在調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)肌動蛋白聚合中發(fā)揮作用。除了在分子生物學(xué)上的應(yīng)用外,DNase I還被用于治療囊性纖維化和系統(tǒng)性紅斑狼瘡

DNaseI通常有以下幾個用途:
1. 去除細(xì)胞培養(yǎng)過程中DNA的含量,可以降低黏度,因此獲得更多的細(xì)胞;
2. 用于生物過程中的DNA移除;
3. 在進(jìn)行RT-PCR前,除去RNA制劑中的基因組DNA;
4. 體外轉(zhuǎn)錄
5. Nick翻譯
6. DNase I足跡分析
7. 肌動蛋白結(jié)合
8. 蛋白質(zhì)與核算的UV交聯(lián)
9. 放射性標(biāo)記
 
DNase I酶部分產(chǎn)品清單:

產(chǎn)品名稱產(chǎn)品描述酶活性貨號規(guī)格
Deoxyribonuclease I 凍干粉,包含glycine固定劑 色譜純化級別≥2,000 Kunitz units per mg dry weightLS0020045 mg  
LS00200620 mg
LS002007100 mg
 凍干粉,包含glycine固定劑 色譜純化級別,特別是對低含量(≤0.0005%)的RNase A 活性成分≥2,000 Kunitz units per mg dry weightLS00633025 ku 
LS006328125 ku
凍干粉 部分純化≥2,000 Kunitz units per mg dry weightLS00213825 mg  
LS002139100 mg
LS0021401 g
凍干粉 部分純化≥1,250 Kunitz units per mg dry weightLS002145 100 mg 
LS0021471 g

4. 神經(jīng)組織分離試劑盒(Papain Dissociation System)

Papain Dissociation System是基于美國科學(xué)家Huettner和Baughman對神經(jīng)細(xì)胞分離方法而研發(fā)出來的一套試劑(J. Neurosci., 6, 3044, 1986)。每個批次都在大鼠脊髓神經(jīng)細(xì)胞分離中進(jìn)行過性能測試,該試劑盒為每個實(shí)驗提供新鮮制備的酶溶液。

該包裝包含足夠的材料分離5個獨(dú)立的組織等分體,每個高達(dá)0.3-0.4立方厘米。對于較大的組織樣本,在每個步驟中按比例準(zhǔn)備較大體積的試劑,并按協(xié)議中所述的相同比例將其組合。

試劑盒內(nèi)容物包括:

Vial 1:含有鈣,鎂,碳酸氫鹽和酚紅的EBSS溶液,此試劑的等分液用于重溶其他小瓶和制備稀釋的抑制劑溶液。

Vial 2:含有L-cysteine和EDTA的木瓜蛋白酶,每盒里包含5 × 100 unit可供一次性使用的小瓶。該試劑是0.22μm的膜過濾并在高壓滅菌瓶中凍干。用5ml EBSS溶液重溶(Vial 1)可得到每毫升 1mM的 L-cysteine和0.5mM EDTA中20units的木瓜蛋白酶溶液。

Vial 3:脫氧核糖核酸酶I (DNase I),5×2000單位,每盒里包含5 × 100 unit可供一次性使用的小瓶。該試劑是0.22μm的膜過濾并在高壓滅菌瓶中凍干。用0.5ml EBSS溶液重溶(Vial 1)可得到每毫升產(chǎn)生2000units的DNase I溶液。

Vial 4:類卵母細(xì)胞蛋白酶抑制劑Ovomucoid protease inhibitor,每包1瓶,重溶后體積為32ml。

該試劑是0.22μm的膜過濾并在高壓滅菌瓶中凍干。用32ml的 EBSS溶液重溶(Vial 1)生成的溶液的有效濃度為每毫升10mg類卵母細(xì)胞抑制劑和10mg白蛋白。

神經(jīng)組織分離試劑盒產(chǎn)品清單:

產(chǎn)品描述規(guī)格貨號
Papain Dissociation System 1 KitLK003150
3 KitsLK003153
Papain Dissociation System(without buffer/EBSS )1 KitLK003160
3 KitsLK003163

5. 組織分離廣譜酶試劑盒(Cell Isolation Optimizing System)

Cell Isolation Optimizing System是一個完整的方法開發(fā)工具包,包含細(xì)胞培養(yǎng)/組織解離實(shí)驗中最常用的酶,并包含了操作、使用和優(yōu)化酶細(xì)胞分離方法的指導(dǎo)、參考資料和方法。適用于需要對不同的組織類型進(jìn)行分離獲得單細(xì)胞,并對科研經(jīng)費(fèi)有要求的實(shí)驗室。該試劑盒提供更經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的選擇

產(chǎn)品清單如下:

產(chǎn)品描述規(guī)格貨號
Cell Isolation Optimizing System 1 BoxLK003200
內(nèi)容物清單

Collagenase,Type 1500 mg dw-
Collagenase,Type 2500 mg dw-
Collagenase,Type 3500 mg dw-
Collagenase,Type 4500 mg dw-
Trypsin500 mg dw-
Hyaluronidase50,000 Units-
Elastase100 mg P-
Papain100 mg P-
Deoxyribonuclease I25 mg dw-
Neutral Protease (Dispase?10 mg dw-
Trypsin Inhibitor100 mg dw-

優(yōu)寧維也為大家提供了《組織分離指南》工具,幫助廣大科研工作者根據(jù)自己的研究樣本類型(如腸、腦、脊髓等),選擇合適的蛋白酶種類及濃度。

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