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1、樣品處理 盡可能縮短解凍時(shí)間，使竟?fàn)幘荷L最少，并減小對(duì)沙門氏菌的損傷致病菌取樣一定要均勻并具有代表性（蛋黃蛋清混勻取樣）。 2、培養(yǎng)基及培養(yǎng)方面 （1）沒有一種培養(yǎng)基可疑準(zhǔn)確無誤的篩選出沙門氏菌，必須選擇多種選擇性培養(yǎng)基同時(shí)篩選，只能說顯色培養(yǎng)基綜合選擇性更強(qiáng)。 （2）試劑和培養(yǎng)基的配置一定要嚴(yán)格按照說明書配置，是否需要高壓滅菌，添加劑用量及培養(yǎng)基保存條件。 （3）有1%沙門氏菌乳糖發(fā)酵陽性，為了避免漏檢乳糖陽性菌必須選擇不依賴乳糖的培養(yǎng)基，目前BS培養(yǎng)基認(rèn)為是最適合的。 （4）BS培養(yǎng)基是分離沙門氏菌的高效培養(yǎng)基，特別適用于傷寒類的沙門氏菌，不是所有的選擇性培養(yǎng)基都能有效分離出傷寒沙門氏菌和副傷寒沙門氏菌，BS是分離傷寒類沙門氏菌的首選培養(yǎng)基。 （5）BS不能高壓，不能過熱溶解，只能在使用前一天配置，保存在陰暗處，48h后失去選擇性，保存不當(dāng)，顏色變淺標(biāo)明已經(jīng)開始減效。 （6）HE不能高壓滅菌，煮沸不能超過1min，水域中冷卻，只能保存一天；XLD平板不能高壓，不能過熱煮沸，保存一天。 （7）TTB的添加劑必須在棕色瓶儲(chǔ)存，不能見光，否則選擇性減弱。TTB有碳酸鈣沉淀，分裝時(shí)一定要搖勻，碳酸鈣作用是消除和吸收有毒代謝產(chǎn)物。TTB加入添加劑后就不能再加熱。 （8)SC種含有亞硒酸氫鈉，劇毒物質(zhì)，使用時(shí)候要注意安全，當(dāng)天使用當(dāng)天配置。 （9）TSI要制備成高柱斜面，有助于結(jié)果判讀 （10）TSI和賴氨酸脫羧酶可以篩選掉大部分非沙門氏菌 （11）典型沙門菌培養(yǎng)基，斜面顯紅色，底端顯黃色，有氣體產(chǎn)生，有90％形成硫化氫，瓊脂變黑。當(dāng)分離到乳糖陽性沙門菌時(shí)，三糖鐵斜面是黃色的，因而要確認(rèn)沙門菌，不應(yīng)僅僅限于三糖鐵培養(yǎng)的結(jié)果。 （12)標(biāo)準(zhǔn)要求的培養(yǎng)時(shí)間要按最長時(shí)間培養(yǎng)，否則會(huì)漏檢風(fēng)險(xiǎn)。 （13）從挑選可疑菌落開始，建議每步都同時(shí)劃線營養(yǎng)瓊脂瓊脂，確保每個(gè)菌落均為純菌。 3、生化反應(yīng) （1）生化反應(yīng)要用純菌落進(jìn)行（從營養(yǎng)瓊脂中挑取單個(gè)菌落制備成適宜濃度的菌懸液）。 （2）多種生化試驗(yàn)同時(shí)測試可以提高檢測效率。 4、血清學(xué)鑒定 （1）血清學(xué)鑒定是沙門氏菌檢驗(yàn)中的重要鑒定方法，包括菌體抗原（O）鑒定、鞭毛抗原（H）鑒定和Vi抗原鑒定。 （2）只需要鑒定某個(gè)菌株是否屬于沙門氏菌，那只需要做O多價(jià)和H多價(jià)血清就可以（大多數(shù)食源性沙門氏菌凝集A-F群O多價(jià)） （3）判定時(shí)應(yīng)該以生化試驗(yàn)結(jié)果為主，在生化試驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行血清學(xué)判定，血清學(xué)的原理是抗原抗體結(jié)合，非沙門氏菌的微生物也有可能帶有沙門的類似抗原的。不可以不做生化只用血清初篩。 （4）血清檢測要使用24h內(nèi)的純菌，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)觀察結(jié)果，并做自凝實(shí)驗(yàn)。 （5）Ｏ血清不凝集時(shí)，將菌株接種在瓊脂量較高的（如2.5％～３％）培養(yǎng)基上再檢查；如果是由于VI抗原的存在而阻止了Ｏ凝集反應(yīng)時(shí)，可挑取菌苔于1ml生理鹽水中做成濃菌液，于酒精燈火焰上煮沸后再檢查。Ｈ抗原發(fā)育不良時(shí)，將菌株接在0.55％～0.65％半固體瓊脂平板的中央，俠菌落蔓延生長時(shí)，在其邊緣部分取菌檢查；或?qū)⒕晖ㄟ^裝有0.3％～0.4％半固體瓊脂的小玻管１～２次，自遠(yuǎn)端取菌培養(yǎng)后再檢查。 （6）凝集不好的放室溫（不要放冰箱）室溫放置1-2天或者傳代一次，可能凝集的要好些。 （7）如果實(shí)驗(yàn)室條件許可建議購置進(jìn)口血清，進(jìn)口血清一般以泰國和丹麥血清為佳，國產(chǎn)和進(jìn)口血清在判讀時(shí)會(huì)有差異。 （8）若實(shí)驗(yàn)室只有國產(chǎn)血清，可以同時(shí)使用兩種廠家產(chǎn)品互相驗(yàn)證。 |
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