王興光  河北省滄州市人民醫(yī)院產(chǎn)前診斷中心

        熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH）是在放射性原位雜交技術的基礎上發(fā)展起來的一種非放射性的分子標記技術。其操作簡單，應用在染色體非整倍體的檢驗中，標本主要有兩種：絨毛組織（或胎兒肌肉組織）和羊水。對于兩種標本的處理過程基本相似（絨毛組織包括剪碎步驟），包括：離心棄上清、低滲（氯化鉀溶液）、預固定（甲醇：冰乙酸為3：1）、固定、雜交探針（然后溫箱過夜）、復染、熒光顯微鏡下計數(shù)等等。

        人類正常染色體核型為：46，XX或46，XY。但某些情況下，會出現(xiàn)染色體數(shù)目及形態(tài)異常，其中染色體形態(tài)異常主要包括易位（如羅伯遜易位）、倒位（可分為臂間倒位和臂內(nèi)倒位）、缺失、重復等，最近微重復和微缺失（可以采用基因芯片技術發(fā)現(xiàn)）也逐漸引起人們的重視；染色體數(shù)目異常主要表現(xiàn)為：非整倍體（如單體、三體，且以三體癥最常見），主要原因是生殖細胞在減數(shù)分裂時染色體出現(xiàn)不分離。在產(chǎn)前篩查與產(chǎn)前診斷中主要關注21-三體綜合癥、18-三體綜合癥、神經(jīng)管缺陷。常規(guī)流程是：在產(chǎn)前篩查中出現(xiàn)21-三體綜合癥、18-三體綜合癥、神經(jīng)管缺陷高?；蛘吲R界風險，需要進行產(chǎn)前診斷，這種情況要進行羊水檢驗。羊水細胞檢驗最佳時間是孕18-22周，通常包括羊水細胞培養(yǎng)及染色體核型分析、熒光原位雜交。核型分析是對23對染色體分析，而熒光原位雜交只分析18號、X、Y、13號、21號染色體，不涉及染色體形態(tài)學方面，具有快速、準確的特點，可以對核型分析結(jié)果進行驗證，確保產(chǎn)前診斷的準確性。 由于羊水培養(yǎng)會出現(xiàn)培養(yǎng)液污染、細胞生長不良、染色體收獲不成功等原因，使得熒光原位雜交技術能夠?qū)ρ蛩毎囵B(yǎng)及染色體核型分析進行補救。

        自然流產(chǎn)是一種由多因素造成的不良妊娠結(jié)局，是婦產(chǎn)科常見疾病，其發(fā)率占全部妊娠結(jié)局的10%-15%，多數(shù)發(fā)生在早期，妊娠終止在12周前者稱為早期流產(chǎn)。在臨床上最主要的原因是：染色體原因，即染色體非整倍體的出現(xiàn)，早期流產(chǎn)中胚胎染色體異常約占50%-60%，染色體異常中數(shù)目異常占86%。對于反復自然流產(chǎn)的情況應查找病因，采用熒光原位雜交技術對流產(chǎn)組織進行染色體數(shù)目的檢驗，主要包括：16號、18號、22號、13號、21號、X、Y染色體。臨床上對于有反復流產(chǎn)史的孕婦，究其原因多為16號染色體數(shù)目異常。流產(chǎn)FISH檢驗對于樣本要求：標本需新鮮，優(yōu)選絨毛作為實驗材料，新鮮絨毛為密生的指狀或樹枝狀小突起的細胞團，表面被覆著上皮組織，內(nèi)部毛細血管豐富，與結(jié)締組織貼附。

        熒光原位雜交技術檢驗原理：使用流產(chǎn)術后或羊水的細胞樣本制片，經(jīng)過預處理后即可用于熒光原位雜交分析。胎兒絨毛組織或羊水細胞核中脫氧核苷酸（DNA）與特異性熒光原位雜交探針分別在高溫（通常76℃）下變性成單鏈脫氧核糖核酸，在42℃環(huán)境下（一般過夜）這些已變性成單鏈的樣本及探針核酸根據(jù)堿基互補的原則進行特異性結(jié)合，形成可被檢測的雜交雙鏈核酸，將非特異性性雜交洗滌（70%乙醇，85乙醇，無水乙醇）后，探針上標記的熒光信號即可在熒光顯微鏡下被檢測。

        熒光原位雜交技術結(jié)果分析與解釋：一般隨機計數(shù)100個細胞，90%以上的細胞顯示正常細胞類型提示正常樣本；60%以上細胞顯示異常信號類型提示異常標本。需要注意的是，對于雜交不均勻的區(qū)域不要分析，細胞核輪廓不清或有重疊的不要分析，所計數(shù)的細胞必須是通道信號均清晰可辨的細胞。

        熒光原位雜交技術在染色體非整倍體的檢驗中具有重要的意義，在臨床上應用廣泛。但此技術仍有其局限性，主要檢測染色體位點和著絲粒數(shù)目的變化，不能用于單個堿基突變的檢測。熒光原位雜交在其它領域也有重要的用途，如乳腺癌患者術后檢測HER-2基因指導用藥等等。