一、原理：

　　GPC凝膠凈化色譜是根據(jù)體積排阻的原理將不同分子尺寸的物質(zhì)分離，這一凈化技術(shù)已被實際應(yīng)用于、水果、谷物等食品中農(nóng)藥殘留檢測的樣品前處理過程中，其主要目的是去除樣品基質(zhì)中可能干擾目標(biāo)化合物檢測的大分子量的油脂、色素等組分。

　　GPC-GCMS系統(tǒng)是根據(jù)GPC理論，分子量較大的脂肪和色素先從凝膠色譜柱中流出，通過六通閥位置的設(shè)定將這些基質(zhì)干擾物排出系統(tǒng)，將要檢測的小分子量的農(nóng)藥成分導(dǎo)入試樣捕集環(huán)路后最后再送入GCMS進行分離檢測。

　　二、GPC流動相：

　　丙酮：環(huán)己烷=3：7，目前島津公司正在試驗用乙酸乙酯代替丙酮，此處所用試劑均應(yīng)為進口的色譜純級。

　　三、GPC時間定位：

　　注入20ul注入20uL氟氨氰菊酯和滅螨猛混合標(biāo)樣10ppm，查看兩組分色譜峰和保留時間, 得到色譜圖后，需要作如下檢查：

　　峰的末端是否拖尾；氟氨氰菊酯與滅螨猛的保留時間的差值應(yīng)小于2分鐘。

　　如有異常，請確認以下幾點：

　　流動相溶劑、混合比是否有錯；LC輸液管是否堵塞；LC連接管路是否泄漏。在上述問題得到確認后問題仍然存在，可能是GPC柱柱效降低，應(yīng)更換新柱。

　　然后根據(jù)氟氨氰菊酯的保留時間設(shè)定LC時間程序。

　　四、GCMS知識：

　　GC起分離作用，MS用于檢測，MS檢測需要高真空狀態(tài)，只有真空系統(tǒng)才能確保離子由離子源轉(zhuǎn)移到檢測器。

　　1、GC：

　　進樣口分微量進樣口和大體積進樣口，要用綠色的低流失進樣墊。做農(nóng)藥殘留一般都用不分流玻璃襯管，采用不分流進樣方式。大體積進樣口使用蛇形玻璃襯管表面積比較大不需要裝填石英棉。微量進樣口使用的玻璃襯管需要裝填石英棉以提高重現(xiàn)性。進樣口溫度要低于柱溫程序最高溫度的30℃。GC毛細管柱的材質(zhì)為熔融石英，外表面涂覆聚酰亞胺，內(nèi)表面經(jīng)化學(xué)處理，GC毛細管柱的固定相大多為聚合物：聚甲基硅氧烷，如－1，－5的柱子，為非極性柱；聚乙二醇，如WAX或FFAP的柱子，為極性柱。分析時選擇與目標(biāo)化合物極性相近的固定相。分析需要高的分離度時選擇內(nèi)徑細長度長的柱；分離度已夠要縮短分析時間時選擇內(nèi)徑粗長度短膜厚的柱。內(nèi)徑0.25mm的柱柱流量一般1～2ml/min；內(nèi)徑0.32mm的柱柱流量一般2～4ml/min；內(nèi)徑0.53mm的柱柱流量一般10～15ml/ min。載氣控制方式的選擇：單獨GC或GCMS時采用恒線速度方式，即柱內(nèi)線速度維持不變，色譜柱阻力變化時柱壓自動調(diào)整；GPC-GCMS時采用恒壓控制方式，即載氣柱頭壓力始終恒定，柱溫變化時柱內(nèi)流速同時改變。

　　2、MS：

　　MS由離子源、透鏡系統(tǒng)、四極桿質(zhì)量分析器、檢測器組成。MS必須檢漏，如果漏氣從如下幾方面檢查：進樣口螺母是否擰緊；GC和MS的接口處是否漏氣；空柱、預(yù)柱、分析柱三根柱子之間的接頭是否漏氣；MS的箱門是否關(guān)好。檢漏后要進行調(diào)諧即對靈敏度的調(diào)整、分辨率的調(diào)整、質(zhì)量數(shù)的校正、相對強度的校正。而且調(diào)諧要在分析方法下調(diào)諧，在儀器處于ready的狀態(tài)下調(diào)諧。調(diào)諧結(jié)果必須符合如下條件：⑴、檢測器電壓不得超過2.0kv；⑵、FWHM(半高峰寬)在0.6+-0.1 kv；⑶、基峰是18或69；⑷、m/z502的相對強度比率至少為2％；⑸、m/z69的峰強度至少是m/z28的峰強度的2倍。

　　五、數(shù)據(jù)分析：

　　掃描（scan）模式所獲取的質(zhì)譜圖可以對樣品成分進行定性分析，確定SIM模式下的一些參數(shù)設(shè)置。

　　選擇離子（SIM）掃描可以做定量分析，選擇離子掃描模式比掃描模式可以得到更小的檢測限，靈敏度比掃描模式高幾十到幾百倍。

　　校正曲線最低點接近限量標(biāo)準(zhǔn)，標(biāo)樣濃度范圍應(yīng)包含實際樣品中各組分的濃度。

　　六、日常維護：

　　1、載氣：使用高純載氣 (純度 > 99.999% )，使用可除去水、氧氣、有機污染物的過濾器（建議使用氦氣凈化管）。

　　及時更換分子篩過濾器和捕集阱，分子篩吸附載氣中的雜質(zhì)成分；捕集阱用于吸附隔墊吹掃、分流流路中揮發(fā)的溶劑成分，捕集阱可以一端接載氣放在柱溫箱中恢復(fù)后重復(fù)使用。

　　2、進樣口：GCMS進樣墊要用綠色的低流失進樣墊。把進樣墊用正己烷浸泡一個晚上放在陰涼處晾干，可更減少低流失，進樣墊使用150次左右就得更換新的，否則會出現(xiàn)漏氣、進樣墊污染，造成出現(xiàn)鬼峰、保留時間、面積重現(xiàn)性變差現(xiàn)象。

　　玻璃襯管污染也是造成鬼峰、保留時間、面積重現(xiàn)性變差的原因，要經(jīng)常檢查玻璃襯管的類型、玻璃襯管是否破損、玻璃襯管中石英棉的裝填情況、玻璃襯管是否污染。將換下來的玻璃襯管污染部分浸于溶劑（丙酮等）中放置數(shù)小時或用超聲波進行清洗。如上述方法無法清洗干凈，可將玻璃襯管浸泡于1N硝酸溶液中7～8小時。

　　3、色譜柱的維護：柱的使用溫度要盡量比柱的耐熱溫度低；不要使難于揮發(fā)的成分進入柱內(nèi)。除去柱內(nèi)殘留的難于揮發(fā)的成分有如下方法：色譜柱老化，把柱溫上升到柱的最高使用溫度附近保持1～2小時，用上述方法不能除去時，切掉進樣口側(cè)色譜柱30～50cm左右。

　　4、MS的接口溫度要高于柱的最高使用溫度。

　　5、更換燈絲：燈絲斷了需要更換新的燈絲；燈絲使用長時間后發(fā)出電流弱，在調(diào)諧時不通過，這時需要更換新的燈絲，如果只是燈絲彎了用鑷子搬正即可。

　　6、清洗離子源：調(diào)諧電壓超過2.0 kv有可能是離子源臟了，需要清洗；調(diào)諧時峰形分叉說明離子源臟需要清洗；進行離子源清洗操作時需要戴清潔的手套；用丙酮清洗所有的工具以降低噪聲；取下的部件避免污染。

　　七、樣品處理：

　　1、目的

　　農(nóng)藥殘留檢測需要提取和凈化以減少其基質(zhì)組分數(shù)量，使得檢測能夠容易進行，樣品的提取和凈化是預(yù)處理部分，也是最重要的部分，它決定著分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。

　　2、萃取溶劑的選擇

　　用乙腈作為萃取劑，用基質(zhì)配標(biāo)準(zhǔn)品100ppb甲胺磷、氧樂果未出峰，由于基質(zhì)效應(yīng)掩蓋了目標(biāo)峰，因此需要調(diào)整前處理方法。參照GBT19426-2006用二氯甲烷萃取步驟如下：稱取10克果汁于50ml燒杯中加入20ml 1％的NaHCO3、10 ml純水、10 ml丙酮攪拌均勻移入125 ml分液漏斗中，用40ml二氯甲烷數(shù)次刷洗燒杯，并將洗液到入分液漏斗中，小心排氣，用力振搖8次，靜置分層，將下層有機相通過裝有10克無水硫酸鈉的層析柱，收集于125ml梨形瓶中。再先后加入5 ml丙酮和40ml二氯甲烷于分液漏斗中，振搖1min，靜置分層，將下層有機相再次通過無水硫酸鈉的層析柱，收集于上述梨形瓶中。合并兩次提取液，將提取液于30℃、0.08MPa水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至1 ml左右，氮氣吹干，待凈化。

　　將氨基柱固定在固相萃取儀上下接100ml梨形瓶，乙腈：甲苯=3：1淋洗液先滿柱淋洗，淋洗液廢棄，待柱表面盡干時用2ml淋洗液刷洗梨形瓶3次，然后25ml淋洗液全洗梨形瓶，濾液全部收集于梨形瓶中，在40℃、0.08MPa水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至1 ml左右，氮氣吹干。

　　將梨形瓶中的提取殘留物用 1 ml丙酮溶解，用膠頭滴管轉(zhuǎn)移至0.22um針筒式尼龍濾膜過濾到1.5ml樣品瓶中，供GPC-GCMS測定。

　　3、注意事項

　　⑴、二氯甲烷極容易揮發(fā)，濃縮時溫度設(shè)30℃，轉(zhuǎn)速慢點。濃縮不能干了，濃縮干回收率會降低。

　　⑵、大部分農(nóng)藥在中性條件下萃取，個別農(nóng)藥在酸性條件下萃取（如：百菌清）。

　　⑶、淋洗液的用量可以根據(jù)不同的基質(zhì)試驗確定合適的用量。

　　⑷、氨基柱主要去除基質(zhì)中的極性雜質(zhì)物。

　　八、總結(jié)

　　1、儀器操作和維護、數(shù)據(jù)分析

　　經(jīng)過此次培訓(xùn)，在儀器操作和維護、數(shù)據(jù)分析等方面，提高了操作人員的理論水平、實際操作能力和分析解決問題的能力。

　　2、樣品處理

　　在樣品處理方面，由于蘋果汁與蔬菜相比，存在高糖低PH的特點，并且我們的檢測項目與蔬菜所的有所差異。所以完全使用蔬菜的前處理方法來處理蘋果汁時，未能達到理想的效果。培訓(xùn)師建議可以采用乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯等試劑，同時可以用不同的試劑來調(diào)整PH值，對于凈化柱還需要調(diào)整，經(jīng)過做不同的試驗，才能確定處理蘋果汁的最佳方案。