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1．分子克隆常用緩沖液
2．磷酸緩沖液
（1）25℃下0.1mol/L磷酸鉀緩沖液的配制※
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pH |
1mol/L K2HPO4(ml) |
1mol/L KH2PO4(ml) |
|
5.8 |
8.5 |
91.5 |
|
6.0 |
13.2 |
86.8 |
|
6.2 |
19.2 |
80.8 |
|
6.4 |
27.8 |
72.2 |
|
6.6 |
38.1 |
61.9 |
|
6.8 |
49.7 |
50.3 |
|
7.0 |
61.5 |
38.5 |
|
7.2 |
71.7 |
28.3 |
|
7.4 |
80.2 |
19.8 |
|
7.6 |
86.6 |
13.4 |
|
7.8 |
90.8 |
9.2 |
|
8.0 |
94.0 |
6.2 |
?。?/SPAN>2）25℃下0.1mol/L磷酸鈉緩沖液的配制※
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pH |
1mol/L Na2HPO4(ml) |
1mol/L NaH2PO4(ml) |
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5.8 |
7.9 |
92.1 |
|
6.0 |
12.0 |
88.0 |
|
6.2 |
17.8 |
82.2 |
|
6.4 |
25.5 |
74.5 |
|
6.6 |
35.2 |
64.8 |
|
6.8 |
46.3 |
53.7 |
|
7.0 |
57.7 |
42.3 |
|
7.2 |
68.4 |
31.6 |
|
7.4 |
77.4 |
22.6 |
|
7.6 |
84.5 |
15.5 |
|
7.8 |
89.6 |
10.4 |
|
8.0 |
93.2 |
6.8 |
※:用蒸餾水將混合的兩種1mol/L貯存液稀釋至1000ml，根據(jù)Henderson-Hasselbalch方程計算其pH值：
pH=pK’+1g([質子受體]/[質子供體])
在此，pK’=6.86(25℃)。
3．電泳緩沖液
測序凝膠加樣緩沖液
98%去離子甲酰胺
10mol/L EDTA(pH8.0)
0.025%二甲苯青FF
0.025%溴酚藍
甲酰胺：許多批號的試劑級甲酰胺，其純度符合使用要求，無須再進行處理。不過，一旦略呈黃色，則應用在磁力攪拌器上將甲酰胺與Dowex XG8混合床樹脂共同攪拌1小時進行去離子處理，并用Whatman 1號濾紙過濾2次，去離子甲酰胺分裝成小份，充氮存于-70℃。
常用的電泳緩沖液
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緩沖液 |
使用液 |
濃貯存液（每升） |
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Tris-乙酸（TAE） |
1×：0.04mol/L Tris-乙酸 |
50×：242g Tris堿 |
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0.001mol/L EDTA |
57.1ml冰乙酸 |
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100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) |
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Tris-磷酸（TPE） |
1×:0.09mol/L Tris-磷酸 |
10×:10g Tris堿 |
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|
0.002mol/L EDTA |
15.5ml85%磷酸（1.679g/ml） |
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40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) |
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Tris-硼酸（TBE）a |
0.5×0.045mol/L Tris-硼酸 |
5×：54g Tris堿 |
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0.001mol/L EDTA |
27.5硼酸 |
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20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) |
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堿性緩沖液b |
1×:50mmol/L NaOH |
1×:5ml 10mol/L NaOH |
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1mmol/L EDTA |
2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) |
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Tris-甘氨酸c |
1×:25mmol/L Tris |
5×:15.1g Tris |
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250mmol/L 甘氨酸 |
94g 苷氨酸（電泳級）（pH8.3） |
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0.1% SDS |
50ml 10% SDS(電泳級) |
說明：
?、?/SPAN>TBE溶液長時間存放后會形成沉淀物，為避免這一問題，可在室溫下用玻璃瓶保存5×溶液，出現(xiàn)沉淀后則予以廢棄。
以片都以1×TBE作為使用液（即1：5稀釋濃貯液）進行瓊脂糖凝膠電泳。但0.5×的使用液已具備足夠的緩沖容量。目前幾乎所有的瓊脂糖膠電泳都以1：10稀釋的貯存液作為使用液。
進行聚丙烯酰胺凝膠垂直槽的緩沖液槽較小， 故通過緩沖液的電流量通常較大，需要使用1×TBE以提供足夠的緩沖容量。
②堿性電泳緩沖液應現(xiàn)用現(xiàn)配。
?、?/SPAN>Tris-甘氨酸緩沖液用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。
2×SDS凝膠加樣緩沖液：
100mmol/L Tris·HCl(6.8)
200mmol/L二硫蘇糖醇（DTT）
4%SDS（電泳級）
0.2%溴酚藍
20%甘油
不含DTT的2×SDS凝膠加樣緩沖液可保存于室溫，應在臨用前取1mol/L貯存液現(xiàn)加于上述緩沖液中。
4．凝膠加樣緩沖液
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緩沖液類型 |
6×緩沖液 |
貯存溫度 |
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Ⅰ
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0.25%溴酚藍 |
4℃
|
|
0.25%二甲苯青FF |
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40%（W/V）蔗糖水溶液 |
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Ⅱ
|
0.25溴酚藍 |
室溫
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|
0.25%二甲苯青FF |
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15%聚蔗糖(Ficoll400) |
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Ⅲ
|
0.25%溴酚藍 |
4℃
|
|
0.25%二甲苯青FF |
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30%甘油水溶液 |
|
Ⅳ
|
0.25%溴酚藍 |
4℃
|
|
40%(W/V)蔗糖水溶液 |
|
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堿性加樣緩沖液: |
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|
300mmol/L NaOH |
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6mmol/L EDTA |
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Ⅴ
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18%聚蔗糖(Ficoll400) |
4℃
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0.15%溴甲酚綠 |
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0.25%二甲苯青FF |
使用以上凝膠加樣緩沖液的目的有三：增大樣品密度；以確保DNA均勻進入樣品孔內；使樣品呈現(xiàn)顏色，從而使加樣操作更為便利，含有在電塊中能以可預知速率向陽極泳動的染料。溴酚藍在瓊脂糖中移動的速率約為二甲苯青FF的2.2倍，而與瓊脂糖濃度無關。以0.5×TBF作電泳液時，溴酚藍在瓊脂糖中的泳動速率約與長300bp的雙鏈線狀DNA相同，而二甲苯青FF的泳動則與長4kb的雙鏈線狀DNA相同。在瓊脂糖濃度為0.5%～1.4%的范圍內，這些對應關系受凝膠濃度變化的影響并不顯著。
選用哪一種加樣染料純屬個人喜惡。但是，對于堿性凝膠應當使用溴甲酚綠作為示蹤染料，因為在堿性pH條件下其顯色較溴酚更藍為鮮明。
5．各種pH值的Tris緩沖液的配制
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各種pH值的Tris緩沖液的配制 |
|
所需pH值（25℃） |
0.1mol/L HCl的體積 |
|
7．1 |
45．7 |
|
7．2 |
44．7 |
|
7．3 |
43．4 |
|
7．4 |
42．0 |
|
7．5 |
40．3 |
|
7．6 |
38．5 |
|
7．7 |
36．6 |
|
7．8 |
34．5 |
|
7．9 |
32．0 |
|
8．0 |
29．2 |
|
8.1 |
26.2 |
|
8.2 |
22.9 |
|
8.3 |
19.9 |
|
8.4 |
17.2 |
|
8.5 |
14.7 |
|
8.6 |
12.4 |
|
8.7 |
10.3 |
|
8.8 |
8.5 |
|
8.9 |
7.0 |
某一特定pH值的0.05mol/L Tris緩沖液的配制：將50ml 0.1mol/L Tris堿溶液與上表所示相應體積（單位：ml）的0.1ml/L HCl混合，加水將體積調至100ml
?。?/SPAN>2）溫度對50mmol/L Tris·HCl液pH值的影響
|
4℃ |
25℃ |
37℃ |
|
8．1 |
7．5 |
7．2 |
|
8．2 |
7．6 |
7．3 |
|
8．3 |
7．7 |
7．4 |
|
8．4 |
7．8 |
7．5 |
|
8．5 |
7．9 |
7．6 |
|
8．6 |
8．0 |
7．7 |
|
8．7 |
8．1 |
7．8 |
|
8．8 |
8．2 |
7．9 |
|
8．9 |
8．3 |
8．0 |
|
9．0 |
8．4 |
8．1 |
|
9．1 |
8．5 |
8．2 |
|
9．2 |
8．6 |
8．3 |
|
9．3 |
8．7 |
8．4 |
|
9．4 |
8．8 |
8．5 |
?。?/SPAN>6）常用緩沖液的pKa值
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緩沖液 |
分子量 |
pKa值 |
緩沖范圍 |
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Trisa |
12.1 |
8.08 |
7.1～7.9 |
|
HEPESb |
283.3 |
7.47 |
7.2～8.2 |
|
MPOSc |
209.3 |
7.15 |
6.6～7.8 |
|
PIPESd |
304.3 |
6.76 |
6.2～7.3 |
|
MESe |
195.2 |
6.09 |
5.4～6.8 |
a：三羥甲基氨基甲烷；b：N-2-羥乙基哌嗪-N’-2-乙磷酸；c：3-（N-嗎啉代）丙磺酸；d：N，N’-雙（2-乙磺酸）哌嗪；e：2-（N-嗎啉代）乙磺酸。
7．溫度對常用緩沖液pH的影響
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緩沖體系 |
pKa(20℃) |
△pKa/10℃ |
|
Mes |
6.15 |
-0.110 |
|
Ada |
6.60 |
-0.110 |
|
PiPes |
6.80 |
-0.085 |
|
Aces |
6.90 |
-0.200 |
|
Bes |
7.15 |
-0.160 |
|
Mops |
7.20 |
-0.013 |
|
Tes |
7.50 |
-0.200 |
|
Hepes |
7.55 |
-0.014 |
|
Tricine |
8.15 |
-0.210 |
|
Tris |
8.30 |
-0.310 |
|
Bicine |
8.35 |
-0.180 |
|
Glycylglycine |
8.40 |
-0.280 |
|
