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SDS-PAGE凝膠制備屬于實(shí)驗(yàn)室最常規(guī)的操作了，剛開(kāi)始做蛋白實(shí)驗(yàn)總是在找凝膠配制實(shí)驗(yàn)中所用試劑的配方，這里總結(jié)了分離膠、濃縮膠、分離膠和濃縮膠緩沖液、考馬斯亮藍(lán)染液、樣品緩沖液、電泳緩沖液等配方。
1. 分離膠(12%) | 配制 | 所需試劑 | 所需體積 | | 分離膠(12％) | 30％丙烯酰胺 | 6.0 ml | | 1.5 mol/l Tris-HCl | 3.8 ml | | 10%SDS | 150 μl | | 10%過(guò)硫酸銨 | 150 μl | | TEMED | 6 μl | | 蒸餾水 | 4.9 ml |
2. 濃縮膠(5%) | 配制 | 所需試劑 | 所需體積 | | 濃縮膠(5％) | 30％丙烯酰胺 | 1.3 ml | | 1.5 mol/l Tris-HCl | 1.0 ml | | 10%SDS | 80 μl | | 10%過(guò)硫酸銨 | 80 μl | | TEMED | 8 μl | | 蒸餾水 | 5.5 ml |
3. 分離膠緩沖液(pH8.9) | 配制 | 所需試劑 | 所需體積 | | 分離膠緩沖液 | Tris | 36.6 g | | 1 mol/l HCl | 48 ml | | 蒸餾水 | 補(bǔ)足至100 ml |
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4. 濃縮膠緩沖液(pH6.7) | 配制 | 所需試劑 | 所需體積 | | 濃縮膠緩沖液（pH6.7） | Tris | 5.98 g | | 1 mol/l HCl | 48 ml | | 蒸餾水 | 補(bǔ)足至100 ml |
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5. 30%丙烯酰胺(pH≤7.0) | 配制 | 所需試劑 | 所需體積 | | 30%丙烯酰胺（pH≤7.0） | 丙烯酰胺 | 29 g | | 甲叉-雙丙烯酰胺 | 1 g | | 蒸餾水 | 補(bǔ)足至100 ml |
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6. 10%過(guò)硫酸銨(W/V)：1g過(guò)硫酸銨溶于10ml水中，4℃保存數(shù)周，盡量現(xiàn)用現(xiàn)配。
7. 10%SDS：將10 g SDS溶于80ml重蒸水中并輕緩攪拌(室溫低時(shí)需水浴加熱溶解)，再定容至100ml，室溫存放。
8. 樣品緩沖液 | 配制 | 所需試劑 | 所需體積 | | 樣品緩沖液 | 1 M Tris-HCl（pH6.7） | 5 ml | | SDS | 2.5 g | | 巰基乙醇 | 1 ml | | 溴酚蘭 | 0.05 g | | 蔗糖 | 10 g | | 蒸餾水 | 補(bǔ)足至100ml |
9. 考馬斯亮藍(lán)染色液：0.25g考馬斯亮藍(lán)R-250用少量甲醇溶解后，用甲醇(40ml)-乙酸(10ml)水溶液稀釋至100ml。
10. Tris-甘氨酸電泳緩沖液(pH8.3) | 配制 | 所需試劑 | 所需體積 | | Tris-甘氨酸 電泳緩沖液（pH8.3） | Tris堿 | 15.1 g | | 甘氨酸 | 94 g | | 10％（W/V）SDS | 50 ml | | 去離子水 | 補(bǔ)足至100 ml |
凝膠配制所需試劑的母液不能放置太久，有條件的實(shí)驗(yàn)室可將母液保存在4度冰箱中，放置母液被微生物污染或者出現(xiàn)沉淀。 文章轉(zhuǎn)自英格恩生物技術(shù)博客！
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