細(xì)胞死亡的方式有很多，其中細(xì)胞凋亡，又稱程序性細(xì)胞死亡，是主動發(fā)生的死亡現(xiàn)象，是為更好地適應(yīng)生存環(huán)境而主動爭取的一種死亡過程。在細(xì)胞凋亡早期，雖然細(xì)胞的完整性保留，但是其表面結(jié)構(gòu)已經(jīng)開始改變，包括磷脂酰絲氨酸(PS)從膜的內(nèi)部向外部（細(xì)胞外側(cè)）的翻轉(zhuǎn)。凋亡晚期細(xì)胞或者已經(jīng)發(fā)生壞死的細(xì)胞，其細(xì)胞膜失去完整性（所以細(xì)胞死活染料也能進(jìn)入細(xì)胞喲~你回憶起了嗎？），在細(xì)胞凋亡過程中，除了細(xì)胞膜發(fā)生改變，細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核也會出現(xiàn)變化：細(xì)胞體積變小（但是在細(xì)胞質(zhì)中的細(xì)胞器形態(tài)始終保持完整）；細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)結(jié)構(gòu)會改變，比如染色質(zhì)固縮、染色質(zhì)邊緣化、細(xì)胞核內(nèi)胞漿緊實、細(xì)胞核的核膜折疊（fold）細(xì)胞形成凋亡小體等。

Annexin V是一種分子量為35~36kD的Ca²⁺依賴性磷脂結(jié)合蛋白，它對磷脂酰絲氨酸(PS)有很高的親和力。依據(jù)這個原理，我們就可以把Annexin V標(biāo)記上熒光素（熒光素可以是FITC/APC等），就可以用流式等技術(shù)檢測。而細(xì)胞死活染料，如PI、7-AAD是細(xì)胞膜不完整時，穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞核，與核DNA結(jié)合，可對凋亡晚期細(xì)胞及壞死細(xì)胞染色。

依據(jù)上述凋亡細(xì)胞與Annexin V的特性，我們就再結(jié)合上核死活染料（PI/7-AAD），我們分別將AnnexinV與核酸死活染料作為橫縱坐標(biāo)，依據(jù)陰陽性群畫出十字門（這個學(xué)不會，沒關(guān)系哦~后期會在B站中講解），我們就能在流式分析中做到區(qū)分出正常細(xì)胞、早期凋亡細(xì)胞、晚期凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞，如下圖所示。（注：左上象限為AnnexinV-/PI+，可能是已經(jīng)沒有細(xì)胞膜的細(xì)胞碎片或者是由于凋亡以外的原因?qū)е碌募?xì)胞死亡，并不在我們感興趣的范圍內(nèi)）。??????????????????????????????????