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從專業(yè)角度認(rèn)識(shí) 重組人干細(xì)胞因子rHuSCF,一種造血生長(zhǎng)因子

 Leslie程 2023-02-13 發(fā)布于四川

  

重組人干細(xì)胞因子是一種造血生長(zhǎng)因子,通過(guò)c-Kit受體發(fā)出信號(hào)來(lái)發(fā)揮其活性。SCF和c-Kit對(duì)于黑素細(xì)胞和生殖細(xì)胞譜系的造血細(xì)胞的生存、增殖和分化至關(guān)重要。人SCF在小鼠細(xì)胞上表現(xiàn)出低活性,而小鼠和大鼠SCF在人細(xì)胞上完全活性。人SCF基因編碼273個(gè)氨基酸的跨膜蛋白,其中包含25個(gè)氨基酸的N端信號(hào)序列、189個(gè)氨基酸的胞外結(jié)構(gòu)域、23個(gè)氨基酸的膜外結(jié)構(gòu)域和36個(gè)氨基酸的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域。分泌可溶性SCF是通過(guò)膜錨定前體的蛋白水解加工產(chǎn)生的。重組人SCF是含有165個(gè)氨基酸殘基的18.4kDa多肽,其對(duì)應(yīng)于分泌可溶性SCF形式的序列。

AA Sequence:

MEGICRNRVT NNVKDVTKLV ANLPKDYMIT LKYVPGMDVL PSHCWISEMV VQLSDSLTDL LDKFSNISEG LSNYSIIDKL VNIVDDLVEC VKENSSKDLK KSFKSPEPRL FTPEEFFRIF NRSIDAFKDF VVASETSDCV VSSTLSPEKD SRVSVTKPFM LPPVA

在大腸桿菌中產(chǎn)生的干細(xì)胞因子人類重組蛋白是一條含有165個(gè)氨基酸的非糖基化單鏈,分子量為18409道爾頓。

氨基酸序列

測(cè)定了前五個(gè)N端氨基酸的序列,發(fā)現(xiàn)其為Met-Glu-Gly-Ile-Cys。

生物活性

通過(guò)對(duì)人TF-1細(xì)胞的劑量依賴性刺激測(cè)定的ED50小于2 ng/ml,對(duì)應(yīng)于500000 IU/mg的比活性。

蛋白質(zhì)含量

通過(guò)兩種獨(dú)立的方法進(jìn)行蛋白質(zhì)定量

1.在280nm的紫外光譜,使用0.52的吸收值作為0.1%(1mg/ml)溶液的消光系數(shù)。該值由蛋白質(zhì)序列的PC基因計(jì)算機(jī)分析程序(IntelliGenetics)計(jì)算。

2.使用干細(xì)胞因子的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為參考標(biāo)準(zhǔn),通過(guò)RP-HPLC進(jìn)行分析。

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