什么是肝素結(jié)合蛋白? 肝素結(jié)合蛋白(heparin-binding protein,HBP):是中性粒細(xì)胞來源的顆粒蛋白,主要儲存于嗜天青顆粒,少部分儲存于分泌小泡中,HBP是絲氨酸蛋白酶家族成員,無蛋白酶活性。其結(jié)構(gòu)包含222個氨基酸的單鏈蛋白,含有8個半胱氨酸殘基,在第100、114或145位天冬氨酸殘基上具有糖基化位點(diǎn),結(jié)構(gòu)類似于中性粒細(xì)胞彈性蛋白,與其同源性為45%。 對脂多糖脂質(zhì)A具有高親和力。中性粒細(xì)胞活化后脫顆粒,即釋放出HBP。當(dāng)發(fā)生急性細(xì)菌感染時,血液中HBP的濃度可在1-2小時內(nèi)明顯升高,而病毒感染時HBP不增高或輕度增高。HBP同時也作為致病因子,當(dāng)患者接受有效治療后HBP濃度則很快下降。因此,檢測患者血液中HBP含量可輔助臨床進(jìn)行急性細(xì)菌感染診斷及預(yù)測、感染嚴(yán)重程度判斷以及抗生素療效監(jiān)測。 肝素結(jié)合蛋白的功能? 1. 增加血管內(nèi)皮細(xì)胞的通透性; 2. 調(diào)節(jié)單核/巨噬細(xì)胞功能; 3. 通過線粒體途徑調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡; 肝素結(jié)合蛋白檢測的方法和原理 常見試劑盒基于免疫熒光技術(shù),采用雙抗體夾心法。將樣本與緩沖液混勻,檢測緩沖液中的熒光標(biāo)記抗體會與HBP抗原結(jié)合。加至板條加樣孔后,經(jīng)毛細(xì)管作用擴(kuò)散,在檢測區(qū)(T)被固定在膜上的配對抗體捕獲,形成HBP抗體-HBP標(biāo)記抗體復(fù)合物。復(fù)合物的熒光抗體信號與HBP濃度成正比,經(jīng)儀器分析后可計(jì)算出樣本中抗原的濃度。質(zhì)控區(qū)內(nèi)所顯現(xiàn)的值是判斷是否有足夠標(biāo)本,層析過程是否正常的依據(jù),同時也作為試劑的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。 肝素結(jié)合蛋白檢測的標(biāo)本要求 1.標(biāo)本為1:9 枸櫞酸鈉抗凝全血(BD 管)。 2.標(biāo)本采集:使用市售內(nèi)含0.3ml抗凝劑(3.2%枸櫞酸鈉)的真空采血管,靜脈抽取患者空腹血液直至真空管負(fù)壓消失,與抗凝劑充分混勻。2小時內(nèi)分離最佳,必須6小時內(nèi)分離。 3.拒收標(biāo)準(zhǔn):嚴(yán)重溶血或渾濁樣本不能使用。 4.標(biāo)本保存:血漿2℃-8℃可保存一周。-20℃或-70℃可保存6個月。檢測前,必須恢復(fù)到室溫,樣本充分混勻解凍后方可使用,樣本避免反復(fù)凍融。 肝素結(jié)合蛋白與傳統(tǒng)炎癥指標(biāo)的比較 ?? 01 WBC 結(jié)果個體差異較大,易受多種因素影響,在感染性疾病的診斷中局限性較大 ?? 02 CRP 是區(qū)分細(xì)菌感染和病毒感染的有效指標(biāo),主要用于急性感染的鑒別診斷、抗菌藥物療效觀察等。但CRP對感染的診斷缺乏特異性。 ?? 03 PCT PCT在健康人血清中的水平非常低,只有在細(xì)菌釋放毒素導(dǎo)致感染后才會升高,可以及時反映全身炎癥反應(yīng)的活躍程度。但有一些非感染情況也會引起PCT的急劇升高。 ?? 04 ESR ESR可判斷機(jī)體是否存在炎癥因子。但ESR并不是某一種疾病的特異性診斷指標(biāo)。 ?? 05 IL-6 IL-6是急性期炎癥反應(yīng)的重要介質(zhì),在炎癥反應(yīng)中出現(xiàn)升高趨勢的時間早于CRP、PCT等炎癥因子。可用于輔助早期診斷急性感染。 ?? 06 HBP HBP相對于 CRP能更快速、有效地輔助診斷呼吸道局部細(xì)菌感染;HBP相對于PCT在血流感染早期升高更快,特異性更強(qiáng);與目前使用的其他感染性疾病指標(biāo)相比,HBP與細(xì)菌感染的關(guān)系更為密切,對感染性疾病的早期預(yù)警、預(yù)測評估及療效觀察均具有重要的臨床價值。 肝素結(jié)合蛋白檢測的臨床意義 ?? 01 HBP<11.4ng/ml 臨床意義:存在細(xì)菌感染的可能性很低,或者處于病毒感染初期或輕癥病毒感染提示可能存在細(xì)菌感染。 建議:如有臨床癥狀,建議6-24小時復(fù)查。 ?? 02 11.4-28.1ng/ml 臨床意義:未來72小時內(nèi)發(fā)生器官功能障礙的可能性小。 建議:建議6-24小時復(fù)查。 ?? 03 28.1-103.5ng/ml 臨床意義:提示存在細(xì)菌感染,未來72小時內(nèi)發(fā)生低血壓、器官功能障礙、膿毒癥的可能性大。 建議:建議6-24小時復(fù)查計(jì)算 48小時 HBP 清除率,用于預(yù)后評估。 ?? 04 HBP>103.5ng/ml 臨床意義:提示重癥感染,發(fā)生器官功能障礙膿毒癥、膿毒性休克的可能性很大。 建議:建議6-24小時復(fù)查計(jì)算48小時 HBP 清除率,用于預(yù)后評估。 綜上所述,HBP是中性粒細(xì)胞釋放的一種顆粒蛋白。HBP作為一個臨床新型的炎癥標(biāo)志物,具有高敏感性及高特異性的優(yōu)點(diǎn),如何將HBP與傳統(tǒng)炎癥標(biāo)志物結(jié)合,以尋找可更加快速、特異、靈敏地診斷感染性疾病的指標(biāo),仍需要進(jìn)一步研究。 |
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