emulsion PCR

乳液PCR的最大優(yōu)勢(shì)就是能夠讓低濃度DNA在獨(dú)立反應(yīng)空間，經(jīng)過(guò)大量PCR循環(huán)使目的片段呈指數(shù)擴(kuò)增，而沒(méi)有其他的競(jìng)爭(zhēng)性或污染性序列的影響。其關(guān)鍵技術(shù)是“注水到油”（水包油），基本過(guò)程是在PCR反應(yīng)前，將包含PCR所有反應(yīng)成分的水溶液注入到高速旋轉(zhuǎn)的礦物油表面，水溶液瞬間形成無(wú)數(shù)個(gè)被礦物油包裹的小水滴。這些小水滴就構(gòu)成了獨(dú)立的PCR反應(yīng)空間。理想狀態(tài)下，每個(gè)小水滴只含一個(gè)DNA模板和一個(gè)磁珠。這些被小水滴包被的磁珠表面含有與接頭互補(bǔ)的DNA序列，因此這些單鏈DNA序列能夠特異地結(jié)合在磁珠上。同時(shí)孵育體系中含有PCR反應(yīng)試劑，所以保證了每個(gè)與磁珠結(jié)合的小片段都能獨(dú)立進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并且擴(kuò)增產(chǎn)物仍可以結(jié)合到磁珠上。當(dāng)反應(yīng)完成后，可以破壞孵育體系并將帶有DNA的磁珠富集下來(lái)。經(jīng)過(guò)反應(yīng)，DNA模板的拷貝數(shù)量呈指數(shù)擴(kuò)增，每個(gè)小片段都將被擴(kuò)增約幾百萬(wàn)倍，從而達(dá)到測(cè)序所要求的DNA量。