果子導(dǎo)讀：

細(xì)看了今天的帖子，高師姐總是在不停地開拓我們的眼界。我們周二和周四的專欄，兩位作者完全是不一樣的領(lǐng)域和風(fēng)格，大家可以互相比對看一看，馬上高師姐將會進(jìn)入一個新的領(lǐng)域，專欄的內(nèi)容會變得更加豐富。
上次培訓(xùn)完了之后，有個同學(xué)說，果子是一個有完整作品的人，他的這個課程就是。尋找有完整作品的人，是我從李笑來那里聽到的:

從一開始就要想盡一切辦法做出完整的作品來，哪怕最初的作品很差——但必須完整。那些有完整作品的人，能力、耐力、學(xué)習(xí)能力都會超出他人許多倍。無論看起來多簡單的作品，只要是完整的，其表面之下的復(fù)雜程度是那些沒做出過東西的人全然無法想像的。

在不久的將來，這兩個專欄的內(nèi)容也會分別成為完整的作品，整個教程自成體系，又很有效，因?yàn)槊恳粋€專欄的作者都是能發(fā)10分文章的人。上周五被被選為學(xué)校創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)優(yōu)秀畢業(yè)生，做了一個簡短的演講，中心思想就是：

帶著深厚的醫(yī)學(xué)背景，無論進(jìn)入哪一個領(lǐng)域都會對那個領(lǐng)域造成不小的沖擊。

效果還可以，但是我心里想得是，下一次因?yàn)榈锚劧吓_演講的時候，應(yīng)當(dāng)是因?yàn)榘l(fā)了CNS。這樣我的導(dǎo)師才會有面子。我們公眾號的三個人互相幫助，試試吧。

以下是正文，前言都寫了兩個。

這個帖子大部分內(nèi)容是在上周五交完標(biāo)書后寫得，因?yàn)樯现艽蟾庞袃商旎緵]怎么睡覺，害怕在不清醒的情況下給大家錯誤的但這周實(shí)在太忙。昨天跟果子老師請假，信息。所以這周再繼續(xù)寫。

上周的前言

這周非常忙，就是瘋狂的寫標(biāo)書，自從上上周答辯完后，周末從剛哥家回來后，周一交了申請學(xué)位的材料，我基本上就沒有出過門了。我這里的出門指的狹義的出門，也就是我們家的大門。也沒有洗過頭，洗了一次澡，哈哈哈哈，現(xiàn)在在寫這些時仿佛都可以聞到自己身上的陣陣體味兒。還是要感謝我的導(dǎo)師，一次次讓我挑戰(zhàn)極限，這一周日子反正不好過，很別扭、很難受。但往往這個樣子時才是能量增長的時候，這周又豐富了我的巨噬細(xì)胞相關(guān)的知識體系了。上周看這就是街舞時，易烊千璽說他喜歡大框架但又有細(xì)節(jié)的編舞。其實(shí)寫標(biāo)書也是這個樣子的。這次的標(biāo)書真的是在沒什么預(yù)實(shí)驗(yàn)的情況下，大大的搭了個框架?，F(xiàn)在想想還是很開心的啊。另外有一件很開心的事情就是我之前困擾了三年的一個實(shí)驗(yàn)終于有結(jié)果了。你們也知道ChIP這個東西不是很好做，也就是轉(zhuǎn)錄調(diào)控這個東西不是很好做，后面等把這個實(shí)驗(yàn)做完，給大家分享。另外文章online了，果子老師建議我把所有的寫文章、投稿等一系列做一個分享。這個等我收到proof后，我就跟大家分享。

這周的前言

這周因?yàn)橐恍﹦e的原因去跟另外3個基礎(chǔ)的老師匯報了我的課題，其中一個老師是做肝炎病毒的，在聽了我的匯報后，提了一個問題就是RSV病毒編碼的NS1蛋白是一個transcription regulator嗎，我說根據(jù)我的ChIP seq發(fā)現(xiàn)NS1的確與miRNA的啟動子區(qū)域相互作用，但是我不知道是不是直接作用。另外一個老師告訴我說，迄今為止還沒有發(fā)現(xiàn)病毒的哪一個蛋白是一個transcription regulator，一般病毒蛋白發(fā)揮的作用是一個反式作用因子，也就是它會與調(diào)控promoter區(qū)域的轉(zhuǎn)錄因子相互作用，間接的影響某個基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。那我接著查閱了可以影響那個基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，與我之前做的一個蛋白相互作用的芯片取了一個交集，發(fā)現(xiàn)我的這個蛋白的確可以直接作用于這個基因promoter區(qū)域的某個轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。是不是很開心，是不是一個意外的驚喜呢？所以，存在即合理。很多時候意外的驚喜就發(fā)生在你在做不是讓自己很舒服的事情的時候。一切都是最好的安排。

大家還記得上上周的論文致謝嗎，就在上周周五，我的博士生導(dǎo)師給我打電話說她被感動的流了眼淚，碩士導(dǎo)師也是這樣說，哈哈哈，這里足以說明你的導(dǎo)師在給你改論文時可能都沒有認(rèn)真看你的致謝那個部分。
另外馬上就要高考，在這里祝愿所有高考的所有考生定能馳騁沙場。

這周的分享

這周跟大家分享的是另一個檢測細(xì)胞死亡、毒性的實(shí)驗(yàn)，也就是LDH實(shí)驗(yàn)。這周主要分享實(shí)驗(yàn)的原理、應(yīng)用范圍、常用檢測方法及我的一些些體驗(yàn)。

哪些技術(shù)可以檢測細(xì)胞活性與細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)

下面這2張截圖來自于sigma，

LDH檢測的原理

同樣，我們要先知道LDH試劑盒檢測的原理是什么，
LDH，乳酸脫氫酶，這個是一個氧化還原酶，催化丙酮酸和乳酸的相互轉(zhuǎn)化。穩(wěn)定的存在細(xì)胞胞漿中，當(dāng)細(xì)胞膜受損和細(xì)胞死亡時，它就可以釋放到上清中。那我們就可以通過一定的化學(xué)反應(yīng)檢測到它的量，可以簡單的反應(yīng)膜損傷及細(xì)胞死亡。還記得上周分享的CCK8系列中，細(xì)胞因素對CCK8的影響，其中就有一個是細(xì)胞狀態(tài)不好，膜受損后，LDH釋放進(jìn)入上清，對最終的CCK8結(jié)果有影響。

LDH適用范圍

1. 做細(xì)胞膜的損傷的實(shí)驗(yàn)。

2. 做細(xì)胞毒性、活力實(shí)驗(yàn)。

3. 做細(xì)菌對細(xì)胞的殺傷作用。

這個方法是我們做細(xì)菌感染時常做的一個檢測細(xì)菌對細(xì)胞膜損傷的一個實(shí)驗(yàn)。因?yàn)榧?xì)菌基本不再細(xì)胞內(nèi)生活，不需要依賴細(xì)胞，而且細(xì)菌有其獨(dú)有的1-12型分泌系統(tǒng)。尤其是革蘭氏陰性菌的三型分泌系統(tǒng)，它類似于一個注射器一樣通過細(xì)胞膜將毒素注入細(xì)胞中，損傷細(xì)胞。我們可以檢測它的細(xì)胞毒性。但是在做藥物干預(yù)時，一般又會選擇CCK8。這個是我導(dǎo)師的最愛搭配，

她的意思是在做毒性特別大時的實(shí)驗(yàn)，用LDH數(shù)據(jù)比較好看，在做干預(yù)時，用CCK8的數(shù)據(jù)會比較好看。大家不妨試試。

LDH的測定方法及具體原理

1. 比色法
LDH是一個氧化還原酶，利用LDH催化下述反應(yīng)即 L乳酸+NAD →丙酮酸+NADH+H 。生成的NADH可引起 340nm 處吸光度的升高。其升高速率與標(biāo)本中 LDH 活性呈正相關(guān)關(guān)系，通過分光光度計(jì)或自動分析儀檢測 340nm 處吸光度升高速率，通過計(jì)算LDH的活性。
2. 熒光法
這個方法的原理和上述是一樣的，只是NADH是由NADH的熒光傳感器檢測。熒光信號可通過特定的激發(fā)波長和發(fā)射波長讀出，Ex/Em=540/590 nm
3. 生物發(fā)光法
（我最喜歡的方法，主要是promega公司在熒光素酶這一塊做得特別好，所以無比信任這一款也無比好用）
原理也是一樣的，這個方法非常靈敏，可以對從少量細(xì)胞，包括原代細(xì)胞和3D細(xì)胞，釋放的LDH進(jìn)行精確檢測。promega的Cat#J2380。