試劑：

1. 5x樣品緩沖液（10ml）:0.6ml 1mol/l的Tris-HCl(pH6.8),5ml 50%甘油，2ml 10%的SDS，0.5ml巰基乙醇，1ml 1%溴酚藍(lán)，0.9ml蒸餾水?？稍?℃保存數(shù)周，或在－20℃保存數(shù)月。

2. 凝膠貯液：在通風(fēng)櫥中，稱取丙烯酰胺30g，甲叉雙丙烯酰胺0.8g，加重蒸水溶解后，定容到100ml。過濾后置棕色瓶中，4℃保存，一般可放置1個(gè)月。

3. pH8.9分離膠緩沖液： Tris 36.3g ，加1mol/l HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，調(diào)pH8.9，定容至100ml， 4℃保存。

4. pH6.7濃縮膠緩沖液： Tris 5.98g ，加1mol/l HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，調(diào)pH6.7，定容至100ml， 4℃保存。

5.  TEMED（四乙基乙二胺）原液。

6. 10%過硫酸銨（用重蒸水新鮮配制）。

7.  pH8.3 Tris-甘氨酸電極緩沖液：稱取Tris 6.0g，甘氨酸28.8g，加蒸餾水約900ml，調(diào)pH8.3后，用蒸餾水定容至1000ml。置4℃保存，臨用前稀釋10倍。

8. 考馬斯亮藍(lán)G250染色液：稱100mg考馬斯亮藍(lán)G250，溶于200ml蒸餾水中，慢慢加入7.5ml 70%的過氯酸，最后補(bǔ)足水到250ml，攪拌1小時(shí)，小孔濾紙過濾。

SDS-PAGE凝膠的有效分離范圍

丙烯酰胺濃度（%） 15         12.5           10                  7.5                5.0

線性分離范圍  15-435kDa 15-60kDa  18-75kDa  30-120 kDa   60-212 kDa

器材

電泳儀，電泳槽，水浴鍋，搖床。

樣品制備

將蛋白質(zhì)樣品與5X樣品緩沖液（20μl＋5μl）在一個(gè)Eppendorf管中混合。放入100℃加熱5－10min，離心，取上清點(diǎn)樣。

電泳

1. 將玻璃板、樣品梳、Spacer用洗滌劑洗凈，用ddH₂O沖洗數(shù)次，再用乙醇擦拭，晾干；

2. 將兩塊洗凈的玻璃板之間加入Spacer，裝好玻璃板；

3. 按如下體積配制10％分離膠8.0 ml，混勻；

ddH₂O                                       3.0 ml

1.0 mol/l Tris-HCl pH=8.8      2.1 ml

30% Acr-Bis                               2.8 ml

10% SDS                                  80 μl

10%AP                                      56 μl

TEMED                                      6 μl

4. 向玻璃板間灌制分離膠，立即覆一層重蒸水，大約20 min后膠即可聚合；

5. 按如下體積配制6％濃縮膠3.0 ml，混勻；ddH₂O 1.0 mol/l Tris-HClpH=6.8 30%

將上層重蒸水傾去Acr-Bis

2.0 ml            400 μl          600 μl

10% SDS      10% AP        TEMED

36μl                24μl                4μl

6. 濾紙吸干，灌制濃縮膠，插入樣品梳；

7. 裝好電泳系統(tǒng)，加入電極緩沖液，上樣20 μl;