在化學(xué)鍵合相色譜法中，溶劑的洗脫能力直接與它的極性相關(guān)。在正相色譜中，溶劑的強(qiáng)度隨極性的增強(qiáng)而增加；在反相色譜中，溶劑的強(qiáng)度隨極性的增強(qiáng)而減弱。

正相色譜的流動(dòng)相通常采用烷烴加適量極性調(diào)整劑。

反相色譜的流動(dòng)相通常以水作基礎(chǔ)溶劑，再加入一定量的能與水互溶的極性調(diào)整劑，如甲醇、乙腈、四氫呋喃等。極性調(diào)整劑的性質(zhì)及其所占比例對(duì)溶質(zhì)的保留值和分離選擇性有顯著影響。一般情況下，甲醇-水系統(tǒng)已能滿足多數(shù)樣品的分離要求，且流動(dòng)相粘度小、價(jià)格低，是反相色譜最常用的流動(dòng)相。但Snyder則推薦采用乙腈-水系統(tǒng)做初始實(shí)驗(yàn)，因?yàn)榕c甲醇相比，乙腈的溶劑強(qiáng)度較高且粘度較小，并可滿足在紫外185~205nm處檢測(cè)的要求，因此，綜合來看，乙腈-水系統(tǒng)要優(yōu)于甲醇-水系統(tǒng)。

在分離含極性差別較大的多組分樣品時(shí)，為了使各組分均有合適的k值并分離良好，也需采用梯度洗脫技術(shù)。

流動(dòng)相的調(diào)節(jié)是搞液相分析最重要的環(huán)節(jié)，也是液相水平高低的度量，每一種液相都有影響它的主要因素，抓住主要因素，問題就容易解決。歡迎大家討論。一則可以為新手傳播知識(shí)，二則大家相互學(xué)習(xí)共同提高！液色迷人

先開個(gè)頭：常用的是化學(xué)鍵合相色譜，分離中性化合較簡(jiǎn)單，主要是調(diào)節(jié)溶劑強(qiáng)度，可從有機(jī)相的比例合種類兩個(gè)方面入手，例如：有機(jī)相占的比例大，出峰就早。分離酸堿化合物就就復(fù)雜一點(diǎn)，增加了添加劑，明白了添加劑的作用，然后從溶劑，酸堿性，添加劑等方面入手。問題就容易解決。     

液相色譜采用鍵合硅膠可以分離絕大多數(shù)的分析物質(zhì)，針對(duì)不同化學(xué)性質(zhì)的單體采用不同的鍵合硅膠，現(xiàn)在有什么十八烷　、氨基柱、氰基、苯基太多了，再加上不同流動(dòng)相也就是加入不同的抑制劑可以測(cè)許多成分，比如：酸性的可以用十八烷加入酸，加緩沖鹽；堿性物質(zhì)可以加緩沖鹽，以個(gè)人來講用離子對(duì)的形式較多，并且效果也很好，現(xiàn)在分析生物堿是比較難做的，我現(xiàn)在就有一個(gè)難題，就說鹽酸水蘇堿吧，在低波長(zhǎng)的吸收，UV是不行了，用蒸發(fā)光檢測(cè)器，但是分離又成了問題，我試了十八烷，氨基柱、氰基、都不理想，并且用過日本的shodex（C18）柱PH9-10不好。不好做呀，在郁悶中…………………   液色迷人  

如用反相色譜柱時(shí)，一般先改變有機(jī)相與水相的比例；再考慮改變pH值，酸性物質(zhì)將pH值調(diào)低，堿性物質(zhì)將pH值調(diào)高；如兩者都無效，可考慮加入離子對(duì)試劑，如庚烷磺酸鈉用于（堿性藥物）     

我覺得溶劑過濾器抽濾時(shí)抽走一部分有機(jī)相使保留時(shí)間相差較大。     

其實(shí)流動(dòng)相的調(diào)節(jié)也是很難的，一個(gè)條件下來是非常的不易呀，從查文獻(xiàn)到，條件成熟，有一次我做麻黃就是二個(gè)月呀，最后才定下來，現(xiàn)在的水蘇堿又是一個(gè)大頭，現(xiàn)在為什么生物堿這樣的難做呢，柱前衍生我是考慮過，但對(duì)柱子是有影響的，同時(shí)處理也麻煩。

對(duì)于流動(dòng)相的抽濾對(duì)測(cè)定是沒什么影響的，一個(gè)穩(wěn)定的條件，是不計(jì)較那一點(diǎn)損失的，如果抽濾對(duì)于測(cè)定的影響非常之大這個(gè)條件是不穩(wěn)的。

現(xiàn)在的流動(dòng)相在檢驗(yàn)所比例是可調(diào)的，但酸堿不變，所以我個(gè)人認(rèn)為在一定的比例范圍內(nèi)，耐用性一定要好。有高手的話對(duì)我的水蘇堿給一點(diǎn)意見     液色迷人

一. 反相HPLC中的溶劑優(yōu)化：1.首先應(yīng)調(diào)整k’值：強(qiáng)溶劑→20％遞減→選擇合適的溶液強(qiáng)度，使得k’在1～20（tR：3～35min）。 一種方法是首先試用一種可能過強(qiáng)的流動(dòng)相，在后面的試驗(yàn)中逐漸減小溶劑強(qiáng)度以增大k’。當(dāng)所有譜峰符合1＜k’＜20的范圍時(shí)，從溶劑強(qiáng)度的觀點(diǎn)來說，其流動(dòng)相已接近最佳了。(觀察待分離組分的分離度)。（反相色譜——溶劑極性弱洗脫能力強(qiáng)，組分k’減?。Ａ硪环N方法是首次用梯度洗脫試驗(yàn)。通過這一實(shí)驗(yàn)，有可能估計(jì)出使樣品的k’值符合1＜k’＜20范圍的大概溶劑成分。2.改變選擇性(á)：根據(jù)分子間作用力將溶劑分組。不同組的溶劑選擇性不同，根據(jù)溶劑分組改變?nèi)軇┓N類即可改變選擇性。

二. 離子對(duì)HPLC中的溶劑優(yōu)化: 離子對(duì)色譜法是分離離子，或可電離的分子的一種色譜技術(shù)。關(guān)于離子對(duì)色譜的機(jī)理，至今仍不十分明確，但己提出三種機(jī)理：離子對(duì)形成機(jī)理，離子交換機(jī)理，離子相互作用機(jī)理。在以下討論中，采用離子對(duì)形成機(jī)理。

① 基本原理：有一色譜體系，固定相為非極性，如C18型鍵合相，流動(dòng)相為水溶液，并在其中加入一種電荷與組分離子相反的離子B+，B+離子由于靜電引力，與帶負(fù)電的組分離子生成離子對(duì)，故稱它為平衡離子或成對(duì)離子。由于離子對(duì)具有疏水性，因而被非極性固定相(即有機(jī)相)提取。組分離子的性質(zhì)不同，它與平衡離子形成離子對(duì)的能力大小不同，以及離子對(duì)的極性不同，導(dǎo)致各組分離子在固定相中滯留的時(shí)間不同，因而各離子先后離開色譜柱，這就是離子對(duì)色譜法的基本原理。以上這類色譜法稱反相離子對(duì)色譜法。能用離子對(duì)色譜法分離的樣品種類很多。它可以用于極性樣品，如堿類、酸類、離子、以及帶有可離解的多種官能團(tuán)化合物的分離?？捎糜谏眢w液的分析，如甾族化合物以及體液中藥物的分析。

反相離子對(duì)色譜中流動(dòng)相的影響小結(jié) ：1.改變選擇性：a.改變?nèi)軇┓N類: 改變?nèi)軇┻x擇性的方法，類似于鍵合相色譜所介紹的原則。選用不同選擇性組別的溶劑，可使流動(dòng)相的選擇性得到明顯改進(jìn)。b.改變pH: 組分離子與平衡離子的生成，離子對(duì)的形成，都與流動(dòng)相的pH值密切相關(guān)。改變流動(dòng)相的pH可以改變體系的選擇性。流動(dòng)相的pH值應(yīng)調(diào)節(jié)到能使不同組分有合適的離解度，而使提供平衡離子的化合物能完全離解。要符合這一要求，只有使提供平衡離子的化合物在一個(gè)很寬的pH范圍內(nèi)保持完全離解，因此，只有強(qiáng)酸鹽(高氯酸鹽或烷基磺酸鹽)和強(qiáng)堿鹽(季銨鹽)才滿足此要求。c.系統(tǒng)選擇:使用一種有機(jī)溶劑(甲醇)；流動(dòng)相的其它三種成分為pH=2.5(和pH=7.5的緩沖液以及另一種pH=5.5、其中含有最大濃度(例如：200mM)的離子對(duì)試劑的緩沖液(D)。以組合不一的緩沖液(B—D)進(jìn)行七次實(shí)驗(yàn)，并變化甲醇(A)量以保持每次實(shí)驗(yàn)的k’值范圍大致恒定。

三.正相HPLC中的溶劑優(yōu)化

①溶劑

非極性溶劑：正己烷或FC-113（1,1,2-三氟-1,1,2-三氯乙烷）

極性溶劑：非定位、堿性定位和非堿性定位

按正相HPLC中譜峰間距效應(yīng)分類的溶劑

取代和定位是正相HPLC流動(dòng)相選擇性的主要來源

②溶劑強(qiáng)度調(diào)節(jié)

③選擇性影響

四、梯度洗脫

梯度洗脫給色譜分離帶來很大的方使，已成為高效液相色譜法不可缺少的部分。所謂梯度洗脫，就是有兩種(或兩種以上)不同極性的溶劑，在分離過程中按一定程序連續(xù)地改變，以改變流動(dòng)相的配比和極性。通常用的流動(dòng)相為二元的。

梯度期間，強(qiáng)溶劑B(如反相HPLC中的甲醇)的濃度增大。在下述討論中，我們將這種溶劑的濃度寫作 B％ 。

梯度洗脫對(duì)分離一定種類的樣品很理想。可提高分離度、縮短分離時(shí)間、降低最小檢測(cè)量和提高分離精度。梯度洗脫對(duì)于復(fù)雜混合物、特別是保留值相差較大的混合物的分離是極為重要的手段。因?yàn)檫@些樣品的k’范圍寬，不能用等度方法簡(jiǎn)單地處置。

１．梯度洗脫期間的平均k’值

tR=tm(1+k’)

VR=Vm(1+k’)=Vm+kVs     

我做液相時(shí)，為什么主峰總是出現(xiàn)肩峰？是柱效降低了還是制劑中的成分沒有完全被分離出來？應(yīng)該如何處理肩峰？     

　　出現(xiàn)上述情況的原因，可能大致考慮以下幾個(gè)方面：一、就是組分影響，也就是有與主峰保留時(shí)間相近的組分峰（雜質(zhì)峰）的存在；二、柱子柱效明顯降低，是柱子要壞掉的先兆；三、主藥在流動(dòng)相中發(fā)生部分離解，使一部分主藥的結(jié)構(gòu)狀態(tài)發(fā)生改變。等。

　　解決方法，對(duì)應(yīng)解之，即可。液色迷人

　?。▊€(gè)人見解）     

各們講的都很厲害啊，我是初學(xué)者不太了解。

但在操作中常要根據(jù)要分離的物質(zhì)加適當(dāng)?shù)碾x子對(duì)試劑，

而離子對(duì)試劑是如何選擇的呢？     

我在做鹽酸水蘇堿時(shí)也遇到了樓上的問題，嘗試了UV及ELSD，都不是很理想，最近看到有人用柱前衍生然后用UV，但自己沒做過，不知效果怎樣。但出于檢測(cè)方法應(yīng)該越簡(jiǎn)單越好真想快點(diǎn)找個(gè)即簡(jiǎn)便又有效的方法。

  我也在做鹽酸水蘇堿，用的是SCX（離子交換柱）柱，出峰時(shí)間在8——9分鐘之間，樣品經(jīng)處理后基線分離的比較好，唯一不好的就是峰型有些拖尾。因?yàn)樗牧鲃?dòng)項(xiàng)是緩沖溶液，所以調(diào)了一下配比，發(fā)現(xiàn)離子交換柱出峰并不象ODS柱那么有規(guī)律，隨著pH的加大，峰對(duì)稱性升高，峰寬減小，離子交換柱出峰有一明顯波谷反而寬度增加，峰形變大。鹽酸水蘇堿標(biāo)準(zhǔn)品峰對(duì)稱性最多只能達(dá)到0.58

不過還是比ODS柱出峰要好     

針對(duì)做生物堿的朋友：

1. 用常規(guī)的ODS柱會(huì)出現(xiàn)一個(gè)最普遍的問題是：峰很寬，拖尾很嚴(yán)重！

原因：ODS柱有很多未鍵合的硅羥基，與N締合造成。

解決方案：使用BDS柱，他是用堿鈍化殘余的硅羥基，很好的避免了拖尾現(xiàn)象！

2. 用常規(guī)的SCX離子交換柱會(huì)出現(xiàn)一個(gè)普遍的問題是：重現(xiàn)性差，隨流動(dòng)相的pH值大小，Rt變化大！

原因：所謂離子交換柱，就是陰陽正負(fù)離子的交換，由于流動(dòng)相的離子濃度的變化，勢(shì)必會(huì)影響交換平衡！

解決方案：流動(dòng)相用Buffer緩沖液！     

向各位老師請(qǐng)教，我做液相時(shí)出現(xiàn)了進(jìn)空白，樣品，原料都沒有主峰的現(xiàn)象，過去做過這個(gè)，正常，請(qǐng)幫忙分析一下     

補(bǔ)充一下，以前配流動(dòng)相是乙腈與鹽混合過濾，再超聲，這次是先濾鹽，后濾乙腈，再超聲，這一步應(yīng)沒問題吧     

我買的新的ODS碳18柱子,做白藜蘆醇和它的苷,標(biāo)樣混標(biāo),出峰比較好.但是后幾個(gè)點(diǎn)保留值提前,今天進(jìn)樣,發(fā)現(xiàn)有肩峰,但是保留時(shí)間基本一致.流動(dòng)相是甲醇和水,40比60.怎么辦呢     

hu_2104411 wrote:

我買的新的ODS碳18柱子,做白藜蘆醇和它的苷,標(biāo)樣混標(biāo),出峰比較好.但是后幾個(gè)點(diǎn)保留值提前,今天進(jìn)樣,發(fā)現(xiàn)有肩峰,但是保留時(shí)間基本一致.流動(dòng)相是甲醇和水,40比60.怎么辦呢

可能是柱子臟了，用異丙醇或者四氫呋喃沖洗一下，柱子現(xiàn)在的壓力比最初使用時(shí)高多少？     

請(qǐng)問base-deactivated octadecylsilyl silica gel是什么柱？謝謝！     

to ：xinyiaa

bds是填料經(jīng)過堿基去活的ods,就是將硅膠表面的硅醇基堿性硅烷化,適合于弱堿性和弱酸性化合物. 對(duì)于某些色譜的分離較好。對(duì)于離子對(duì)色譜，有時(shí)不加離子對(duì)，分離也很好，峰的對(duì)稱性也有很大改善，當(dāng)然，其作用不止這些?？梢援?dāng)作普通的ods用，但價(jià)格較貴。     

我接觸液相剛一個(gè)月，做碩士課題，用液相分離血中的ATP,ADP,AMP,NAD,NADH,NADPh,NADP

條件：4.6*250，5um，流動(dòng)相：磷酸鉀緩沖液，0.05mol/l，ph6.0,甲醇10%

流速1.0ml/min

跟文獻(xiàn)上的一樣可是我的ATP,ADP出峰時(shí)間早了兩分鐘，而且兩者根本分不開了，所有的原因都想到了可分離度還是很低。

另外，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品分離可以，但樣品分不開，怎么解決呢？

只要學(xué)過大學(xué)化學(xué)的人對(duì)乙腈（Acetonitrile，ACN，化學(xué)式：CH₃CN）都應(yīng)該不會(huì)陌生。乙腈相對(duì)弱的極性，出色的溶解能力，粘滯系數(shù)小，易揮發(fā)和低化學(xué)活性使得它成為一個(gè)最為常見的化學(xué)溶劑之一，特別是在色譜分離有機(jī)化合物方面（反相色譜分析，RPLC），乙腈和水組成的二元體系可謂是不二之選。以我所在的實(shí)驗(yàn)室為例，乙腈絕對(duì)是必不可少，簡(jiǎn)單來講，如果實(shí)驗(yàn)室消耗第一多的溶劑是水，乙腈就當(dāng)仁不讓的排在了第二位。 毫不夸張的說，每時(shí)每刻儀器里面都流動(dòng)著乙腈。

然而，從今年10月開始，全球突然無預(yù)警的爆發(fā)了一場(chǎng)乙腈的短缺。（我也是前兩天才知悉，有點(diǎn)圡......）到底有多短缺呢？舉個(gè)例子好了，我們實(shí)驗(yàn)室在10月份的時(shí)候向Fisher定購了1箱乙腈，現(xiàn)在都十二月了，還是沒貨。據(jù)說，這一波短缺還將持續(xù)下去，樂觀的分析說在明年一月底就會(huì)陸續(xù)好轉(zhuǎn)，然而來自幾個(gè)主要Vendor的內(nèi)部消息說短缺會(huì)持續(xù)到明年第一季度末，那會(huì)是明年三月底了?。。】梢韵胂蟮氖窃诮酉聛淼膸讉€(gè)月內(nèi)，很多實(shí)驗(yàn)室的運(yùn)作會(huì)收到嚴(yán)重的影響?，F(xiàn)在回想我三個(gè)星期前（當(dāng)時(shí)我還沒有得知這個(gè)全球性的短缺），我十分豪氣的用了4升的乙腈，眼睛都沒有眨一下。罪過啊，現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室?guī)齑娴囊译嬉呀?jīng)不到1升了，還要撐幾個(gè)月，唉，越想越罪過......

但是為什么突然會(huì)出現(xiàn)短缺呢？這說來話長(zhǎng)了，還得從如何生產(chǎn)乙腈說起。

生產(chǎn)乙腈有很多方法，但具有工業(yè)化效益的似乎就一兩條工藝。先撇開Monsanto開發(fā)的高溫高壓下催化氨氣和一氧化碳直接合成乙腈的“綠色化學(xué)”方法（非主流，市場(chǎng)占有比例小）不談，最普及的工藝卻是并不直接合成乙腈，而是在氨氣氛圍下直接氧化短鏈烯烴（好像是丙烯）合成丙烯腈的同時(shí)分離出這個(gè)反應(yīng)的副產(chǎn)物之一：乙氰。對(duì)于這種工藝，乙腈可以回爐作為燃料來維持反應(yīng)溫度，也可以提純出來作為獨(dú)立的產(chǎn)品。而全世界絕大多數(shù)的工廠都采用回爐的方式消耗掉乙腈。在選擇提純乙腈作為產(chǎn)品銷售的工廠中，又以美國德州的一個(gè)工廠（Ineos）和中國的工廠為主要供應(yīng)商。所以乙腈本來的供應(yīng)都不算富裕，特別是在北美市場(chǎng)。而2008年，奧運(yùn)年，中央政府為了實(shí)現(xiàn)其綠色奧運(yùn)的承諾，關(guān)閉和限產(chǎn)了很多化工廠，再加上出口退稅政策的改變，乙腈出口驟減。據(jù)我猜測(cè)，今年年初由于燃料價(jià)格飆升，很有可能有些工廠也因此改變工藝，回爐了乙腈維持反應(yīng)爐溫度，從而達(dá)到減少燃料使用的目的。但是如果僅僅是中國大陸還不至于造成這么嚴(yán)重的短缺。今年九月，颶風(fēng)艾克（Hurricane Ike）襲擊了美國德州（美國最重要的乙腈生產(chǎn)基地），導(dǎo)致工廠設(shè)備嚴(yán)重受損，雖然現(xiàn)在已經(jīng)恢復(fù)生產(chǎn)了，但是產(chǎn)能還是收到了一定的影響。這無疑對(duì)已經(jīng)存在的市場(chǎng)短缺雪上加霜。但是奧運(yùn)在八月，颶風(fēng)在九月，都過了3個(gè)月了，為什么市場(chǎng)還是沒有恢復(fù)正常呢？畢竟這兩個(gè)問題都容易解決，只要改變政策（奧運(yùn)已過），修好設(shè)備，一兩個(gè)月就應(yīng)該恢復(fù)正常。這就不得不說到最后一個(gè)原因了。這最后一個(gè)原因，我個(gè)人覺得是為什么這次的短缺會(huì)持續(xù)很長(zhǎng)時(shí)間的最重要原因。那就是經(jīng)濟(jì)衰退。乙腈作為丙烯腈生產(chǎn)過程的一個(gè)副產(chǎn)物，其產(chǎn)量當(dāng)然會(huì)收到丙烯腈工業(yè)的影響。然而丙烯腈是用來干什么的呢？作為石油化工的重要一環(huán)，丙烯腈（CH₂CHCN）是生產(chǎn)塑料，橡膠，樹脂等重要工業(yè)產(chǎn)品的單體原料。舉一個(gè)簡(jiǎn)單例子好了，ABS樹脂（Acrylonitrile butadiene styrene）就是由丙烯腈聚合而來，而ABS樹脂可以用來干什么呢？你所能想象到的所有家電產(chǎn)品幾乎都有ABS的蹤跡：從電視機(jī)外殼，電話，冰箱內(nèi)襯，到玩具，水管，球拍，汽車的內(nèi)架、方向盤等......數(shù)不甚數(shù)。（扯遠(yuǎn)了，－_－'''）用腳趾頭想都知道，經(jīng)濟(jì)衰退，丙烯腈需求減小，工廠減產(chǎn)丙烯腈，自然乙腈也產(chǎn)量自然也高不了。而且事實(shí)也是如此，一個(gè)主要生產(chǎn)丙烯腈的工廠已經(jīng)決定在明年一月分停工2個(gè)星期，以節(jié)省開支。唉，綜合分析，天災(zāi)，人禍，市場(chǎng)規(guī)律最終導(dǎo)致和決定了乙腈短缺的發(fā)生和將持續(xù)下去的事實(shí)。