一. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span> 1. 掌握DNA指紋圖譜技術(shù)的概念、原理和基本操作過(guò)程 2. 學(xué)習(xí)DNA的限制性酶切的基本技術(shù) 3. 掌握瓊脂糖凝膠電泳的基本操作技術(shù),學(xué)習(xí)利用瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定DNA片段的長(zhǎng)度,并能對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析。 二. 實(shí)驗(yàn)原理 1984年英國(guó)萊斯特大學(xué)的遺傳學(xué)家Jefferys及其合作者首次將分離的人源小衛(wèi)星DNA用作基因探針,同人體核DNA的酶切片段雜交,獲得了由多個(gè)位點(diǎn)上的等位基因組成的長(zhǎng)度不等的雜交帶圖紋,這種圖紋極少有兩個(gè)人完全相同,故稱為"DNA指紋",意思是它同人的指紋一樣是每個(gè)人所特有的。DNA指紋的圖像在X光膠片中呈一系列條紋,很像商品上的條形碼。DNA指紋圖譜,開創(chuàng)了檢測(cè)DNA多態(tài)性(生物的不同個(gè)體或不同種群在DNA結(jié)構(gòu)上存在著差異)的多種多樣的手段,如RFLP(限制性內(nèi)切酶酶切片段長(zhǎng)度多態(tài)性)分析、串聯(lián)重復(fù)序列分析、RAPD(隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA)分析等等。各種分析方法均以DNA的多態(tài)性為基礎(chǔ),產(chǎn)生具有高度個(gè)體特異性的DNA指紋圖譜,由于DNA指紋圖譜具有高度的變異性和穩(wěn)定的遺傳性,且仍按簡(jiǎn)單的孟德爾方式遺傳,成為目前最具吸引力的遺傳標(biāo)記。 DNA指紋具有下述特點(diǎn): 1.高度的特異性:研究表明,兩個(gè)隨機(jī)個(gè)體具有相同DNA圖形的概率僅3×10-11;如果同時(shí)用兩種探針進(jìn)行比較,兩個(gè)個(gè)體完全相同的概率小于5×10-19。全世界人口約50億,即5×109。因此,除非是同卵雙生子女,否則幾乎不可能有兩個(gè)人的DNA指紋的圖形完全相同。 2.穩(wěn)定的遺傳性:DNA是人的遺傳物質(zhì),其特征是由父母遺傳的。分析發(fā)現(xiàn),DNA指紋圖譜中幾乎每一條帶紋都能在其雙親之一的圖譜中找到,這種帶紋符合經(jīng)典的孟德爾遺傳規(guī)律,即雙方的特征平均傳遞50%給子代。 3.體細(xì)胞穩(wěn)定性:即同一個(gè)人的不同組織如血液、肌肉、毛發(fā)、精液等產(chǎn)生的DNA指紋圖形完全一致。 1985年Jefferys博士首先將DNA指紋技術(shù)應(yīng)用于法醫(yī)鑒定。 1989年該技術(shù)獲美國(guó)國(guó)會(huì)批準(zhǔn)作為正式法庭物證手段。 我國(guó)警方利用DNA指紋技術(shù)已偵破了數(shù)千例疑難案件。DNA指紋技術(shù)具有許多傳統(tǒng)法醫(yī)檢查方法不具備的優(yōu)點(diǎn): 如它從四年前的精斑、血跡樣品中,仍能提取出DNA來(lái)作分析;如果用線粒體DNA檢查,時(shí)間還將延長(zhǎng)。此外千年古尸的鑒定,在俄國(guó)革命時(shí)期被處決沙皇尼古拉的遺骸,以及最近在前南地區(qū)的一次意外事故中機(jī)毀人亡的已故美國(guó)商務(wù)部長(zhǎng)布朗及其隨行人員的遺骸鑒定,都采用了DNA指紋技術(shù)。 此外,它在人類醫(yī)學(xué)中被用于個(gè)體鑒別、確定親緣關(guān)系、醫(yī)學(xué)診斷及尋找與疾病連鎖的遺傳標(biāo)記;在動(dòng)物進(jìn)化學(xué)中可用于探明動(dòng)物種群的起源及進(jìn)化過(guò)程;在物種分類中,可用于區(qū)分不同物種,也有區(qū)分同一物種不同品系的潛力。在作物的基因定位及育種上也有非常廣泛的應(yīng)用。 |
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