當我們選擇到了適合的感受態(tài)細胞,我們又怎么使用轉(zhuǎn)化它呢? 轉(zhuǎn)化是指某一基因型的細胞從周圍介質(zhì)中吸收來自另一基因型的細胞DNA,而使它的基因型和表現(xiàn)型發(fā)生相應(yīng)變化的現(xiàn)象。細菌細胞轉(zhuǎn)化是非常常見且簡單的分子實驗,除了最傳統(tǒng)的化學(xué)轉(zhuǎn)化外,還有電穿孔轉(zhuǎn)化的方法。 一、電轉(zhuǎn)化 電轉(zhuǎn)化原理十分簡單,當電流穿過細胞的時候,會在細胞膜上形成臨時的孔洞,那么攜帶負電的質(zhì)粒DNA在這個電勢場中會被移動,而后恰好穿過孔洞,進入細胞。這個過程和電泳類似,DNA分子移動來移動去,最后掉進了細胞里。 二、化學(xué)轉(zhuǎn)化 正常的大腸桿菌細胞與CaCl2 溶液混合后,許許多多的Ca2+(鈣離子)附著在細胞膜表面,帶正電的鈣離子們有助于引導(dǎo)和輔助帶負電的DNA質(zhì)粒與細胞膜結(jié)合。當質(zhì)粒DNA穿膜進入細胞的時候,正電鈣離子也很好的掩蓋了DNA的負電性,使得通過憎水性磷脂層的過程更加容易。使質(zhì)粒進入細胞的方法是短暫42°C的熱擊。 |
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