病原學(xué)檢測(cè)對(duì)于感染性疾病的診斷和治療非常重要，因此，臨床微生物實(shí)驗(yàn)室在醫(yī)院感染治療和控制中起到關(guān)鍵作用。目前，大部分臨床微生物實(shí)驗(yàn)室采用商品化的鑒定系統(tǒng)鑒定臨床分離的細(xì)菌，但是對(duì)于一些臨床不常見的細(xì)菌，傳統(tǒng)的鑒定方法(如革蘭染色、生化反應(yīng)等)更加實(shí)用有效。因此，本文參照CLSI M32-A2文件列舉了一些臨床不常見細(xì)菌的特征和鑒定方法，希望對(duì)臨床微生物實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)工作有所幫助。

 一. 不常見革蘭陰性菌

 1. 布氏桿菌屬

布氏桿菌屬是一類革蘭陰性細(xì)小桿菌，牛、羊、豬等動(dòng)物最易感染。人類接觸帶菌動(dòng)物或食用病畜及其乳制品，均可被感染。布氏桿菌病廣泛分布世界各地，我國(guó)部分地區(qū)曾有流行。布氏桿菌屬分為羊、牛、豬、鼠、綿羊及犬布氏桿菌6個(gè)種，20個(gè)生物型。中國(guó)流行的主要是羊、牛、豬三種布氏桿菌，其中以羊布氏桿菌病最為多見。

布氏桿菌屬細(xì)菌為非抗酸性，無芽胞，無莢膜，無鞭毛，呈球桿狀(見圖1)。血瓊脂(BAP)上為透明或半透明、光滑且有光澤菌落。此細(xì)菌不在麥康凱瓊脂上生長(zhǎng)。布氏桿菌屬細(xì)菌尿素陽性，觸酶、氧化酶陽性，而吲哚陰性。由于該菌屬細(xì)菌具有強(qiáng)的傳染性，因此一旦懷疑應(yīng)送往LRN B級(jí)參考實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)。

 2. 空腸彎曲菌

空腸彎曲菌是一種人畜共患病病原菌，可以引起人和動(dòng)物發(fā)生多種疾病，并且是一種食物源性病原菌，認(rèn)為是引起全世界人類細(xì)菌性腹瀉的主要原因。其致病因素包括粘附、侵襲、產(chǎn)生毒素和分子模擬機(jī)制等四個(gè)方面，通過分子模擬機(jī)制可以引起最嚴(yán)重的并發(fā)癥一格林一巴利綜合征?？漳c彎曲菌可以通過產(chǎn)生細(xì)胞緊張性腸毒素、細(xì)胞毒素和細(xì)胞致死性膨脹毒素而致病?？漳c彎曲菌對(duì)紅霉素、新霉素、慶大霉素、四環(huán)素、氯霉素、卡那霉素等抗生素敏感，但近年發(fā)現(xiàn)了不少耐藥菌株及多重耐藥性菌株。

空腸彎曲菌菌體輕度彎曲似逗點(diǎn)狀。菌體一端或兩端有鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑，在暗視野鏡下觀察似飛蠅。有莢膜，不形成芽胞。微需氧菌，在含2.5～5% 氧和10% CO2的環(huán)境中生長(zhǎng)最好，在正常大氣或無氧環(huán)境中均不能生長(zhǎng)，最適溫度為37～42℃。本菌在普通培養(yǎng)基上難以生長(zhǎng)，在凝固血清和血瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)36 小時(shí)可見無色半透明毛玻璃樣小菌落，單個(gè)菌落呈中心凸起，周邊不規(guī)則，無溶血現(xiàn)象?？漳c彎曲生化反應(yīng)不活潑，不發(fā)酵糖類，不分解尿素?？蛇€原硝酸鹽，氧化酶和觸酶為陽性。能產(chǎn)生微量或不產(chǎn)生硫化氫，甲基紅和v-p試驗(yàn)陰性，枸椽酸鹽培養(yǎng)基中不生長(zhǎng),在彎曲菌中馬尿酸呈陽性反應(yīng)具有重要鑒定價(jià)值。

 3.“HACEK”群細(xì)菌

HACEK是指一組革蘭陰性桿菌：嗜血桿菌屬(H)、放線桿菌屬(A)、人心桿菌屬(C)、艾肯菌屬(E)、金氏桿菌屬(K)。這組微生物的共同特征是易導(dǎo)致心內(nèi)膜感染，約占全部感染性心內(nèi)膜炎的5-10%，它們是導(dǎo)致正常人群(非靜脈藥物濫用者)心內(nèi)膜炎的常見原因之一。所有這些微生物都是口咽部正常菌群的一部分，生長(zhǎng)緩慢、喜好富二氧化碳環(huán)境。除心臟瓣膜感染，HACEK菌還導(dǎo)致其他感染：菌血癥、各類膿腫、腹膜炎、中耳炎、結(jié)膜炎、肺炎、化膿性關(guān)節(jié)炎、骨髓炎、尿路感染、傷口感染、腦膿腫、牙周感染。

嗜血桿菌屬因在生長(zhǎng)過程中需含有生長(zhǎng)因子X(氯化高鐵血紅素)和(或)V(輔酶Ⅰ)的血液瓊脂而得名。本屬細(xì)菌為革蘭陰性小桿菌，無動(dòng)力，具有明顯的多型性，不形成芽胞，需氧或兼性厭氧。流感嗜血桿菌是嗜血桿菌屬最重要的病原菌，鏡下呈球桿狀、長(zhǎng)桿狀、少數(shù)為絲狀。粘液型菌株有莢膜，毒力較強(qiáng)。菌落一般為光滑型，若與金黃色葡萄球菌在BAP上共同孵育，則在葡萄球菌菌落周圍生長(zhǎng)的流感嗜血桿菌菌落較大，這叫做“衛(wèi)星現(xiàn)象”。原因是金黃色葡萄球菌能合成較多的V因子，促進(jìn)流感嗜血桿菌的生長(zhǎng)。

放線桿菌屬為革蘭陰性桿菌，有時(shí)呈球形、橢圓形(見圖3)。兼性厭氧菌，無動(dòng)力，無莢膜，在含血清或血液的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，37℃培養(yǎng)2～3天后形成直徑約1mm的菌落。在肉湯培養(yǎng)液中生長(zhǎng)呈顆粒狀。對(duì)人或動(dòng)物致病的有伴放線放線桿菌、林氏放線桿菌和馬駒放線桿菌。伴放線放線桿菌因常見于人類的某些放線菌病的病灶中而得名。但也可單獨(dú)致病，如一些亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎是由本菌引起的。本屬細(xì)菌能還原硝酸鹽，不產(chǎn)生吲哚，尿素陽性。

人心桿菌是心桿菌屬內(nèi)唯一的種，是人的鼻腔和咽喉部的正常菌群，可引起心內(nèi)膜炎、尿路感染、腦膿腫和牙周炎等疾病。大部分菌株可從血液中分離而來，有的菌株也可從腦脊液中分離而來。人心桿菌為無鞭毛、無莢膜、無芽孢，并具有多形性的革蘭陰性桿菌(見圖4)。革蘭染色不易被脫色，單個(gè)存在或成對(duì)排列，有時(shí)形成短鏈或呈葡萄狀排列。該菌為兼性厭氧菌，某些菌株在初代分離時(shí)需要CO2，在生長(zhǎng)過程中要有一定濕度，在干燥環(huán)境中不生長(zhǎng)；在35～37 ℃均可生長(zhǎng)，但在22 ℃或42 ℃均不生長(zhǎng)。該菌在BAP上不溶血，經(jīng)24h 培養(yǎng)后菌落很小，48h 后可達(dá)1mm，菌落為圓形、凸起、光滑、有光澤而邊緣整齊，某些菌株的菌落可長(zhǎng)入培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)基表面瓊脂凹陷。麥康凱瓊脂上不生長(zhǎng)。人心桿菌氧化酶陽性，觸酶陰性，吲哚陽性，不還原硝酸鹽。

嚙蝕艾肯菌是革蘭陰性多形性球桿菌(見圖5)，有一種漂白劑的氣味，兼性厭氧，是口腔和許多其他粘膜表面的正常菌群。嚙蝕艾肯菌是人咬傷后發(fā)生的蜂窩織炎的病原體，它也是已發(fā)現(xiàn)靜脈藥物濫用者軟組織感染和心內(nèi)膜炎主要病原體。它也能導(dǎo)致各種各樣的肺部感染(如膿胸、肺炎、敗血癥栓子)，類似嚴(yán)格偏性厭氣菌。

大多數(shù)嚙蝕艾肯菌性心內(nèi)膜炎患者有潛在的生物瓣膜病變。與其他HACEK菌不同，大多數(shù)嚙蝕艾肯菌性心內(nèi)膜炎與靜脈藥物濫用有關(guān)。嚙蝕艾肯菌在培養(yǎng)基上凹陷生長(zhǎng)，吲哚陰性，鳥氨酸陽性。

金氏桿菌屬是革蘭陰性球桿菌(見圖6)，有3個(gè)種：

金氏金氏桿菌、產(chǎn)吲哚金氏桿菌、去硝化金氏桿菌，只有金氏金氏桿菌引起心內(nèi)膜炎。與其他HACEK菌不同，金氏桿菌感染進(jìn)展相當(dāng)迅速。金氏金氏桿菌在 BAP呈大的、光滑、不透明、白色或米色、β-溶血菌落，與腸桿菌科細(xì)菌相似，但在麥康凱瓊脂上不生長(zhǎng)。金氏金氏桿菌觸酶陰性，氧化酶陽性，通常分離自無菌組織和體液。

 4. 土拉熱弗朗西斯氏菌

土拉熱弗朗西斯氏菌簡(jiǎn)稱土拉弗氏菌，是引起土拉弗氏菌病(野兔熱)的病原菌。人類感染此病多因接觸患病動(dòng)物而致，或攝食污染食物和吸入污染空氣所致。土拉桿菌是革蘭陰性多形性細(xì)菌，鏡下呈球狀、桿狀、豆?fàn)詈徒z狀等，無芽胞、無動(dòng)力、有莢膜。該菌營(yíng)養(yǎng)要求較高，在普通瓊脂培養(yǎng)基和肉湯中均不生長(zhǎng)，只在加入

胱氨酸、半胱氨酸、血液或卵黃的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，形成圓形、光滑、灰色、凸起、有粘性的菌落，在雞胚絨尿膜上也能生長(zhǎng)，在卵黃囊中生長(zhǎng)尤為茂盛，最適生長(zhǎng)溫度35℃ ～37℃ 。若從動(dòng)物或人體初次分離，一般需要3—5天。常用培養(yǎng)基主要有半胱氨酸葡萄糖血液瓊脂平板(Francis培養(yǎng)基)、卵黃瓊脂平板和半胱氨酸巧克力瓊脂。土拉熱弗朗西斯氏菌氧化酶陰性，觸酶陰性或弱陽性，β-內(nèi)酰胺酶陽性。由于該菌具有強(qiáng)傳染性，必須在生物安全柜中處理，一旦懷疑需送往LRN參考實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)。