一、概述
非發(fā)酵菌主要是指一群①不發(fā)酵或不分解糖類的②革蘭陰性③無(wú)芽胞④需氧桿菌。目前，非發(fā)酵菌包括13個(gè)屬。主要有假單胞菌屬、不動(dòng)桿菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬、莫拉菌屬、黃桿菌屬等。這些細(xì)菌大多為條件致病菌。
對(duì)于非發(fā)酵菌的鑒定，必須首先進(jìn)行種屬間的鑒別，然后進(jìn)行種間的鑒定。一般實(shí)驗(yàn)室只需用幾項(xiàng)試驗(yàn)，如氧化酶、O-F試驗(yàn)、動(dòng)力及鞭毛、菌落色素、硝酸鹽還原試驗(yàn)以及在麥康凱瓊脂上的生長(zhǎng)情況等即可對(duì)90%～95%分離的菌株作出初步鑒定。
1.培養(yǎng)溫度：多數(shù)非發(fā)酵菌適宜生存于自然界，培養(yǎng)溫度以30℃為宜。有的更適宜生長(zhǎng)于室溫（18℃～22℃）。故常規(guī)標(biāo)本應(yīng)先培養(yǎng)于35℃～37℃，再培養(yǎng)于30℃或室溫。
2.動(dòng)力與鞭毛：在非發(fā)酵菌的鑒定中，細(xì)菌是否具有鞭毛及鞭毛的特點(diǎn)有重要的診斷意義。由于非發(fā)酵菌大部分為專性需氧菌，在半固體培養(yǎng)基上觀察動(dòng)力不明顯，因細(xì)菌在瓊脂表面生長(zhǎng)，底層穿刺生長(zhǎng)不良或不生長(zhǎng)，故觀察非發(fā)酵菌的動(dòng)力以30℃或室溫12～24h培養(yǎng)物懸滴法為準(zhǔn)。有時(shí)需借助鞭毛染色予以鑒定。
3.氧化酶試驗(yàn)：該試驗(yàn)是鑒定非發(fā)酵菌的重要試驗(yàn)，非發(fā)酵菌中除不動(dòng)桿菌、嗜麥芽窄食單胞菌及個(gè)別假單胞菌外，氧化酶試驗(yàn)均為陽(yáng)性。
4.氧化-發(fā)酵（O-F）試驗(yàn)：本試驗(yàn)是確定非發(fā)酵菌與發(fā)酵菌以及測(cè)定非發(fā)酵菌是否利用糖的基本試驗(yàn)。非發(fā)酵菌對(duì)葡萄糖的代謝特點(diǎn)是氧化型產(chǎn)生微量酸。在氧化-發(fā)酵（O-F）試驗(yàn)中，應(yīng)為開管產(chǎn)酸，閉管不變。
5.在麥康凱瓊脂上生長(zhǎng)情況：如假單胞菌屬、不動(dòng)桿菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬等生長(zhǎng)，而莫拉菌屬和艾肯菌屬等不生長(zhǎng)。非發(fā)酵菌幾種主要菌屬的基本特征見表5-25-1。
表5-25-1 非發(fā)醇菌主要菌屬的基本特征
二、假單胞菌屬
假單胞菌屬為一大組革蘭陰性桿菌，大量存在于水、土壤和空氣中。在人類感染的非發(fā)酵菌中，假單胞菌屬約占70%～80%，主要為銅綠假單胞菌（約55%～65%）。其次為嗜麥芽窄食單胞菌、熒光假單胞菌、惡臭假單胞菌、產(chǎn)堿假單胞菌等。這些菌株也是醫(yī)院感染的主要病原菌。
本屬菌為無(wú)芽胞、無(wú)莢膜的革蘭陰性桿菌。大小（1.5～3.0）μm×（0.5～1.0）μm，多有極端鞭毛，為專性需氧菌。最適溫度為30℃～37℃，營(yíng)養(yǎng)要求不高，能在普通瓊脂上生長(zhǎng)。許多菌株能產(chǎn)生水溶性色素和多種胞外酶。
?。ㄒ唬┿~綠假單胞菌
銅綠假單胞菌是假單胞菌屬的代表菌種，俗稱綠膿桿菌。是醫(yī)院感染的主要病原體之一。
1.生物學(xué)特性
?。?）形態(tài)與染色：本菌為細(xì)長(zhǎng)革蘭陰性桿菌，大小為（1.5～5.0）μm×（0.5～1.0）μm，無(wú)芽胞，無(wú)莢膜。有1～3根鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑。
（2）培養(yǎng)特性：為專性需氧菌，生長(zhǎng)溫度為25℃～42℃，最適溫度為35℃，但在4℃不生長(zhǎng)，此點(diǎn)可與熒光假單胞菌區(qū)別。
在普通瓊脂平板培養(yǎng)基上，經(jīng)18～24h培養(yǎng)，可形成圓形大小不一，邊緣不整齊、扁平、隆起、光滑、濕潤(rùn)的菌落。
在血液瓊脂平板和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上，可形成5種不同形態(tài)的菌落：①典型型；②大腸菌樣型；③粘液型；④侏儒型；⑤粗糙型。
在肉湯中經(jīng)35℃18～24h培養(yǎng)，液面可形成菌膜，細(xì)菌在深層發(fā)育不良，呈微混濁或透明狀，菌液上層為藍(lán)綠色。
銅綠假單胞菌產(chǎn)生的主要色素包括：①綠膿素（水溶性色素），為藍(lán)綠色，可溶于水和氯仿，無(wú)熒光性；②熒光素為綠色熒光素，溶于水而不溶于氯仿。本菌產(chǎn)生綠膿素的菌株約75.5%，產(chǎn)生熒光素的菌株約89.9%。
（3）生化反應(yīng)：氧化酶陽(yáng)性，能氧化分解葡萄糖、木糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。本菌能利用枸櫞酸鹽，不產(chǎn)生吲哚，不產(chǎn)生H2S，能液化明膠，分解尿素，還原硝酸鹽并產(chǎn)生N2。
2.致病性：銅綠假單胞菌有多種毒力因子，如粘附素、多糖莢膜、外毒素、綠膿素、彈性蛋白酶、磷脂酶C。銅綠假單胞菌引起的局部感染常見于燒傷或創(chuàng)傷后，亦可引起中耳炎、角膜炎、尿道炎和下呼吸道感染，甚至引起心內(nèi)膜炎、肺炎，嚴(yán)重者可引起敗血癥，死亡率甚高。
耐藥性：該菌具有多重耐藥，主要是微孔蛋白的突變，可阻止抗生素由外膜進(jìn)入胞質(zhì)。初代敏感菌株在治療3～4天后可能發(fā)生耐藥。菌株對(duì)亞胺培南耐藥主要原因之一是產(chǎn)生金屬酶。
3.微生物學(xué)檢驗(yàn)
（1）標(biāo)本采集：根據(jù)病情可采集相應(yīng)的臨床標(biāo)本，如血液、腦脊液、胸水、腹水、尿液、膿液以及分泌物等。
?。?）檢驗(yàn)方法及鑒定
1）直接涂片鏡檢：綠色膿汁，分泌物可直接涂片，腦脊液、胸、腹水可直接或離心后取其沉淀物涂片，染色并鏡檢。
2）分離培養(yǎng)：血液及體液標(biāo)本可先增菌后再轉(zhuǎn)種血瓊脂和麥康凱瓊脂，膿液、分泌物、中段尿等可直接接種上述培養(yǎng)基分離培養(yǎng)。
3）初步鑒定：可依據(jù)菌落特征、色素（約10%菌株不產(chǎn)生色素）、氣味等以及涂片染色結(jié)果，氧化酶試驗(yàn)。
最后鑒定：銅綠假單胞菌的最后鑒定仍主要依據(jù)生化反應(yīng)特征，借此與其他假單胞菌相鑒別。對(duì)于不產(chǎn)生色素的銅綠假單胞菌若硝酸鹽還原試驗(yàn)、明膠液化、精氨酸雙水解酶以及0.2%硫酸銅營(yíng)養(yǎng)瓊脂生長(zhǎng)試驗(yàn)均為陽(yáng)性時(shí)仍提示本菌的可能。
4.治療：最大劑量應(yīng)用青霉素，頭孢他啶和氨基糖苷類抗生素聯(lián)合治療。
?。ǘ┦塞溠空硢伟?br> 端鞭毛1～8根，有動(dòng)力、無(wú)芽胞、無(wú)莢膜，菌落不溶血，有黃色素。氧化酶陰性，葡萄糖緩慢氧化，可水解七葉苷，液化明膠，DNA酶陽(yáng)性并可使賴氨酸脫羧，氧化分解麥芽糖。
本菌為條件致病菌，引起呼吸道、泌尿道、傷口感染，嚴(yán)重致菌血癥、心內(nèi)膜炎。該菌在非發(fā)酵菌引起的感染中分離率僅次于銅綠假單胞菌和不動(dòng)桿菌。
治療：首選磺胺類：TMP／SMZ；喹諾酮類：環(huán)丙沙星或替卡西林／克拉維酸。對(duì)亞胺培南天然耐藥不應(yīng)選用。
三、不動(dòng)桿菌屬
菌體為球桿狀，并成對(duì)排列，可單個(gè)存在，無(wú)芽胞、無(wú)鞭毛、專性需氧菌。其生物學(xué)特征為“三陰”，即氧化酶陰性，硝酸鹽還原試驗(yàn)陰性和動(dòng)力陰性。臨床重要的不動(dòng)桿菌屬細(xì)菌為醋酸鈣不動(dòng)桿菌、鮑曼不動(dòng)桿菌和洛菲不動(dòng)桿菌。該菌為條件致病菌，引起醫(yī)院感染，從血、尿、膿液、呼吸道分泌物、腦脊液分離。
四、產(chǎn)堿桿菌屬
革蘭陰性短桿菌，有時(shí)呈弧狀，單個(gè)、成對(duì)或鏈狀排列，無(wú)芽胞，多數(shù)菌株無(wú)莢膜，本菌屬菌為周毛菌。在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂上生長(zhǎng)良好，需氧，在液體培養(yǎng)基中呈混濁生長(zhǎng)，表面可形成菌膜，管底形成粘液沉淀，在含有蛋白胨的肉湯中產(chǎn)氨，使pH上升可至8.6。本菌屬菌氧化酶、觸酶均陽(yáng)性，不分解糖類，O／F培養(yǎng)基中呈堿性反應(yīng)，不分解尿素，不產(chǎn)生硫化氫，不形成吲哚，不液化明膠。廣泛存在于自然界，亦存在于人和動(dòng)物腸道及皮膚上，形成正常菌群，本菌屬細(xì)菌為條件致病菌，常引起醫(yī)院感染。
治療原則：根據(jù)體外藥敏試驗(yàn)結(jié)果，可選用哌拉西林及替卡西林／克拉維酸，選用對(duì)該菌敏感的抗生素進(jìn)行治療。
五、黃桿菌屬
黃桿菌屬為一群無(wú)動(dòng)力、無(wú)芽胞、無(wú)莢膜，革蘭陰性桿菌。氧化酶、觸酶、磷酸酶陽(yáng)性，血平板上生長(zhǎng)良好，典型菌落呈淡黃色，黃色或棕黃色。芳香黃桿菌、腦膜炎敗血性黃桿菌較常見。治療：選用磺胺、紅霉素。
