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Raw264.7細(xì)胞是一種廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究中的小鼠單核/巨噬細(xì)胞系。這種細(xì)胞系被廣泛應(yīng)用于炎癥、癌癥、免疫調(diào)節(jié)和抗病毒研究中。在這篇文章中，我們將詳細(xì)介紹Raw264.7細(xì)胞的培養(yǎng)基配制方法和常用培養(yǎng)條件。 編輯搜圖 請點(diǎn)擊輸入圖片描述（最多18字） 培養(yǎng)基配制方法 1. DMEM培養(yǎng)基配制 · 加熱70-80°C的無菌蒸餾水至60°C左右。 · 加入DMEM粉末（含高糖）和2.5%的無菌胎牛血清（FBS）。 · 加入1%的無菌L-谷氨酸、100 IU/mL的青霉素和100 μg/mL的鏈霉素。 · 用0.22 μm的過濾器過濾消毒后，即可使用。 2. RPMI 1640培養(yǎng)基配制 · 加熱70-80°C的無菌蒸餾水至60°C左右。 · 加入RPMI 1640粉末和10%的無菌胎牛血清（FBS）。 · 加入1%的無菌L-谷氨酸、100 IU/mL的青霉素和100 μg/mL的鏈霉素。 · 用0.22 μm的過濾器過濾消毒后，即可使用。 編輯搜圖 請點(diǎn)擊輸入圖片描述（最多18字） 推薦使用培養(yǎng)基和添加劑 DMEM高糖（品牌：中喬新舟 貨號：ZQ-100）+10%胎牛血清（中喬新舟 貨號：AU0600）+1%雙抗（中喬新舟 貨號：CSP006） ，推薦完全培養(yǎng)基貨號 ZQ-120 常用培養(yǎng)條件 1. 溫度和二氧化碳濃度 在培養(yǎng)Raw264.7細(xì)胞時(shí)，最適合的溫度為37℃，而二氧化碳的濃度應(yīng)該為5%。這種細(xì)胞系對氧氣濃度的要求不高，通常使用21%的氧氣濃度即可。 2. 培養(yǎng)皿的選擇 Raw264.7細(xì)胞可以在多種培養(yǎng)皿中生長，包括96孔板、24孔板、6孔板和75 cm2培養(yǎng)瓶。選擇合適的培養(yǎng)皿應(yīng)該考慮到細(xì)胞數(shù)目、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和實(shí)驗(yàn)室設(shè)備的配合等多種因素。 3. 細(xì)胞密度和細(xì)胞貼壁率 在培養(yǎng)Raw264.7細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞密度和細(xì)胞貼壁率的控制是非常重要的。一般來說，每個(gè)培養(yǎng)皿中的細(xì)胞數(shù)目應(yīng)該在1×105至1×106之間，而細(xì)胞貼壁率則應(yīng)該在70%至80%之間。 4. 培養(yǎng)基的更換 在培養(yǎng)Raw264.7細(xì)胞時(shí)，培養(yǎng)基的更換是必須的。通常情況下，建議每隔1至3天更換一次培養(yǎng)基。當(dāng)然，更換培養(yǎng)基的頻率還取決于培養(yǎng)皿的密度和細(xì)胞的生長速度。 編輯搜圖 請點(diǎn)擊輸入圖片描述（最多18字） 5. 細(xì)胞凍存 Raw264.7細(xì)胞的凍存是非常常見的實(shí)驗(yàn)操作。以下是常用的細(xì)胞凍存液配方： · 10% DMSO + 90% FBS · 10% DMSO + 90% FBS + 5% sucrose · 10% DMSO + 90% FBS + 10% glycerol 凍存前，需要將細(xì)胞在對數(shù)生長期內(nèi)收集并進(jìn)行檢測。收集細(xì)胞后，可以通過離心將細(xì)胞沉淀下來，并用凍存液進(jìn)行混合。混合后，可將混合物分裝到凍存管中，并將其放置在液氮中進(jìn)行凍存。 6. 細(xì)胞傳代 Raw264.7細(xì)胞的傳代是保持細(xì)胞生長和純度的關(guān)鍵操作之一。一般來說，每次細(xì)胞傳代應(yīng)該控制在1:3至1:5的比例。傳代的次數(shù)應(yīng)該根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要和細(xì)胞狀態(tài)進(jìn)行調(diào)整。一般來說，建議每7至10天進(jìn)行一次傳代。 總結(jié) Raw264.7細(xì)胞是一種重要的生物醫(yī)學(xué)研究工具，其培養(yǎng)條件的控制對于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性具有至關(guān)重要的意義。本文介紹了Raw264.7細(xì)胞培養(yǎng)基的配制方法和常用的培養(yǎng)條件，希望能夠?yàn)樯镝t(yī)學(xué)研究工作者提供有益的參考。同時(shí)，我們也強(qiáng)調(diào)了培養(yǎng)條件的控制和細(xì)胞操作的注意事項(xiàng)，以確保實(shí)驗(yàn)的成功和可重復(fù)性。 |
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