許多細(xì)胞必須添加促貼壁物質(zhì)才能貼壁生長, 膠原蛋白(Collagen)
是支持細(xì)胞和組織生長的重要胞外基質(zhì)蛋白,其形成的胞外環(huán)境有利于多種細(xì)胞的粘附、生長、遷移和分化。I型膠原可促進(jìn)正常細(xì)胞和轉(zhuǎn)染細(xì)胞的貼壁和增殖。膠原主要包括I型膠原,Ⅱ型膠原,Ⅲ型膠原,Ⅳ型膠原,Ⅴ型膠原,Ⅵ型膠原幾種。 I型膠原——最常見的膠原蛋白,促進(jìn)細(xì)胞的貼壁和增殖,用于內(nèi)皮細(xì)胞,肝細(xì)胞,肌細(xì)胞等的培養(yǎng)。 軟骨細(xì)胞對II型膠原的黏附性較好;上皮細(xì)胞在Ⅳ型膠原底物上貼壁良好,而在I、II、III型膠原底物的培養(yǎng)板上貼壁情況較差。 膠原應(yīng)用及建議細(xì)胞基質(zhì)濃度: 纖粘連蛋白(Fibronectin,F(xiàn)N) 一種位于細(xì)胞表面和血漿中的大分子蛋白質(zhì),是一種主要的細(xì)胞黏附分子,在細(xì)胞纖維基質(zhì)中發(fā)揮結(jié)構(gòu)和黏附性作用。 (1) 19ml 無菌的PBS加1ml的纖連蛋白 (濃度50ug/ml); 層粘連蛋白(Laminin)
是細(xì)胞外基質(zhì)的重要組成,存在于所有上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的基底側(cè),同時也是某些細(xì)胞與細(xì)胞間交互作用的中間媒介。層粘連蛋白有細(xì)胞及組織特異性,對于調(diào)節(jié)細(xì)胞功能具有重要作用,如:協(xié)助粘附、促進(jìn)生長、引導(dǎo)遷移、調(diào)控分化、維持表型、防止細(xì)胞凋亡等。 在哺乳動物胚胎中,Laminin-521和511是最早表達(dá)的胞外蛋白,在2-4細(xì)胞期,已經(jīng)可以檢測到。LN-111支持hPSCs高效,符合GMP標(biāo)準(zhǔn)地分化為均一的多巴胺(DA)前體細(xì)胞。相比擬胚體(EB)為基礎(chǔ)的實(shí)驗(yàn)方案,DA前體細(xì)胞的產(chǎn)量在LN-111上增加40倍以上。 層粘連蛋白,根據(jù)不同細(xì)胞系,包被濃度一般為5-20μg/ml。 BioLamina人類重組層粘連蛋白:化學(xué)成分限定,無異源動物成分。 使用1×DPBS(Ca2+/Mg2+)稀釋,并將包被溶液加入到培養(yǎng)皿中,確保包被溶液覆蓋整個培養(yǎng)皿表面,2-8℃孵育過夜或37℃孵育2小時。 玻璃粘連蛋白(Vitronectin)
屬于小分子蛋白,借由Vitronectin 受體讓細(xì)胞貼附于細(xì)胞基質(zhì)中,主要促進(jìn)細(xì)胞遷移,增加細(xì)胞貼附性、細(xì)胞分裂、細(xì)胞生長分化等,并協(xié)助細(xì)胞間的訊號傳遞。 BI重組玻璃粘連蛋白 Vitronectin ACF Human Recombinant 200 μg(05-754-0002) 使用濃度0.5mg/ml,預(yù)包被濃度:0.5μg/cm2 建議按如下濃度包被,適用于培養(yǎng)hPSC: 1.在冰上解凍重組玻連蛋白。 2.加入3ml /孔(6孔盤)NutriStem? V9 XF 培養(yǎng)基。 3.在37℃的CO2培養(yǎng)箱中放置至少30分鐘。 4.加入5-7.5μl玻連蛋白ACF到3ml NutriStem? V9 XF培養(yǎng)基中并旋轉(zhuǎn)。注意:也可以在NutriStem?V9 XF培養(yǎng)基中直接添加玻連蛋白ACF(濃度:0.25-0.375μg/cm2)。 MSC 促貼壁試劑 MSC促貼壁試劑是Biological industries產(chǎn)品,搭配MSC NutriStem XF Medium使用,效果更佳。MSC促貼壁試劑針對多種來源的hMSC(骨髓,脂肪組織和臍帶)特別開發(fā)。 特點(diǎn): · 無異源體系 · 適用于多種來源的MSC細(xì)胞貼壁
· 即用型,100倍濃縮液
· 適用于無血清體系
· 適用hMSC增殖和誘導(dǎo)分化試劑
可參考如下包被方法: 使用MSC Attachment solution后,MSC貼壁效果:
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來自: 小夢想在努力 > 《培養(yǎng)》