作為抗GBM抗體型腎炎的原因的巨噬細胞的控制法，著眼于FROUNT

日本東京理科大學(xué)于2022年11月21日宣布，新發(fā)現(xiàn)了現(xiàn)有的酒精依賴癥治療藥雙硫侖能夠抑制腎臟病的惡化。該研究由同大生命醫(yī)科學(xué)研究所的寺島裕也講師、松島綱治教授、藥學(xué)部的牧野宏章助教（現(xiàn)武藏野大學(xué)藥學(xué)部）、高橋秀依教授、日本醫(yī)科大學(xué)解析人體病理學(xué)的遠田悅子助教、清水章教授等研究小組進行。研究成果在線刊登在《Kidney International》上。

巨噬細胞感知生物體的異常，釋放炎癥性細胞因子和趨化因子，在用于生物體防御的炎癥·免疫應(yīng)答中發(fā)揮著中心作用。如果巨噬細胞過度工作，有時會引起組織傷害，導(dǎo)致炎癥的慢性化。在抗GBM抗體型腎炎中，由于腎臟對腎小球基底膜（GBM）的抗體，在腎小球中聚集巨噬細胞，活性化釋放的細胞因子或趨化因子引起腎小球無法控制的炎癥，表現(xiàn)出被稱為半月體的特征性形態(tài)。產(chǎn)生半月體的腎小球不能發(fā)揮本來的功能，如果涉及到整個腎臟的腎小球，就會陷入腎功能的廢棄（末期腎功能不全），需要人工透析和腎移植。在治療中，為了抑制免疫應(yīng)答，使用類固醇藥、免疫抑制藥及血漿交換療法，但治療效果有限，很多病例都達到了末期腎功能衰竭。另外，伴隨治療的感染癥等的副作用也成為問題。

本次研究著眼于研究組2005年發(fā)現(xiàn)的控制巨噬細胞游走的分子FROUNT，作為控制抗GBM抗體型腎球腎炎成因的巨噬細胞的方法。巨噬細胞在炎癥時從血液中分化出被動員到炎癥局部的單細胞。FROUNT通過作用于單細胞、巨噬細胞等白細胞在體內(nèi)游走時作為標記的趨化因子的受體CCR2和CCR5，來控制單細胞、巨噬細胞的游走活性。研究小組發(fā)現(xiàn)，在2020年，現(xiàn)有的酒精依賴癥治療藥物雙硫侖具有FROUNT抑制活性，并報道了該雙硫侖通過調(diào)節(jié)起到促進癌癥作用的巨噬細胞來抑制癌癥。

對大鼠模型給予雙硫侖，通過FROUNT抑制半月體形成和尿中白蛋白值上升

本次研究探討了具有FROUNT抑制活性的雙硫侖對抗GBM抗體型腎小球腎炎的治療效果。為了驗證雙硫侖在抗GBM抗體型腎炎中的效果，使用了對大鼠投用抗GBM抗體誘導(dǎo)腎炎的模型。在該模型中，與人的抗GBM抗體型腎小球腎炎同樣，在腎小球體上形成半月體，作為腎小球體傷害的結(jié)果，尿中白蛋白值上升。發(fā)現(xiàn)以相當于臨床用量的劑量給予雙硫侖時，能夠抑制半月體的形成和尿中白蛋白值的上升。腎炎被誘導(dǎo)后，在絲球體中觀察到巨噬細胞、接著觀察到淋巴細胞的聚集，但通過給予雙硫侖，從早期開始巨噬細胞的浸潤被抑制，之后的淋巴細胞浸潤也被抑制。此外，研究人員發(fā)現(xiàn)FROUNT抑制活性高于雙硫侖的衍生物DSF-41以更少的給藥量顯示出同等的腎炎抑制效果。雖然除FROUNT以外還報道了不同的靶點，但這些結(jié)果表明發(fā)現(xiàn)的腎炎抑制作用是通過FROUNT的抑制。

抑制巨噬細胞游走假肢的形成

作用于巨噬細胞為什嚒抑制了線球傷害。研究組對雙孢拉啡抑制腎炎的機制進行了詳細的分析，明確主要有三種機制抑制腎炎。

細胞在移動時會發(fā)出被稱為“假肢”的突起，但在詳細觀察被稱為腎小球的系蹄的毛細血管內(nèi)的巨噬細胞（或作為其前體細胞的單球）的形態(tài)的結(jié)果中，發(fā)現(xiàn)在給予了雙硫侖的大鼠中，巨噬細胞的假肢變少。研究小組此前也用培養(yǎng)細胞進行了觀察，明確了FROUNT參與假肢形成，但此次首次捕捉到，在活體組織中，由于FROUNT的阻礙，巨噬細胞的游走假肢的形成受到抑制。

直接抑制巨噬細胞產(chǎn)生細胞生成趨化因子，并減少息肉消失

其次，在腎小球的基因表達分析中，作為炎癥性細胞因子的TNF-α以及引起單細胞·巨噬細胞的趨化因子CCL2、淋巴細胞等的CXCL9的表達降低。在研究了雙硫侖對培養(yǎng)巨噬細胞刺激誘導(dǎo)的細胞因子產(chǎn)生的作用的實驗中，明確了雙硫侖具有直接抑制巨噬細胞產(chǎn)生這些細胞因子的作用。一般認為，雙硫侖抑制巨噬細胞產(chǎn)生CCL2可以抑制聚集在腎小球中的巨噬細胞被激活而進一步吸引另一個單球巨噬細胞并放大炎癥。

另外，還發(fā)現(xiàn)通過給予雙硫侖，可以減輕被稱為podsite的腎小球的毛細血管襯里而防止蛋白質(zhì)泄漏的細胞的消失。多細胞的消失是炎癥細胞產(chǎn)生的炎癥細胞因子TNF-α等的工作導(dǎo)致波德細胞脫落或死亡，被認為是形成半月體的契機。由巨噬細胞引起的TNF-α由于表達降低，可以認為通過抑制炎癥性細胞因子的機制抑制了多位點的消失。

抗GBM抗體型腎炎的人病例，病變部位有很多FROUNT陽性的巨噬細胞

在本次研究中，F(xiàn)ROUNT抑制抑制了巨噬細胞在絲球體上的聚集，同時抑制了細胞因子的產(chǎn)生，可見FROUNT復(fù)合參與了絲球體內(nèi)巨噬細胞的應(yīng)答。在研究中，以臨床應(yīng)用為目標，也研究了雙硫侖的長期效果，顯示了在抗GBM抗體型腎小球腎炎模型中，炎癥產(chǎn)生的膠原對腎組織的沉積被抑制。并且在人類抗GBM抗體型腎炎的病例中，明確了病變部位存在著大量FROUNT陽性的巨噬細胞，顯示了強烈提示FROUNT抑制藥雙硫侖對抗GBM抗體型腎炎有效的結(jié)果。

所獲得的見解有望導(dǎo)致與巨噬細胞相關(guān)的炎癥、組織傷害成為問題的各種疾病的治療方法的開發(fā)。另外，關(guān)于參與趨化因子受體信號調(diào)節(jié)細胞遷移的FROUNT如何控制巨噬細胞的活性化的分子機制尚不清楚，繼續(xù)致力于闡明。研究小組說：“根據(jù)本研究的成果，可以期待阻礙FROUNT的既存藥雙孢拉用于治療導(dǎo)致腎功能衰竭的難治性腎炎。”