Abbexa無細(xì)胞 DNA 試劑盒是通過酶水解裂解樣品和通過二氧化硅磁珠的特異性吸附純化無細(xì)胞 DNA 的理想解決方案。適用于從 0.5-10 ml 血清或血漿中分離純化高質(zhì)量的游離 DNA。提取的 DNA 可用于 PCR、qPCR 和 NGS，也可用于基于磁珠的核酸提取系統(tǒng)。

Abbexa 套件組件：

結(jié)合緩沖液：120 毫升

清潔緩沖液：30 毫升

洗滌緩沖液：24 毫升

洗脫緩沖液：4 ml

蛋白酶 K (20 mg/ml)：3 × 1 ml

20% SDS：6 毫升

磁性無細(xì)胞珠：2 毫升

Abbexa 無細(xì)胞 DNA試劑盒基本參數(shù)：

目標(biāo) 游離 DNA

貯存 將磁珠在 2-8°C 下儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)一年，不要冷凍。在室溫下儲(chǔ)存所有其他試劑。

使用說明 試劑制備：

工作結(jié)合緩沖液：在 120 毫升結(jié)合緩沖液中加入 40 毫升異丙醇，制備工作結(jié)合緩沖溶液。

清潔工作緩沖液：在 30 毫升清潔緩沖液中加入 30 毫升異丙醇，制備清潔工作緩沖溶液。

工作洗滌緩沖液：將 96 毫升異丙醇添加到 24 毫升洗滌緩沖液中以制備工作洗滌緩沖溶液。

注：

使用前渦旋磁珠。

使用無菌、無核酸和無核酸酶的離心管和移液器吸頭。

游離 DNA 的成分含量J低，建議使用低核酸吸附離心管進(jìn)行血漿儲(chǔ)存、DNA 提取和 DNA 儲(chǔ)存。

避免試劑、樣品和分離的 DNA 反復(fù)凍融循環(huán)。

根據(jù)下表在 15 ml 或 50 ml 離心管中制備反應(yīng)系統(tǒng)。

零件 血漿體積

0.5 毫升 1 毫升 2 毫升 4毫升 10 毫升

20% 安全數(shù)據(jù)表 25微升 50微升 100 微升 200 微升 500 微升

蛋白酶K 15微升 30微升 60微升 120 微升 300 微升

工作綁定緩沖區(qū) 0.75 毫升 1.5 毫升 3 毫升 6毫升 15 毫升

磁性無細(xì)胞珠 10微升 20微升 40微升 80微升 200 微升

檢測(cè)程序：

1、根據(jù)上表建立反應(yīng)體系。

2、渦旋管子 15 秒，然后在室溫下放置 20 分鐘。在這段時(shí)間內(nèi)將試管倒置 3-5 次。

3、磁分離：將離心管放在磁力架上，然后用手輕輕地左右旋轉(zhuǎn)離心管。當(dāng)磁珠開始向管壁聚集時(shí)，反轉(zhuǎn)自旋方向，重復(fù) 2-3 次。確保蓋子上的任何珠子聚集到管壁上。靜置 2 分鐘并確保所有珠子都聚集在管壁上。

4、從磁珠的另一側(cè)丟棄上清液，注意不要去除磁珠本身。從磁力架上取下試管并加入 1 ml 工作清潔緩沖液（含異丙醇）。渦旋 15 秒，然后轉(zhuǎn)移到新的 1.5 ml 離心管中。如果磁珠留在原管中，將上清液轉(zhuǎn)移回原管，洗滌，然后轉(zhuǎn)移到 1.5 ml 離心管中。重復(fù)步驟 3 進(jìn)行另一次磁選。

5、棄去上清液。將試管從磁力架上取下，加入 1 ml 工作洗滌緩沖液（含異丙醇）。渦旋 15 秒，然后重復(fù)步驟 3 進(jìn)行另一次磁分離。

6、重復(fù)步驟 5。

7、丟棄上清液，包括蓋子上的任何液體。建議使用較小尺寸的移液器吸頭徹底去除上清液。

8、靜置并風(fēng)干 5-10 分鐘。

9、根據(jù)下表添加洗脫緩沖液

零件 原始等離子體積

0.5 毫升 1 毫升 2 毫升 4毫升 10 毫升

洗脫緩沖液 20微升 30微升 50微升 75微升 200 微升

渦旋管 5 分鐘。

10、將離心管放在磁性支架上。將液體轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的 1.5 ml 低核酸吸附離心管中，注意不要去除磁珠本身。

11、將分離的 DNA 儲(chǔ)存在-20°C。