|
FlowJo 是美國斯坦福大學 Leonard Herzenberg 實驗室研發(fā)的一款流式數(shù)據(jù)分析軟件，它可以對所有流式細胞儀產(chǎn)生的數(shù)據(jù)進行分析，在多種電腦操作系統(tǒng)上兼容性良好。 由于功能強大，簡單易用，已經(jīng)被生命科學領域內(nèi)的科學家、實驗室廣泛使用；同時 FlowJo 也是各高影響力核心期刊最受歡迎的流式數(shù)據(jù)分析軟件。 本文主要針對流式分析中常用的平均熒光強度 (MFI)，五個小步驟帶你快速分析出 MFI。 打開 FloJo，顯示工作臺。
找到原始數(shù)據(jù)（fcs 格式文件）
Ctrl+A 將所有文件全選，鼠標將其直接拖到 All Samples 中，如圖：
針對數(shù)據(jù)一進行分析 1、鼠標左鍵點擊 fcs 格式數(shù)據(jù)出現(xiàn)流式散點圖，X 軸默認選擇 SSC（側(cè)向散射，其散射強度與細胞內(nèi)顆粒結(jié)構的質(zhì)量正相關，即細胞內(nèi)顆粒結(jié)構越復雜，質(zhì)量越大，SSC 越大；反之越?。?。 Y 軸默認選擇 FSC（前向散射，該值與細胞的直徑正相關，即細胞越大，F(xiàn)SC 越大；反之越?。?。
2、圈門：根據(jù)實驗目的選擇合適的圈門工具（矩形門、十字門、橢圓門、多邊形門）進行圈門，圈出需要進行分析的細胞后點 OK 確認。圈出的細胞默認為 Lymphocytes（當然也可以根據(jù)自己的需要重命名），下方的比例代表這群細胞占總細胞的百分比。
3、對圈出細胞進行分析，雙擊 Lymphocytes 選中這群細胞，根據(jù)實驗目的、染料所需的熒光激發(fā) / 發(fā)射波長選擇合適的橫縱坐標，完成后關閉處理界面回到軟件主界面。 我選取的橫坐標是 PE-A，縱坐標是 Histogram，點擊橫坐標邊上的 T 可將橫坐標數(shù)值改為 log 值，將其變?yōu)檎担玫较聢D。
4、添加 MFI：選擇橫坐標下方的Σ Statistion，點擊下面的Σ+ 打開新界面，單擊左邊框的 Mean，選擇想要分析的 PE-A，點擊 Add 添加可以使其 MFI 在Σ Statistion 框中顯示。
對其他數(shù)據(jù)進行批處理中 鼠標拖拽已處理文件到 All Samples 中，即可實現(xiàn)對其他數(shù)據(jù)的批量處理，簡單高效。
數(shù)據(jù)導出 點 File 下方的 Save As 可導出到 Excel 表格，通過篩選等命令對數(shù)據(jù)快速處理，十分方便。
以上是本人對流式分析中常用到的 MFI 處理所了解的基本操作，希望對大家有所幫助。 |
|
|
