一、實(shí)驗(yàn)原理

PCR 全稱聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（英文：Polymerase chain reaction），是利用DNA雙鏈復(fù)制的原理，在生物體外大量擴(kuò)增特定DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，其特點(diǎn)是可以以微量的DNA為模板，快速擴(kuò)增得到大量拷貝。原理是基于DNA 半保留復(fù)制與堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，是在體外模擬DNA的天然復(fù)制過程，主要由'變性-退火-延伸’這三個(gè)基本步驟構(gòu)成，變性：DNA雙鏈在高溫條件（95℃）下解旋形成單鏈；退火：降低溫度可使引物結(jié)合到單鏈DNA上，DNA聚合酶結(jié)合到引物上；延伸：DNA 聚合酶在其最適反應(yīng)溫度（72℃）開始沿著DNA鏈5'-3' 方向合成互補(bǔ)鏈。隨著PCR 的進(jìn)行，生成的DNA本身將作為模板，從而啟動(dòng)鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，原始DNA模板被指數(shù)擴(kuò)增。

 二、實(shí)驗(yàn)試劑

Taq酶，M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶，dNTPs， DEPC處理水，雙蒸水

 三、實(shí)驗(yàn)儀器

電泳儀， PCR儀，高速離心機(jī)，移液器，電泳儀，電泳槽，紫外分析儀

 四、操作步驟

1．cDNA的合成

逆轉(zhuǎn)錄體系的組成：

2．PCR擴(kuò)增特異性片段

25ul PCR體系的組成：

五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

整個(gè)操作始終注意避免RNA酶的污染；

PCR反應(yīng)靈敏，注意避免試劑污染；

酶易失活，整個(gè)操作注意在冰上進(jìn)行。

設(shè)立對(duì)照：陽(yáng)性對(duì)照：陽(yáng)性模板，陰性對(duì)照：陰性模板，試劑對(duì)照：除模板外的所有組分。