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分子診斷第1站:8種性傳播疾病檢測(cè)

 Cheximing 2021-02-24

性傳播疾病(STD, sexually transmitted disease),顧名思義以性接觸為主要傳播方式的一組疾病。國(guó)際上將20多種通過(guò)性行為或類(lèi)似性行為引起的感染性疾病列入性病范疇。較常見(jiàn)的性病有淋病、梅毒、非淋菌性尿道炎、尖銳濕疣、沙眼依原體、軟下疳、生殖器皰疹、滴蟲(chóng)病、乙型肝炎和艾滋病等。

其中,梅毒、淋病、生殖器皰疹、尖銳濕疣、軟下疳、非淋菌性尿道炎、性病性淋巴肉芽腫和艾滋病等8種性病被列為我國(guó)重點(diǎn)防治的性病。其中梅毒、淋病、艾滋病屬于《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》規(guī)定管理的乙類(lèi)傳染病。

流行病學(xué)

據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)報(bào)道:

  • 全世界每天有100多萬(wàn)人獲得性傳播感染。
  • 每年估計(jì)有3.57億人新感染下述四種性傳播感染中的一種:衣原體、淋病、梅毒和滴蟲(chóng)。
  • 估計(jì)有5億多人感染生殖器單純皰疹病毒。
  •   超過(guò)2.9億名婦女感染人乳頭瘤病毒,它是宮頸癌的主要致病因素,每年造成57萬(wàn)例宮頸癌和超過(guò)30萬(wàn)例宮頸癌死亡。
  • 2型單純皰疹病毒和梅毒等性傳播感染會(huì)使艾滋病毒感染風(fēng)險(xiǎn)增加3倍。
  • 2016年,約有100萬(wàn)名孕婦感染梅毒,導(dǎo)致逾20萬(wàn)例死胎和新生兒死亡。
  • 全球估計(jì)有2.4億人患有慢性乙型肝炎;
  • 淋病和衣原體等性傳播感染是女性盆腔炎和不孕癥的主要病因。
  • 淋球菌抗微生物藥物耐藥監(jiān)測(cè)規(guī)劃顯示,耐藥性逐漸增加,且對(duì)廣譜頭孢菌素已出現(xiàn)耐藥性。

傳播途徑
通常,性病的傳播途徑主要有3種
  • 直接性接觸傳染
  • 間接接觸傳染
  • 母嬰傳播。

據(jù)統(tǒng)計(jì),占90%以上的性病是通過(guò)性交而直接傳染的,因此,性病的傳播主要是通過(guò)性接觸。
 
重點(diǎn)防治的性病及病原體診斷簡(jiǎn)介
1、艾滋病
艾滋病,又稱(chēng)為獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS),是由于機(jī)體感染人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV),亦被稱(chēng)為艾滋病毒。
 
  • HIV實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),包括篩查實(shí)驗(yàn)和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)
 
當(dāng)感染了HIV后,特異性的標(biāo)志物會(huì)按照以下順序出現(xiàn)在血液中:
  1. HIV RNA
  2. P24 抗原
  3. HIV 抗體
所以,為了盡可能地縮短檢測(cè)窗口期,目前市場(chǎng)上針對(duì)HIV檢測(cè)試劑方法包括免疫法、分子檢測(cè)法和病毒培養(yǎng)法,每種方法都有自己的特點(diǎn)和應(yīng)用場(chǎng)所。
 
關(guān)于HIV的介紹和診斷,在此不再多做介紹。具體詳見(jiàn)文章《全面了解HIV:病毒學(xué)、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)》

HIV, 圖片來(lái)源網(wǎng)絡(luò) 

2、淋病
淋病是淋病奈瑟菌(簡(jiǎn)稱(chēng)淋球菌)引起的以泌尿生殖系統(tǒng)化膿性感染為主要表現(xiàn)的性傳播疾病。

  • 根據(jù)淋病診斷行標(biāo),實(shí)驗(yàn)室檢查包括:

  • 涂片革蘭染色鏡檢
臨床疑似患者取分泌物,涂片,做革蘭染色鏡檢,可見(jiàn)典型的多形核白細(xì)胞內(nèi)革蘭陰性雙球菌。有明顯尿道癥狀的男性淋菌性尿道炎尿道分泌物標(biāo)本鏡檢陽(yáng)性有確診價(jià)值。
 
  • 淋球菌培養(yǎng)
取尿道或?qū)m頸分泌物,或其他臨床標(biāo)本做淋球菌培養(yǎng),可從臨床標(biāo)本中分離到形態(tài)典型、氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性的菌落。取菌落做涂片檢查,可見(jiàn)革蘭陰性雙球菌,糖發(fā)酵試驗(yàn)分解葡萄糖,不分解其他糖。
 
  • 淋球菌核酸檢測(cè)
取尿液、尿道或?qū)m頸分泌物標(biāo)本做淋球菌核酸檢測(cè)陽(yáng)性。

淋病耐瑟雙球菌,圖片來(lái)源網(wǎng)絡(luò) 

3、梅毒
梅毒是由蒼白密螺旋體蒼白亞種(treponemapallidumsubp. pallidum),又名梅毒螺旋體感染人體所引,起的一種系統(tǒng)性、慢性性傳播疾病。
 
  • 根據(jù)梅毒診斷行標(biāo),檢測(cè)方法如下:
 
  • 梅毒螺旋體暗視野顯微鏡檢查
梅毒螺旋體檢查一般采用濕系聚光器。倘若斜射光線(xiàn)遇到載玻片上的物體,如螺旋體等,物體會(huì)發(fā)光。

  • 梅毒螺旋體鍍銀染色檢查
梅毒螺旋體具有親銀性,可被銀溶液染成棕黑色, 在普通顯微鏡下可觀察到梅毒螺旋體。
 
  • 梅毒螺旋體核酸擴(kuò)增試驗(yàn)
采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法。通過(guò)特異引物和特定條件下的熱循環(huán)反應(yīng),對(duì)皮損部位組織液、淋巴穿刺液及腦脊液等樣品中的梅毒螺旋體進(jìn)行核酸檢測(cè), 在早期梅毒、神經(jīng)梅毒和先天梅毒等診斷中具有一定的價(jià)值。
 
PCR引物:梅毒螺旋體核酸擴(kuò)增檢測(cè)一般使用bmp、 tpp47、 polA等基因序列的引物。

  • 梅毒血清學(xué)檢查
當(dāng)人體感染梅毒螺旋體后4周~10周,血清中可產(chǎn)生一定數(shù)量的抗類(lèi)脂質(zhì)抗原的非特異性抗體(反應(yīng)素) 和抗梅毒螺旋體抗原的特異性抗體。這些抗體均可用免疫學(xué)方法進(jìn)行檢測(cè)。血清學(xué)檢查是輔助診斷梅毒的重要手段。

根據(jù)檢測(cè)所用抗原不同,梅毒血清學(xué)試驗(yàn)分為兩大類(lèi):一類(lèi)為非梅毒螺旋體血清學(xué)試驗(yàn)(又稱(chēng)梅毒非特異性抗體試驗(yàn)), 主要包括VDRL、 RPR、 TRUST等;另一類(lèi)為梅毒螺旋體血清學(xué)試驗(yàn)(又稱(chēng)梅毒特異性抗體試驗(yàn)) ,包括TPPA、 FTA-ABS、 ELISA、CLIA、 RT等。
 
1)非梅毒螺旋體血清學(xué)試驗(yàn)
梅毒螺旋體一旦感染人體,人體迅速對(duì)被損害的宿主細(xì)胞以及梅毒螺旋體細(xì)胞表面所釋放的類(lèi)脂物質(zhì)作出免疫應(yīng)答,在3周~4周產(chǎn)生抗類(lèi)脂抗原的抗體(亦稱(chēng)為反應(yīng)素)。這些抗體主要是IgG和IgM型混合抗體。非梅毒螺旋體試驗(yàn)是使用心磷脂、卵磷脂及膽固醇作為抗原的絮狀凝集試驗(yàn)。
 
2)梅毒螺旋體血清學(xué)試驗(yàn)
采用梅毒螺旋體提取物或其重組蛋白作為抗原,為特異性抗原,檢測(cè)血清中抗梅毒螺旋體IgG或IgM抗體,其敏感性和特異性均較高。
 
梅毒螺旋體,圖片來(lái)源網(wǎng)絡(luò)
4、尖銳濕疣
尖銳濕疣這個(gè)疾病表現(xiàn)為生殖道菜花狀的贅生物,它的病原體是人乳頭瘤病毒(HPV)。HPV是一種嗜上皮組織的無(wú)包膜雙鏈環(huán)狀DNA病毒,屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬,能引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖。

低危型HPV就是導(dǎo)致尖銳濕疣的元兇,而高危型HPV感染則和宮頸癌等一些生殖道惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。
 
  • 目前臨床應(yīng)用廣泛的HPV檢測(cè)方法

主要為病毒基因組的DNA檢測(cè),該類(lèi)檢測(cè)方法很多,主要分為HPV分型檢測(cè)及不分型檢測(cè)。目前,也有HPV不分型基礎(chǔ)上的部分分型檢測(cè),主要檢測(cè)12個(gè)高危型及2個(gè)疑似高危型66和68,其中16、18型為分型檢測(cè),而其他為不分型檢測(cè)。
 
國(guó)內(nèi)HPV分子診斷試劑注冊(cè)癥33張,主要包括 HPV-DNA 的檢測(cè)和以 HPV E 6 /E 7 mRNA 為靶分子的 HPV-RNA 檢測(cè)。
 
HPV,圖片來(lái)源網(wǎng)絡(luò)
5、生殖器皰疹
臨床上主要是由單純皰疹病毒-II(HSV-II),少數(shù)由單純皰疹病毒-I (HSV-I )所引起的一種性傳播疾病。
 
  • 目前臨床上檢測(cè)方法

主要以血清學(xué)檢測(cè)IgM或/和IgG來(lái)判斷感染情況
分子診斷檢測(cè):采用核酸檢測(cè)熒光PCR的方法進(jìn)行病灶部位病原檢測(cè)。

HSV,圖片來(lái)源網(wǎng)絡(luò)
 
6、非淋菌尿道炎( non-gonococcal urethritis ,NGU)
主要是沙眼衣原體、解脲支原體等通過(guò)性接觸所引起的尿道炎癥,在西方國(guó)家已成為發(fā)病人數(shù)最多的性病。
 
  • 沙眼衣原體是一種有DNA和RNA,能夠通過(guò)濾器,嚴(yán)格的細(xì)胞內(nèi)寄生,以二分裂方式繁殖的原核細(xì)胞型微生物。
 
  • 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè):

  • 直接涂片鏡檢

染色鏡檢,觀察有無(wú)衣原體或包涵體,受取樣以及操作等影響。
  • 分離培養(yǎng)

用感染組織的滲出液或刮取物,接種雞胚卵黃囊或傳代細(xì)胞,分離衣原體,再用免疫學(xué)方法鑒定。
  • 免疫學(xué)方法

i: 血清學(xué)試驗(yàn)

主要用于性病淋巴肉芽腫的輔助診斷。常用補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn),若雙份血清抗體效價(jià)升高4倍或以上者,有輔助診斷價(jià)值。也可用ELISA、凝集試驗(yàn)。
 
ii:病原體檢測(cè)
沙眼衣原體快速檢測(cè)目前分定性和定量快速檢測(cè)。目前流行常用的為金標(biāo)定性快速檢測(cè)(膠體金法)。用抗衣原體脂多糖單克隆抗體,采用雙抗體夾心的形式建立的衣原體檢測(cè)方法。
 
  • PCR試驗(yàn)

設(shè)計(jì)不同的特異性引物,應(yīng)用多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)可特異性診斷沙眼衣原體,具有敏感性高,特異性強(qiáng)的特點(diǎn),現(xiàn)被廣泛應(yīng)用。

沙眼衣原體,圖片來(lái)源網(wǎng)絡(luò)
 
  • 解脲支原體是介于細(xì)菌與病毒之間的最小原核生物,主要寄居于人體的泌尿生殖道,其中解脲脲原體(UU)屬于解脲支原體的一種,當(dāng)機(jī)體免疫力下降時(shí),是性傳播疾病的重要病原體之一,不僅可引起陰道、宮頸等生殖器感染,而且與流產(chǎn)、不育及胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩有密切關(guān)系。
 
  • 一般實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法:

  • 分離培養(yǎng)
    一般是通過(guò)分泌物培養(yǎng)來(lái)檢查。
  • 免疫學(xué)
    血清學(xué)IgM、IgG檢測(cè)
  • 分子診斷:PCR試驗(yàn)

設(shè)計(jì)不同的特異性引物,應(yīng)用多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)可特異性診斷解脲支原體,具有敏感性高,特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。
 
解脲支原體,圖片來(lái)源網(wǎng)絡(luò)

7、性病淋巴性肉芽腫
這個(gè)病是屬于性傳播疾病,它的病原體是沙眼衣原體,又叫第四性病。在我國(guó),一般這種病例比較罕見(jiàn)。
 
8、軟下疳
軟下疳是由杜克雷嗜血桿菌感染引起,主要發(fā)生于生殖器部位多個(gè)痛性潰瘍,多伴有腹股溝淋巴結(jié)化膿性病變的一種性傳播疾病。本病由性交傳染,臨床上男性多于女性患者,在我國(guó)比較少見(jiàn)。

  • 一般實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法:
 
  • 顯微鏡檢查
直接涂片檢查發(fā)現(xiàn)革蘭染色陰性杜克雷嗜血桿菌。此法敏感性差。
  • 培養(yǎng)法
杜克雷嗜血桿菌培養(yǎng)陽(yáng)性,為診斷金標(biāo)準(zhǔn)。
  • 病理學(xué)檢查
有符合軟下疳潰瘍的組織病理表現(xiàn)。組織切片中有時(shí)可找到杜克雷嗜血桿菌。
  • 核酸檢測(cè)
聚合酶鏈反應(yīng)法等檢測(cè)杜克雷嗜血桿菌核酸陽(yáng)性。
 
杜克雷嗜血桿菌,圖片來(lái)源網(wǎng)絡(luò)

防控性傳播疾病的意義
性傳播疾病嚴(yán)重危害患者身心健康,可導(dǎo)致不育癥、生殖器畸形或缺損、毀容及特征性后遺癥,已成為世界性的嚴(yán)重公共衛(wèi)生問(wèn)題。

性傳播疾病病原體的檢測(cè)對(duì)于性傳播疾病監(jiān)測(cè)、診斷或血液篩查,控制性傳播疾病的流行,確保優(yōu)生優(yōu)育等尤為重要。

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