貓傳染性腹膜炎的最新研究進(jìn)展

一掬飄雪 2020-07-15

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突變導(dǎo)致貓冠狀病毒的毒性增強(qiáng)；

多因素綜合診斷，包括病毒檢測(cè)；

目前關(guān)于貓傳染性腹膜炎的治療仍在研究中，包括抑制病毒的復(fù)制、改變貓的免疫反應(yīng)。

貓傳染性腹膜炎（FIP）的獨(dú)特之處在于：病原體貓冠狀病毒（FCoV）很常見，但威脅生命的FIP卻不常見。FIP最常見于2歲以下的貓，即使檢測(cè)到FCoV或相應(yīng)抗體也不能確診感染FIP，臨床上在診斷FIP時(shí)具有很大的挑戰(zhàn)性。

特征、病史和臨床癥狀

如上所述，F(xiàn)IP常見于年輕貓咪，通常不到1歲。雖已認(rèn)定該疾病具有品種傾向性，但FIP的易感性似乎主要發(fā)生在家族血統(tǒng)中，患貓可通過繁殖進(jìn)行基因遺傳。此外，高密度的飼養(yǎng)環(huán)境也是FIP發(fā)病的因素之一（無血緣關(guān)系），增加了FCoVb暴露和接觸的機(jī)會(huì)，如繁育貓舍或流浪貓救助場(chǎng)所。同時(shí)應(yīng)激會(huì)增加FCoV脫落的數(shù)量，促進(jìn)FIP的發(fā)展，如手術(shù)（去勢(shì)或絕育），或貓群中社會(huì)等級(jí)的變化等。

已知導(dǎo)致FIP發(fā)生的宿主因素包括主要組織相容性復(fù)合體（MHC）特征、細(xì)胞因子反應(yīng)的質(zhì)量和細(xì)胞介導(dǎo)免疫（CMI）反應(yīng)的特征。FIP患貓對(duì)病毒有明顯的體液反應(yīng)，而不是更有效的CMI反應(yīng)，但具體導(dǎo)致疾病發(fā)展的特定分子特性目前只是被推測(cè)出來的。

FIP的臨床癥狀取決于對(duì)病毒的體液反應(yīng)。潛在的病理狀態(tài)是免疫介導(dǎo)的，由于抗體對(duì)病毒和病毒感染細(xì)胞產(chǎn)生強(qiáng)烈但無效的反應(yīng)，導(dǎo)致至少部分是抗體依賴性細(xì)胞毒性和免疫復(fù)合物沉積。其中病程相對(duì)迅速且具有廣泛的血管炎，以滲出為主（如體腔積液，尤其是腹部）稱為“濕”型。而病程更持久，相對(duì)隱匿、無滲出的，疾病癥狀與累及的器官組織相關(guān)（如腸炎、腎臟疾病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病或單眼/雙眼前葡萄膜炎）稱為“干”型。大多數(shù)患貓表現(xiàn)為昏昏欲睡、食欲減退或無食欲、體重減輕和發(fā)熱（通常逐漸消退）。

發(fā)病機(jī)制更新

FCoV是I類冠狀病毒，與犬腸道冠狀病毒和豬傳染性胃腸炎病毒有關(guān)。大多數(shù)野毒株為I型FCoV，而II型與犬腸道冠狀病毒的抗原性關(guān)系更為密切。冠狀病毒有一個(gè)龐大的RNA基因組，當(dāng)一個(gè)以上的病毒分離物感染一個(gè)細(xì)胞時(shí)，它容易導(dǎo)致單個(gè)分離物內(nèi)的高突變率以及在病毒之間進(jìn)行重組的能力。據(jù)認(rèn)為，II型FCoV是I型FCoV與犬腸道冠狀病毒在棘狀囊膜糖蛋白基因中發(fā)生重組后的結(jié)果，這導(dǎo)致了與I類犬冠狀病毒抗原性相關(guān)的FCoV。

雖然FCoV感染在最初時(shí)發(fā)生在腸上皮細(xì)胞，但病毒會(huì)變異成致命的FIP病毒（FIPV），具有進(jìn)入單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞并高效復(fù)制的能力，使得FIPV進(jìn)行系統(tǒng)性傳播。但隨著單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中復(fù)制效率的提高，進(jìn)入細(xì)胞的復(fù)制能力會(huì)下降。因此，F(xiàn)IPV不會(huì)脫落或在很低的水平上脫落，這可能是FIP不如其他病原體（如泛白細(xì)胞減少病毒或貓杯狀病毒)）更常見的原因之一。

RNA病毒聚合酶容易出錯(cuò)，而且缺乏校對(duì)能力，因此天生可變，病毒復(fù)制越多，突變的可能性就越大。慢性感染時(shí)更易發(fā)生持續(xù)性病毒復(fù)制。為了了解突變，必須對(duì)FCoV的基因組有一定的了解（圖1）。第一個(gè)可讀框（ORF）（譯者注：可讀框（openreadingframe,）是以起始密碼子開始，在三聯(lián)體讀框的倍數(shù)后出現(xiàn)終止密碼子之間的一段序列。當(dāng)沒有已知蛋白質(zhì)產(chǎn)物時(shí)，該區(qū)域被稱為可讀框，而當(dāng)確知該可讀框編碼某一蛋白時(shí)，它就被稱為編碼區(qū)，即一個(gè)可讀框是潛在的編碼區(qū)。）編碼了10多個(gè)用于病毒復(fù)制的個(gè)體蛋白。然后是編碼主要包膜蛋白，即棘突蛋白的基因。這種蛋白質(zhì)將病毒附著到靶細(xì)胞，使病毒進(jìn)入細(xì)胞。接下來是幾個(gè)編碼未知功能的非結(jié)構(gòu)化蛋白質(zhì)的可讀框，包括3a-c可讀框。M基因編碼膜蛋白，膜蛋白是一種小的結(jié)構(gòu)蛋白，與病毒的包膜和核心相互作用。E基因產(chǎn)生一個(gè)較小的包膜蛋白，而N基因編碼的是包被體蛋白，它以螺旋狀的核心覆蓋著核酸。最后，7a-b可讀框也編碼功能未知的非結(jié)構(gòu)蛋白。能夠?qū)е翭IP表型突變的基因有：棘突基因、3a-c基因、膜基因和7a-bORFs。

棘突基因

病毒基因組突變導(dǎo)致細(xì)胞趨化性的改變，可能與FIP毒力和發(fā)育變化有關(guān)。這種變化至少部分是由于棘突囊膜糖蛋白基因突變引起的。這種表面特性是病毒附著到靶細(xì)胞上所必需的，在細(xì)胞向性中起著重要作用。在棘突蛋白基因中發(fā)現(xiàn)的突變包括兩個(gè)由Chang和Colleagues鑒定的與FIP表型相關(guān)的2個(gè)密碼子，在183個(gè)FIPV分離株中，95%以上的分離株具有該基因組特征。這些核苷酸的變化導(dǎo)致病毒包膜和細(xì)胞膜融合區(qū)域內(nèi)2個(gè)位置的氨基酸發(fā)生變化。研究人員推測(cè)，這些變化導(dǎo)致病毒在單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中的有效復(fù)制。這種細(xì)胞向性的改變被認(rèn)為在FIP的發(fā)展中起作用。

在研究了棘突蛋白基因中與獲得毒力性質(zhì)相關(guān)的變化。研究人員得出結(jié)論，這個(gè)基因組區(qū)域的變化，導(dǎo)致了棘突蛋白的蛋白水解輔酶家族識(shí)別位點(diǎn)的調(diào)節(jié)，這對(duì)FIP的發(fā)展至關(guān)重要。該突變是否是唯一與FIP向性變化或發(fā)展相關(guān)的突變尚不清楚。這種向性的改變似乎不足以導(dǎo)致所有貓的FIP，因?yàn)樵S多貓的血液中存在病毒，但在其他方面是健康的。

圖1，帶有堿基編號(hào)的FCoV基因組；條形圖表示FCoV蛋白質(zhì)的ORFs

3c蛋白

向性的改變可能與3c蛋白基因突變有關(guān)。3c蛋白是一種功能未知的非結(jié)構(gòu)病毒蛋白。在一項(xiàng)研究中，所有FCoV的糞便分離物都有完整的3c基因；那些3c基因缺失的菌株沒有在糞便中脫落。研究人員得出結(jié)論，腸道復(fù)制需要完整的3c基因。細(xì)胞向性的改變可能導(dǎo)致腸上皮細(xì)胞復(fù)制能力的喪失，這也解釋了為什么在多只貓中很少見到FIP的突變。

膜基因

FCoV膜蛋白基因的突變已被研究。FIPV的M基因突變，與毒力生物型相關(guān)。其他研究并未發(fā)現(xiàn)M基因的一致變化與FIP表型相關(guān)。

7a-bORFs

其他可能影響病毒毒性的突變包括編碼非結(jié)構(gòu)蛋白7a和7bORFs的基因突變。蛋白質(zhì)產(chǎn)物功能未知，但在FIP病例中檢測(cè)到的病毒中發(fā)現(xiàn)了這些基因的突變。包括7aORF的缺失突變以及7b蛋白基因的多重突變。但這些ORFs的突變并不總是發(fā)生在FIP病毒中，這限制了旨在識(shí)別這些ORFs的測(cè)試的有用性。

宿主因素在FIP的發(fā)展中起著重要作用。這些因素包括遺傳特征、年齡和并發(fā)疾病，尤其是免疫抑制性疾病，都能影響貓的免疫系統(tǒng)狀態(tài)，包括MHC多樣性、細(xì)胞因子的產(chǎn)生和淋巴細(xì)胞凋亡。遺傳學(xué)的確切作用未知，取決于不同流行病學(xué)研究中觀察到的情況。某些貓品種的遺傳易感性是已知的，個(gè)體雜合度的降低與對(duì)FIP的敏感性和抵抗力的降低相關(guān)。應(yīng)避免近親繁殖和使用發(fā)生FIP的貓的父系或母系。

環(huán)境因素，包括應(yīng)激也會(huì)影響FIP的發(fā)展。來自或生活在多貓環(huán)境中的貓更易患FIP。這種發(fā)展可能是因?yàn)槎嘀回埳钤谝黄饡r(shí)，F(xiàn)CoV感染的可能性更高。導(dǎo)致FCoV暴露的其他因素包括貓的高密度、頻繁的引種、再引進(jìn)、來自不同來源的貓的混合（如，收養(yǎng)所、繁殖場(chǎng)所以及貓展等）、存在慢性FCoV脫落，消毒不充分。此外，應(yīng)激可增加糖皮質(zhì)激素的分泌，對(duì)T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生負(fù)面影響，直接導(dǎo)致CMI降低和病毒清除能力不足。

診斷更新

FIP的目前診斷仍然是特征、病史和臨床癥狀以及各種臨床試驗(yàn)的結(jié)合。最好的檢驗(yàn)方法仍然是用免疫組織化學(xué)染色法（IHC）對(duì)FCoV進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，通常只在死后進(jìn)行。

CBC

CBC結(jié)果包括終末期淋巴細(xì)胞減少的非特異性白細(xì)胞增多癥和正色素性貧血。免疫表型的流式細(xì)胞術(shù)有助于診斷：2003年發(fā)表的一項(xiàng)研究顯示，即使是淋巴細(xì)胞總數(shù)正常的貓，T淋巴細(xì)胞也會(huì)選擇性減少。事實(shí)上，淋巴減少的程度和發(fā)病時(shí)間是晚期疾病發(fā)展的預(yù)測(cè)因子：程度越大、發(fā)病越早，與疾病嚴(yán)重程度和疾病進(jìn)展速度的增加相關(guān)。

血清生化

血清生化變化反映了所涉及的器官或器官。通?？偟鞍咨?，而且?guī)缀蹩偸前浊虮龋ˋ：G）降低，反映出球蛋白的增加。A:G大于0.6到0.8對(duì)FIP有很高的負(fù)預(yù)測(cè)值。雖然低A:G的特異性較差，但在貓群中患病率較低時(shí)，較高的A：G有助于排除FIP。A:G降低可能伴有血清蛋白電泳的多克隆抗體病。大多數(shù)患有FIP的貓都有膽紅素血癥和膽紅素尿。膽紅素水平的增加是由于紅細(xì)胞的破壞和血紅蛋白的積累，而非肝臟受累。

滲出液

通常是富含細(xì)胞、蛋白質(zhì)和纖維蛋白的改良性滲出液。最近的一項(xiàng)研究顯示急性期蛋白（APP）會(huì)升高，如結(jié)合珠蛋白、血清淀粉樣蛋白A和A-1酸性糖蛋白（AGP）。在這項(xiàng)研究中，AGP被認(rèn)為是區(qū)分有和沒有FIP的貓的最佳APP，并且1550mg/mL的臨界值診斷FIP的敏感性和特異性各為93%。超聲可以識(shí)別腹部或胸膜腔中的少量液體以進(jìn)行診斷評(píng)估。

特異性檢測(cè)

包括病毒特異性抗體檢測(cè)和通過抗原或基因檢測(cè)識(shí)別FCoV感染。已知FCoV特異性抗體的血清學(xué)價(jià)值不大。抗體的存在（無論大?。﹥H表明暴露于FCoV。診斷實(shí)驗(yàn)室之間存在的關(guān)于FIP診斷的臨界值的可變性以及分析中使用的病毒株影響血清學(xué)分析的結(jié)果，并且必須加以考慮。雖然抗體效價(jià)升高與FIP一致，但在健康的FCoV感染貓身上也可以看到。此外，患有FIP的貓可能具有低或陰性的FCoV抗體滴度。這種抗體水平的下降可能反映了大量病毒與抗體的結(jié)合或免疫衰竭。因此，抗體檢測(cè)在FIP診斷中的價(jià)值值得懷疑。即使病毒特異性7b蛋白的抗體水平升高，也被證明是非特異性的。在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中，評(píng)估腦脊液（CSF）抗體水平可能有幫助：1項(xiàng)研究報(bào)告，腦脊液滴度大于640表明FIP。

病毒本身的檢測(cè)

可通過抗原檢測(cè)來完成，而在生前診斷中通常需要病毒感染細(xì)胞的免疫熒光（IF）。該試驗(yàn)對(duì)滲出液中的巨噬細(xì)胞的敏感性最高。這項(xiàng)研究顯示，F(xiàn)CoV-IF的敏感性為100%，特異性為71.4%。本次調(diào)查的樣本量很?。?0只貓患有FIP，7只貓沒有FIP）。此外，這項(xiàng)測(cè)試同樣需要滲出液，這種液體只以濕的形式存在于FIP中。而對(duì)干型病例的組織樣本通常在死后取樣檢測(cè)。在神經(jīng)系統(tǒng)FIP病例中，新鮮組織樣本上的IF遠(yuǎn)不如IHC檢測(cè)FCoV。因此，研究者認(rèn)為IHC比IF診斷FIP更為敏感和可靠。

PCR 檢測(cè)

PCR是目前最常見的病毒檢測(cè)方式。人們最初認(rèn)為，檢測(cè)血液中的病毒可以診斷FIPV。然而，F(xiàn)CoV通常可以在未受感染的貓的血液中檢測(cè)到，而感染動(dòng)物（尤其是在干性），檢測(cè)血液中的病毒可能很困難。病毒載量可能也有幫助，因?yàn)閬碜园l(fā)生FCoV感染的多貓家庭可能有高水平的病毒血癥。

棘突蛋白基因中點(diǎn)突變的存在導(dǎo)致了PCR檢測(cè)的可用性，這種方法可以識(shí)別這些突變的存在。盡管這些檢測(cè)可能有幫助，但尚不清楚這些突變是否存在于每一例FIP病例中，也不清楚這些突變是否存在于無癥狀病毒感染的貓身上。與通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)單獨(dú)檢測(cè)FCoV相比，識(shí)別棘突蛋白基因內(nèi)的突變并不能顯著提高FIP的診斷水平。此外，滲出液仍然是首選的底物。

總之：無論使用何種方法，PCR都是一種有用的檢測(cè)方法。但需謹(jǐn)記，可能存在假陰性和陽性。單用PCR是不可能確診FIP的。如果在血液、滲出液或組織樣本中發(fā)現(xiàn)突變或復(fù)制的病毒，以及本文所述的其他FIP指標(biāo)，才是診斷FIP的良好證據(jù)。金標(biāo)準(zhǔn)是用IHC對(duì)受累組織進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。但這涉及到有創(chuàng)收集樣本，這在生病和虛弱的貓身上通常是不可能的。人們希望對(duì)受影響器官/組織的細(xì)針抽吸物（FNA）的檢測(cè)能夠起到診斷作用。然而，用于IHC的FNA既不能證實(shí)也不能排除FIP。因此，在死前診斷FIP仍需要通過識(shí)別宿主因子和檢測(cè)病毒來構(gòu)建診斷墻。

治療更新

治療FIP有兩種方法：（1）改變貓對(duì)FCoV的免疫反應(yīng)；（2）直接抑制FCoV的復(fù)制。

改變貓對(duì)FCoV的免疫反應(yīng)

由于FIP是一種免疫介導(dǎo)的疾病，長(zhǎng)期以來使用皮質(zhì)類固醇一直是治療這種疾病的唯一選擇。這種皮質(zhì)類固醇的應(yīng)用可以提供一些姑息性緩解，但不影響結(jié)果。若病變是局部和局限于單一組織皮質(zhì)類固醇可能是最有用的，如前葡萄膜炎。根據(jù)疾病的嚴(yán)重程度和宿主因素，患有FIP的貓可能存活數(shù)周或數(shù)月。細(xì)胞因子已被用于免疫應(yīng)答修飾，但效果有限。無論是貓用還是人重組干擾素，對(duì)患有FIP的貓都沒有顯示出任何積極的作用。使用多烯基免疫刺激劑來增強(qiáng)T淋巴細(xì)胞反應(yīng)，以促進(jìn)貓的CMI，效果各不相同。這種藥物的作用機(jī)制尚不清楚。

直接抑制FCoV的復(fù)制

針對(duì)FCoV復(fù)制的治療有很大希望。理想的抗病毒藥物靶向病原體而不影響未受感染的細(xì)胞。復(fù)制所需的病毒酶是很好的干預(yù)靶點(diǎn)。已確定在體外和體內(nèi)抑制病毒蛋白酶活性的化合物。GC376可抑制感染FIPV的貓疾病發(fā)展并導(dǎo)致病情緩解。GC376的最小療程為12周。在試驗(yàn)中，20只自然發(fā)生FIP的貓中有13只最終復(fù)發(fā)，但7只存活下來。副作用包括注射部位的疼痛和皮下炎癥、乳牙的延遲脫落或保留以及成年牙齒的發(fā)育延遲。沒有發(fā)現(xiàn)病毒對(duì)藥物的抵抗力的發(fā)展，這種藥還需要進(jìn)一步研究，但在治療FIP方面仍有進(jìn)展。

核苷類似物GS5734和它的母體藥物GS441524，被開發(fā)用于治療人類病毒感染，被測(cè)試對(duì)抗FIPV的有效性。GS441524在貓細(xì)胞中進(jìn)行了體外評(píng)估，隨后在實(shí)驗(yàn)室貓?bào)w內(nèi)進(jìn)行了評(píng)估。隨后對(duì)自然獲得的FIP的貓進(jìn)行了現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)。26只貓接受了為期12周的藥物測(cè)試。18只貓仍然健康，而5只復(fù)發(fā)的貓接受第二次更高劑量的治療并進(jìn)入緩解期。對(duì)2只貓進(jìn)行了2次復(fù)發(fā)治療，反應(yīng)良好；因此，25只貓長(zhǎng)期存活。目前，這些藥物尚未上市。它們是通過黑市非法獲得的。

實(shí)驗(yàn)上，一種使用小干擾RNA的方法在限制病毒體外復(fù)制方面顯示了有效性。它通過誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄后基因沉默來做到這一點(diǎn)：與FCoV基因組序列相對(duì)應(yīng)的小片段RNA雙工體被引入并導(dǎo)致病毒mRNA的序列特異性靶向以破壞核酸酶。這種治療方法在體外對(duì)FCoV有效。這項(xiàng)技術(shù)能否在體內(nèi)用于FCoV尚待觀察。但在藥物輸送和消除非靶向效應(yīng)方面仍然存在一些障礙，然而，這項(xiàng)技術(shù)為該疾病的治療應(yīng)用帶來了希望。

總結(jié)

由于FIP高死亡率和FCoV感染的高流行率，使得FIP不僅是一種嚴(yán)重的疾病，它的診斷和治療都會(huì)令人困惑沮喪，需要通過包含病毒檢測(cè)在內(nèi)的多因素綜合診斷。目前關(guān)于貓傳染性腹膜炎的治療仍在研究中，而改變宿主的免疫反應(yīng)和抑制病毒復(fù)制等治療方案使人們對(duì)未來治療該疾病充滿希望。

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