間接法：

①該方法是檢測(cè)豬瘟抗體的經(jīng)典ELISA方法，其原理是在酶標(biāo)板中包被豬瘟病毒或豬瘟病毒的表面抗原蛋白，加入待檢血清同包被的抗原孵育后，加入酶標(biāo)二抗和底物顯色，通過OD值來判定豬瘟抗體的效價(jià)。

②如待檢血清中有特異性抗體，則形成包被抗原-待檢抗體-酶標(biāo)二抗三種物質(zhì)的結(jié)合物，OD值越高、顯色越深、待檢抗體含量越高，反之，則待檢抗體含量越少。顯色深淺與待檢抗體量呈正比。

阻斷法：

①該方法是基于基因工程和單克隆抗體發(fā)展起來的ELISA方法，其原理是在酶標(biāo)板中包被通過基因工程得到的豬瘟病毒保護(hù)性抗原蛋白，然后加入待檢血清與包被的抗原孵育，洗板后加入針對(duì)包被蛋白的酶標(biāo)單抗再次孵育，后加入底物顯色，通過OD值來判定豬瘟抗體的效價(jià)。

②如待檢血清中有特異性抗體，則會(huì)阻斷酶標(biāo)單抗的反應(yīng)，導(dǎo)致酶標(biāo)單抗不會(huì)或少量地同抗原蛋白結(jié)合；若待檢血清中沒有特異性抗體，酶標(biāo)單抗會(huì)更好地同抗原蛋白結(jié)合。OD值越高，顯色越深、待檢抗體含量越少，反之，則待檢抗體含量越多。顯色深淺與待檢抗體量呈反比。

在農(nóng)業(yè)部頒布的國家動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)方案中，規(guī)定可以采用阻斷ELISA或間接ELISA等方法進(jìn)行豬瘟抗體水平檢測(cè)。目前，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織推薦的豬瘟抗體檢測(cè)方法是ELISA法和熒光抗體中和試驗(yàn)（FVNT）, 其中FVNT可作為豬瘟抗體檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”。而中和試驗(yàn)對(duì)試驗(yàn)條件和操作人員的要求很高，且耗時(shí)長，僅適合專業(yè)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行少量樣本檢測(cè)，不宜推廣應(yīng)用。因此，ELISA方法是目前國際上承認(rèn)的惟一適合大規(guī)模應(yīng)用的血清檢測(cè)方法。

在進(jìn)行ELISA檢測(cè)方法評(píng)價(jià)時(shí)，最重要的兩個(gè)指標(biāo)就是敏感性和特異性。阻斷ELISA采用了單克隆抗體，因此檢測(cè)的特異性更高；而間接ELISA則更側(cè)重于敏感性。有研究表明，用OIE推薦的FVNT與上述兩種ELISA方法進(jìn)行符合驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明間接法與FVNT的符合率高于阻斷法，間接法能更真實(shí)地反映疫苗免疫后的中和抗體水平，而阻斷法對(duì)陽性樣本有漏檢情況。

阻斷ELISA方法由于采用的是蛋白純度很高的單抗，大大提高了檢測(cè)的特異性，減少了間接ELISA方法的交叉反應(yīng)和非特異性反應(yīng)。但該方法實(shí)際檢測(cè)的對(duì)象卻只是針對(duì)單一的抗體，當(dāng)陽性血清中該抗體含量較少時(shí)，會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)的敏感性降低。

間接ELISA方法由于采用的是抗原蛋白的多克隆抗體，因此會(huì)提高檢測(cè)的敏感性。但如果包被抗原的特異性或純化工藝不高，會(huì)導(dǎo)致較嚴(yán)重的非特異性反應(yīng)，影響檢測(cè)的特異性。

當(dāng)在進(jìn)行豬瘟大規(guī)模篩查時(shí)，需要對(duì)某一地區(qū)，某一豬群的整體免疫狀況進(jìn)行分析，因此對(duì)檢測(cè)方法的敏感性要求較高；而針對(duì)某一規(guī)?；i場(chǎng)來說，尤其是種豬場(chǎng)，不僅要對(duì)個(gè)體的抗體水平進(jìn)行檢測(cè)評(píng)價(jià)，還要排除其他疫病陽性抗體的干擾，因此對(duì)檢測(cè)方法的特異性要求較高。因此，阻斷ELISA和間接ELISA在實(shí)際應(yīng)用過程中，均具有合理性，具有各自的優(yōu)勢(shì)和局限。在實(shí)際應(yīng)用過程中，需根據(jù)實(shí)際情況和檢測(cè)需求選擇一個(gè)更為適合的檢測(cè)方法。