自噬是細胞在自噬相關(guān)基因(autophagy related gene,Atg)的調(diào)控下利用溶酶體降解自身受損的細胞器和大分子物質(zhì)的過程。對實現(xiàn)細胞代謝需要、更新某些細胞器并維持細胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)有較重要的作用。 近幾年,自噬研究的熱度不減,國自然相關(guān)研究的中標數(shù)量也呈增長趨勢,在2016年,自噬相關(guān)研究被授予了諾貝爾生理醫(yī)學(xué)獎。 自噬國自然中標趨勢 自噬是一種非?;A(chǔ)的生命活動現(xiàn)象,它可能參與生命活動的方方面面,比如腫瘤、炎癥、免疫應(yīng)答、氧化應(yīng)激等。通常情況下,除了研究自噬現(xiàn)象本身,大家更多的是將自噬與各種生命活動或者疾病結(jié)合起來,把自噬作為這些方向的一個機制來研究。 比如研究自噬如何參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、如何參與腫瘤的耐藥性與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移、如何參與腫瘤免疫治療的效果、自噬如何參與炎癥反應(yīng)、自噬如何參與氧化應(yīng)激,甚至自噬如何參與自閉癥、阿茲海默癥的發(fā)生與治療等。漢恒生物也為大家整理了基礎(chǔ)的自噬研究模式: 在2017年7月漢恒客戶發(fā)表的Cell論文中(文章名:Fusobacterium nucleatum Promotes Chemoresistance to Colorectal Cancer by Modulating Autophagy),也是運用了這一思路。 I-自噬參與表型-漢恒自噬黃金標準(后文詳解) II-自噬在表型中起了關(guān)鍵作用-CQ(氯喹)抑制自噬看表型 III-自噬通路關(guān)鍵基因變化導(dǎo)致表型 自噬關(guān)鍵基因的人為干預(yù) 自噬關(guān)鍵基因變化的分子機制以及跟對應(yīng)表型的關(guān)系 自噬表型研究中,漢恒生物一直倡導(dǎo) “自噬研究的金指標”----包括LC3剪切的變化、電鏡直接觀察到自噬囊泡、熒光蛋白標記的LC3監(jiān)測自噬流。 圖A 圖B 圖C 衡量自噬的三個“黃金標準”,分別是LC3的翻譯后加工及脂化修飾(圖A)、利用電鏡直接觀察自噬小體和自噬溶酶體的多少(圖B)、熒光蛋白標記的LC3監(jiān)測自噬流(圖C)。 熒光蛋白標記的LC3監(jiān)測自噬流,即用漢恒的mRFP-GFP-LC3融合蛋白的腺病毒,感染細胞。mRFP 用于標記及追蹤LC3,GFP 的減弱可指示溶酶體與自噬小體的融合形成自噬溶酶體,即由于GFP 熒光蛋白對酸性敏感,當自噬體與溶酶體融合后GFP 熒光發(fā)生淬滅,此時只能檢測到紅色熒光。 就像這樣: |
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