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專利名稱：骨關(guān)節(jié)炎的治療劑的制作方法 技術(shù)領(lǐng)域： 本發(fā)明涉及含有巰基?；腚装彼嵫苌镒鳛榛钚猿煞值挠糜诠顷P(guān)節(jié)炎的治療劑。 骨關(guān)節(jié)炎的患病部分僅限于關(guān)節(jié)，主要是負載關(guān)節(jié)。與全身自身免疫性疾病如風(fēng)濕性疾病不同的是，骨關(guān)節(jié)炎的滑液是非炎性的。在其外周血液中很少觀察到異常指標，紅細胞沉降率值和CRP值一般正常，并且風(fēng)濕因子呈陰性。 有關(guān)骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機理，現(xiàn)有研究已經(jīng)提出了不同的可能性。 其中之一是軟骨的基本機能的減弱，這歸因于軟骨細胞減少，軟骨粘蛋白的部分軟化，軟骨基質(zhì)中水含量的減少或衰老所致的膠原網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的改變；或膠原合成的減弱，其可歸因于軟骨細胞對于轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF·β)的敏感性降低，該因子在軟骨細胞中起重要作用(Arthritis Rheum.，40，1275-1281(1997))。 另一方面，來自軟骨細胞的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)的生產(chǎn)提高，這可歸因于關(guān)節(jié)或軟骨細胞上機械應(yīng)力的失衡，其由各種原因或由細胞因子如白介素-1β(IL-1β)造成，并且MMP降解基質(zhì)引起軟骨變性。實際上，人們認為患有骨關(guān)節(jié)炎或試驗性軟骨細胞的患者的軟骨組織的MMP生產(chǎn)是骨關(guān)節(jié)炎的主要成因。特別是，已知MMP-1和MMP-8不但降解膠原，而且激活各種明膠酶，這些酶可徹底降解膠原。另外，據(jù)報導(dǎo)在軟骨組織中起重要作用的MMP-3對蛋白聚糖、膠原和連接蛋白具有降解活性，并且MMP-3在骨關(guān)節(jié)炎患者和模型動物中表現(xiàn)出很強的活性(Osteoarthr.Car.，6，286-294(1998))。 此外，作為第三種發(fā)病機理，最近報導(dǎo)由于應(yīng)激、細胞因子、氧化氮(NO)或類似因素作用下軟骨細胞的細胞凋亡所致的軟骨細胞死亡參與骨關(guān)節(jié)炎(Arthritis Rheuma.，41，284-289(1998))。 業(yè)已報導(dǎo)，本發(fā)明的活性成分巰基酰基半胱氨酸類衍生物具有作為藥物的各種作用。這些作用的實例是痰溶解作用(日本特許公告No.5388/1981)、抗風(fēng)濕作用(日本特許公告No.11888/1985)、白內(nèi)障治療作用(日本特許公告No.13922/1987)、肝功能紊亂抑制作用(日本特許公告No.13964/1988)、眼色素層炎治療作用(日本公開特許公報No.96521/1990)、糖尿病治療作用(日本公開特許公報No.154721/1992)、骨質(zhì)疏松癥治療作用(日本公開特許公報No.154722/1992)、腎病治療作用(日本公開特許公報No.342524/1992)、胱氨酸尿治療作用(日本公開特許公報No.186341/1993)、炎性腸病治療作用(日本公開特許公報No.223944/1995)、延遲型變態(tài)反應(yīng)抑制作用(日本公開特許公報No.158160/1998)、內(nèi)皮生長因子抑制作用(日本公開特許公報No.324625/1998)、角膜新脈管系統(tǒng)增生抑制作用(日本公開特許公報No.712272/1999)等。在它們中，布西拉明是業(yè)已上市的藥物，并且其藥學(xué)用途已經(jīng)得到證實。然而，沒有有關(guān)其對骨關(guān)節(jié)炎作用的報導(dǎo)。 發(fā)現(xiàn)這些巰基?；腚装彼犷愌苌镒鳛樗幬锏钠渌碌乃幚韺W(xué)作用是非常令人感興趣的主題。 本發(fā)明提供了用于骨關(guān)節(jié)炎的治療劑，其含有下列通式[I]所示的化合物或其鹽(下文稱作“本發(fā)明的化合物”)作為活性成分。 其中“A”是低級亞烷基。 對上面定義的基團作更加詳細地描述。所述的低級烷基是具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈亞烷基，例如亞甲基、亞乙基，(二甲基)亞甲基或(二乙基)亞甲基。 本發(fā)明中的鹽類是指任何藥學(xué)上可接受的鹽。其實例有與堿金屬或堿土金屬如鈉、鉀或鈣形成的鹽；銨鹽；與有機胺如二乙胺或三乙醇胺形成的鹽；等等。本發(fā)明的化合物可以以水合物的形式存在。本發(fā)明的化合物中存在非對映異構(gòu)體和光學(xué)異構(gòu)體，而且它們?nèi)堪ㄔ诒景l(fā)明的范圍之內(nèi)。當(dāng)使用光學(xué)活性起始原料進行合成時，得到單一的非對映異構(gòu)體和單一的光學(xué)異構(gòu)體。當(dāng)使用外消旋體作為起始原料時，可以通過常規(guī)方法分離相應(yīng)的異構(gòu)體，例如使用光學(xué)拆分劑或類似方法。 特別優(yōu)選的本發(fā)明化合物的實例是下式[II]所示的布西拉明。 本發(fā)明化合物對關(guān)節(jié)軟骨的作用將在實施例中作詳細描述?？梢钥吹奖景l(fā)明的化合物具有MMP-3生產(chǎn)抑制作用和蛋白聚糖降解抑制作用。所以，建議本發(fā)明化合物可作為治療劑用于有MMP參與的疾病，特別是骨關(guān)節(jié)炎。 骨關(guān)節(jié)炎患者中會出現(xiàn)關(guān)節(jié)彎曲。利用兔固定模型研究本發(fā)明化合物對關(guān)節(jié)的可動性的改善作用，可以看到明顯的改善效果。 如“背景技術(shù)”部分所述，已知本發(fā)明的化合物是風(fēng)濕性疾病的有效治療劑。然而，骨關(guān)節(jié)炎是一種特征在于伴隨有衰老所致關(guān)節(jié)軟骨的退化和機械應(yīng)力所致的進行性降解的關(guān)節(jié)破壞的以及特征在于軟骨增生性變化的疾病，并且其不同于全身性自身免疫性疾病如風(fēng)溫性疾病。骨關(guān)節(jié)炎與風(fēng)濕性疾病的差別還在于滑液是非炎性的，在其外周血液中很少觀察到異常指標，通常紅細胞沉降率值和CRP值正常，并且風(fēng)濕因子呈陰性。 藥物的施用方法可以是施用本發(fā)明化合物本身作為活性化合物的方法，或者是以在體內(nèi)可分解并轉(zhuǎn)化為活性化合物的形式、又稱為前藥形式來施用本發(fā)明化合物。這兩種方法均被廣泛使用。本發(fā)明化合物在它們的分子中含有一個羧基和兩個硫羥基團。本發(fā)明化合物本身可以作為活性化合物給藥，并且也可以施用上述基團被適當(dāng)保護基保護的本發(fā)明化合物，其在體內(nèi)可以轉(zhuǎn)化為活性化合物，也就是所謂的前藥形式。 本發(fā)明的化合物可以經(jīng)口服或非腸道給藥。劑型的實例有片劑、膠囊、顆粒劑、粉末、注射劑等。本發(fā)明的化合物可以通過常規(guī)方法配制成制劑。例如，可以通過任選加入下述物質(zhì)來制備口服制劑如片劑、膠囊、顆粒劑和粉末劑稀釋劑，如乳糖、結(jié)晶纖維素、淀粉或植物油；潤滑劑，如硬脂酸鎂或滑石；粘合劑，如羥丙基纖維素或聚乙烯吡咯烷酮；崩解劑，如羧甲基纖維素鈣或低取代羥丙基甲基纖維素；包衣劑，如羥丙基甲基纖維素、聚乙二醇或硅氧烷樹脂；或成膜劑，如明膠膜。 本發(fā)明化合物的劑量可以根據(jù)癥狀、年齡、劑型等作適當(dāng)選擇。在口服制劑的情況中，本發(fā)明化合物可以每天給藥一到數(shù)次，日劑量為0.1-5000mg，優(yōu)選1-1000mg。 藥理學(xué)試驗的結(jié)果如下所示。這些不限定本發(fā)明的范圍，僅旨在使本發(fā)明能被更加清楚地理解。 通過測定MMP-3活性可以研究對MMP-3生產(chǎn)的作用。通過測定蛋白聚糖的降解產(chǎn)物葡糖胺聚糖(GAG)可以研究對蛋白聚糖降解的作用。試驗方法軟骨細胞的制備摘出雄性日本白兔的膝關(guān)節(jié)的股骨。 將股骨的表面軟骨切為小片，隨后通過酶處理使組織分離以制備軟骨細胞。培養(yǎng)基A的制備制備哺乳動物細胞培養(yǎng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基D-MEM(Dulbecco改進的Eagle培養(yǎng)基，Gibco Co.，Ltd.生產(chǎn))，其中含有α-氧代戊二酸(5μg/ml)、L-抗壞血酸(50μg/ml)、乳白蛋白水解物(0.2mg/ml)、青霉素(100U/ml)和鏈霉素(100μg/ml)(下文稱作“培養(yǎng)基A”)。受試化合物溶液的制備將受試化合物溶于二甲基亞砜(DMSO)(1×10-1M)中，隨后向該溶液中加入含有IL-1β(1ng/ml)的培養(yǎng)基A(下文稱作“培養(yǎng)基B”)以便稀釋，從而制得具有規(guī)定濃度的受試化合物溶液。 將培養(yǎng)基B用于對照組并且培養(yǎng)基A用于未處理組，進行各項試驗。測定效果的試驗在D-MEM中培養(yǎng)的軟骨細胞接種在24孔培養(yǎng)平板(1×105個細胞/孔)中，上述的D-MEM中已經(jīng)加入了胎牛血清(10％)、青霉素(100U/ml)和鏈霉素(100μg/ml)，并且培養(yǎng)直至達到融合為止。 通過用受試化合物溶液(500μl/池)替代培養(yǎng)基加入IL-1β和受試化合物。在37℃和95％空氣-5％CO2下將軟骨細胞培養(yǎng)2天。 收集培養(yǎng)上清液，用MMP-3分析試劑盒(Yagai Co.，Ltd.生產(chǎn))測定上清液中MMP-3的活性。 按照Farndale等人的方法(Biochim.Biophys.Acta，883，173-177(1986))測量上清液中GAG的濃度。 對MMP-3生產(chǎn)的作用表示為在受試化合物的規(guī)定濃度下的MMP-3生產(chǎn)抑制率(％)。 生產(chǎn)抑制率(％)＝[(A-B)/(A-C)]×100A對照組的MMP-3活性B受試化合物溶液處理組的MMP-3活性C未處理組的MMP-3活性對蛋白聚糖降解的作用表示為在受試化合物的規(guī)定濃度下的蛋白聚糖降解抑制率(％)。 降解抑制率(％)＝[(D-E)/(D-F)]×100D對照組的GAG濃度E受試化合物溶液處理組的GAG濃度F未處理組的GAG濃度結(jié)果作為試驗結(jié)果的一個實例，表1給出了在受試化合物的規(guī)定濃度下的MMP-3生產(chǎn)抑制率(％)。表1 表中的值是三個樣本的平均值。 作為試驗結(jié)果的一個實例，表2給出了在受試化合物的規(guī)定濃度下的蛋白聚糖降解抑制率(％)表2 表中的值是三個樣本的平均值。 表1和2表明，布西拉明對IL-1β刺激所致的MMP-3生產(chǎn)和蛋白聚糖降解具有抑制作用。2.對膝關(guān)節(jié)可動性的改善作用為了研究本發(fā)明化合物對骨關(guān)節(jié)炎的體內(nèi)效果，利用兔固定模型考察對膝關(guān)節(jié)可動性的改善作用。試驗方法受試化合物溶液的制備將受試化合物懸浮在1％甲基纖維素水溶液中以制備具有所需濃度的受試化合物溶液。試驗方法在戊巴比妥鈉(25mg/kg)麻醉下，用石膏繃帶將NZW兔(13周齡，體重2.97-3.27kg)的右后爪的膝關(guān)節(jié)固定為伸展位。連續(xù)4周經(jīng)口服給予兔子受試化合物(液體的給藥量10ml/kg)，在第29天用放血法處死兔子，隨后測量膝關(guān)節(jié)的可動性。用1％甲基纖維素水溶液(10mg/kg)代替受試化合物作為對照進行相似的試驗。測量的方法由最大彎曲角度與最大伸展角度之差測定膝關(guān)節(jié)的可動性，所述的最大彎曲角度是當(dāng)兔子的爪關(guān)節(jié)垂直負荷400g重量時獲得的。結(jié)果作為試驗結(jié)果的實例，表3給出在受試化合物的規(guī)定濃度下關(guān)節(jié)的可動性(程度)。采用布西拉明作為本試驗的受試化合物。表3 表中的各值是10個樣本的平均值。 表3表明，布西拉明的給藥可以改善兔子膝關(guān)節(jié)的可動性，這種改善作用在本試驗的劑量范圍內(nèi)是依賴劑量的。 藥理學(xué)試驗的上述結(jié)果顯示，本發(fā)明的化合物具有MMP-3生產(chǎn)抑制作用，蛋白聚糖降解抑制作用，并且對關(guān)節(jié)彎曲具有改善作用。因此，可以預(yù)期本發(fā)明化合物可以作為治療劑用于有MMP參與的疾病，特別是骨關(guān)節(jié)炎。 工業(yè)實用性本發(fā)明提供了含有巰基?；腚装彼犷愌苌镒鳛榛钚猿煞值挠糜谟蠱MP參與的疾病、特別是骨關(guān)節(jié)炎的治療劑。 權(quán)利要求 1.用于骨關(guān)節(jié)炎的治療劑，其含有下面通式[I]所示的化合物或其鹽作為活性成分 其中“A”是低級亞烷基。 2.權(quán)利要求1所述的用于骨關(guān)節(jié)炎的治療劑，其中“A”是-C(CH3)2-。 3.治療骨關(guān)節(jié)炎的方法，其中包括給患者施用含有下面通式[I]所示化合物或其鹽以及藥學(xué)上可接受的添加劑的組合物， 其中“A”是低級亞烷基。 4.權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于施用其中通式[I]的“A”是-C(CH3)2-的化合物。 5.下面通式[I]所示化合物或其鹽在制備治療骨關(guān)節(jié)炎的治療劑中的用途， 其中“A”是低級亞烷基。 6.權(quán)利要求5所述化合物的用途，其中A”是-C(CH3)2-。 全文摘要 有用的巰基?；腚装彼犷愌苌锪硗獾男滤幚韺W(xué)作用。用于骨關(guān)節(jié)炎的藥物,其中含有通式[I]所示化合物或其鹽作為活性成分。在式[I]中,A代表低級亞烷基,例如具有1－6個碳原子的直鏈或支鏈亞烷基,如亞甲基、亞乙基、(二甲基)亞甲基和(二乙基)亞甲基。 文檔編號A61P19/00GK1356898SQ00809284 公開日2002年7月3日 申請日期2000年6月21日 優(yōu)先權(quán)日1999年6月21日 發(fā)明者青野浩之, 高井美和 申請人:參天制藥株式會社 |
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