為了適應(yīng)醫(yī)藥工業(yè)全球化的進(jìn)展，生物樣本的分析方法也需要全球化的指導(dǎo)原則。本文就SFDA，F(xiàn)DA及EMA有關(guān)生物樣本分析的指導(dǎo)原則進(jìn)行綜述分析，了解其中的差異，為研究者進(jìn)行生物樣本分析提供參考。
　　
　　美國(guó)食品藥品管理局（FDA）在2001年頒發(fā)的關(guān)于生物分析方法驗(yàn)證（BMV）的指導(dǎo)原則。2005年SFDA頒發(fā)了三個(gè)與生物分析法相關(guān)的準(zhǔn)則：一是關(guān)于非臨床研究的，其他兩個(gè)是關(guān)于臨床研究的。
　　
　　最近，歐洲藥品管理局（EMA）發(fā)布了自己的關(guān)于BMV的草案準(zhǔn)則[8]。這些指導(dǎo)原則頒布后，引起了包括EBF（歐洲生物論壇），美國(guó)藥學(xué)科學(xué)家協(xié)會(huì)（AAPS）以及SBDG（上海生物分析討論組）和BBDG（北京生物分析討論組）在內(nèi)的組織的關(guān)注。這些組織都希望建立適用于全球的統(tǒng)一指導(dǎo)原則。
　　
　　目前這些指導(dǎo)原則存在如下方面的不同：
　　
　　1. 法規(guī)遵從
　　
　　與美國(guó)FDA的指導(dǎo)原則一樣，中國(guó)SFDA的指導(dǎo)原則沒有明確BMV是否必須遵循GLP規(guī)范。2003年9月以后，SFDA要求，非臨床毒代動(dòng)力學(xué)（TK）研究和臨床BA/BE研究應(yīng)分別遵守GLP和GCP規(guī)范，而對(duì)于人樣本的生物分析沒有規(guī)定是否仍遵循GLP規(guī)范。EMA草案明確指出，非臨床試驗(yàn)生物樣本分析無論是方法學(xué)驗(yàn)證還是樣本測(cè)定均要遵循GLP規(guī)范，而人類生物分析研究應(yīng)遵循GCP原則而不是GLP。
　　
　　2. 方法驗(yàn)證的范圍
　　
　　分析方法學(xué)的全部方法學(xué)驗(yàn)證的范圍，SFDA、FDA和EMA的要求基本一致。對(duì)于在不同種屬間進(jìn)行TK研究的生物樣本分析， SFDA和FDA指導(dǎo)原則要求在更換種屬時(shí)，僅要求部分方法學(xué)驗(yàn)證，而EMA要求全部驗(yàn)證。
　　
　　3. 對(duì)照和內(nèi)標(biāo)
　　
　　SFDA的指導(dǎo)原則要求在分析方法驗(yàn)證時(shí)應(yīng)記錄待測(cè)物、代謝產(chǎn)物及內(nèi)標(biāo)的信息（例如，純度，來源和穩(wěn)定性），但目前尚沒有具體的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。FDA指導(dǎo)原則規(guī)定了待測(cè)藥物對(duì)照品的質(zhì)量要求，但沒有強(qiáng)調(diào)作為內(nèi)標(biāo)使用的化學(xué)品的質(zhì)量要求[4]。EMA指導(dǎo)原則既規(guī)定了對(duì)照品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，又規(guī)定了內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，還對(duì)內(nèi)標(biāo)的穩(wěn)定性提出了要求[8]。
　　
　　4.選擇性，準(zhǔn)確度和精密度
　　
　　SFDA指導(dǎo)原則對(duì)選擇性、準(zhǔn)確度和精密度的要求與FDA指導(dǎo)原則相似。要求在連續(xù)3天進(jìn)行3個(gè)批次的總樣本數(shù)不少于45個(gè)的分析測(cè)試中，考察準(zhǔn)確度和精密度，而對(duì)于選擇性沒有考慮分析測(cè)試過程中代謝物轉(zhuǎn)化為母藥對(duì)分析的影響，而這在EMA指導(dǎo)原則中，這一點(diǎn)顯得十分重要[8]。
　　
　　5. 定量下限和標(biāo)準(zhǔn)曲線
　　
　　在SFDA的指導(dǎo)原則中生物樣本分析是PK研究的一部分，LLOQ被明確定義為足夠用來測(cè)定的給藥后3~5個(gè)生物半衰期長(zhǎng)的樣本或者峰濃度的1 /10～1 / 20濃度。但是并沒有提到對(duì)于創(chuàng)新藥物研究中未知PK參數(shù)時(shí)如何處理。FDA指導(dǎo)原則規(guī)定，LLOQ至少應(yīng)該滿足S/N大于5，應(yīng)能滿足測(cè)定研究藥物樣本的藥物濃度。EMA指導(dǎo)原則規(guī)定LLOQ為滿足準(zhǔn)確度和精密度要求的最低濃度。
　　
　　SFDA準(zhǔn)則中雖然規(guī)定一個(gè)方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)涵蓋所有濃度的研究樣本，但并沒有提到如何處理待測(cè)樣本濃度落入校準(zhǔn)曲線的較小范圍的情況。2007進(jìn)行了有關(guān)討論并發(fā)補(bǔ)白皮書，建議用QC樣本進(jìn)行修訂[5]，后者加入QC樣本后重新計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線，替代原標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行樣本測(cè)定。這個(gè)做法在EMA指導(dǎo)原則中沒有提到。
　　
　　6．測(cè)試物殘留
　　
　　與美國(guó)FDA指導(dǎo)原則一樣， SFDA指導(dǎo)原則沒有涉及測(cè)試物殘留的問題。由于儀器變得更加靈敏，測(cè)試物殘留對(duì)色譜法（特別是濃度接近LLOQ水平時(shí)）的精密度和準(zhǔn)確度的影響變得更大。2007年的白皮書討論了測(cè)試物殘留的來源并且進(jìn)一步建議這個(gè)問題應(yīng)該得到解決[5]。在這方面，EMA指導(dǎo)原則與2007白皮書一致。這兩個(gè)文件建議以相同的方式評(píng)估測(cè)試物殘留，并且指出應(yīng)該避免進(jìn)樣序列中隨機(jī)放置樣本。
　　
　　7. 基質(zhì)效應(yīng)
　　
　　SFDA指導(dǎo)原則對(duì)基質(zhì)效應(yīng)作了簡(jiǎn)單的定義并要求進(jìn)行評(píng)估。然而，沒有涉及進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的具體方法。在2007白皮書和EMA草案準(zhǔn)則中對(duì)進(jìn)行基質(zhì)效應(yīng)實(shí)驗(yàn)方法給出了綜合建議，但是在SFDA指導(dǎo)原則中沒有進(jìn)行相關(guān)的更新。
　　
　　8. 穩(wěn)定性
　　
　　穩(wěn)定性試驗(yàn)是方法驗(yàn)證中最重要的一個(gè)方面之一，在SFDA指導(dǎo)原則中很多問題需要明確。指導(dǎo)原則簡(jiǎn)單地強(qiáng)調(diào)，“根據(jù)具體的情況，需要進(jìn)行室溫放置，冷凍條件下，凍結(jié)—解凍條件下，以及不同貯藏期生物樣品的穩(wěn)定性研究，以確定這些樣品的貯藏條件和貯藏時(shí)間。此外，需要進(jìn)行儲(chǔ)備液及處理后樣本的穩(wěn)定性研究。”
　　
　　然而，SFDA指導(dǎo)原則中缺乏如何進(jìn)行這些試驗(yàn)的方法信息。美國(guó)FDA指導(dǎo)原則，2007白皮書及EMA指導(dǎo)原則對(duì)如何進(jìn)行穩(wěn)定性研究進(jìn)行規(guī)定。SFDA指導(dǎo)原則中應(yīng)該考慮引入許多美國(guó)FDA/EMA指導(dǎo)原則中建議的的方法。
　　
　　9. 交叉驗(yàn)證
　　
　　交叉驗(yàn)證在SFDA指導(dǎo)原則中沒有提及。與FDA指導(dǎo)原則一樣，只提到部分驗(yàn)證。部分驗(yàn)證主要用于更換實(shí)驗(yàn)室、校正曲線范圍變化、生物基質(zhì)變化，生物基質(zhì)稀釋液以及合并用藥后選擇性研究等情況下的方法學(xué)驗(yàn)證。這與美國(guó)FDA指導(dǎo)原則中的定義相同。
　　
　　2001美國(guó)FDA指導(dǎo)原則也定義交叉驗(yàn)證為“當(dāng)兩種或更多的生物分析方法被用于同一個(gè)或不同的研究中時(shí)，驗(yàn)證參數(shù)的比較”。2007白皮書中補(bǔ)充更換抗凝劑及種屬時(shí)也可以用部分驗(yàn)證。
　　
　　EMA指導(dǎo)原則明確指出，“當(dāng)數(shù)據(jù)來自不同的研究地點(diǎn)時(shí)，需要比較這些數(shù)據(jù)，而且應(yīng)對(duì)所采用的方法學(xué)進(jìn)行交叉驗(yàn)證。”此外，它建議了進(jìn)行交叉驗(yàn)證具體的方法，即同一套質(zhì)控樣品用兩種分析方法分析，而且兩種分析方法之間的差異不應(yīng)超過15%。