circRNA研究,現(xiàn)在發(fā)表文章還是相對比較容易的。就目前來說,只要發(fā)現(xiàn)了一個和某一個特定生物學現(xiàn)象相關的circRNA,并對其做一些基本的鑒定工作,就能發(fā)表3分左右的文章了。但是,作為科研工作者來說,大家肯定還想再往上走一步。那么,我們能通過哪些更加深入和細致的工作,為自己的circRNA研究添磚加瓦呢? 起飛 根據(jù)現(xiàn)有的circRNA研究現(xiàn)狀,做的工作可以有以下幾個部分: a). circRNA的定位 類似于lncRNA,circRNA的定位與其功能行使有著非常密切的關系。因此,需要通過FISH等實驗手段來看下circRNA是主要定位與細胞核,還是細胞質(zhì)的。定位的結果會后面從轉錄調(diào)控還是轉錄后調(diào)控研究circRNA的功能有一定的指導意義。 Nat Commun. 2016 Apr 6;7:11215. b).circRNA成環(huán)研究 circRNA的成環(huán)過程是一個非常復雜的調(diào)控過程,特別是外顯子來源的circRNA,很多情況下是需要側翼ALU原件的重復序列 。因此,可以通過實驗來驗證circRNA的成環(huán)。通過截取側翼序列和保留構建,看哪種情況下能形成成熟環(huán)狀結構。而這樣的成環(huán)實驗,一方面對circRNA是怎么來的有了了解,另一方面也對circRNA的過表達實驗順利開展提供了條件。 Nat Commun. 2016 Apr 6;7:11215. c). circRNA編碼潛能分析。 現(xiàn)在從circRNA的編碼多肽入手研究circRNA的生物學功能也是比較好的方向,發(fā)表的文章檔次也都很高。因此,如果在文章對circRNA的特性分析中加上對其編碼能力的預測,可以豐富研究內(nèi)容。CircRNA具有編碼潛能需要符合幾個條件:(1)局有開放閱讀框(ORF);(2)包含核糖體進入位點(IRES)序列,且具有活性,能引到5’帽子非依賴性翻譯能力;(3)通過載體構建能檢測到編碼的蛋白;(4)能用質(zhì)譜技術檢測到體內(nèi)翻譯出來的蛋白。當然,能從上面幾個過程入手,找到陽性結果,那就是很好的circRNA翻譯蛋白研究了。如果沒有陽性結果,那也是能證明該circRNA為非編碼RNA,也是可以作為非編碼證據(jù)。 JNCI J Natl Cancer Inst (2018) 110(3): djx166 d). circRNA與其他研究熱點間的關聯(lián) circRNA的研究相對來說還是一個新的領域,因此,在circRNA的研究過程中,如果把其他的特點能聯(lián)系起來,對整體的研究提升還都是非常有幫助的。目前可以結合的熱點研究,可以有以下幾種: (1)circRNA與外泌體結合。外泌體是細胞分泌囊泡結構,可通過運送母細胞中的RNAs調(diào)控受體細胞的生物學功能。因此,可以分析和研究外泌體在不同條件下內(nèi)部circRNA的表達變化,以及這種變化對受體細胞的影響,這里可以借用lncRNA研究用到的共培養(yǎng)等實驗進行驗證。 Cancer Cell. 2016 May 9;29(5):653-68. (2)circRNA與單細胞研究結合。單細胞轉錄組學研究是基于單細胞測序的發(fā)展和運用。通過單細胞研究,可以對特性細胞的特性生物學過程有更加清晰的認識。如果能在單細胞的角度去發(fā)現(xiàn)circRNA在不同細胞中的特性,如神經(jīng)細胞中,胚胎發(fā)育過程中,特定腫瘤細胞中的功能,無論對于circRNA的功能理解,還是對特定的疾病發(fā)生或者是特定腫瘤藥物開發(fā)等都有幫助。 降落 以上的研究內(nèi)容,應該來說是circRNA研究所需要,但又是非常重要的研究方向。如果大家已經(jīng)有了基本的circRNA研究結果,可以看看上面的內(nèi)容中有哪些可以再去嘗試一下,說不定,你再通過幾個非常有效的實驗,就能使自己的研究成果提升一個檔次。 【溫馨提示】本文為微信號:基因芯片知識屋(bio-microarry)原創(chuàng)文章,如需轉載請注明來源:基因芯片知識屋。 |
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