張俊海，崔紹杰，顧建文，解放軍306醫(yī)院，神經(jīng)外科，整理

目前，國(guó)內(nèi)外學(xué)者采用循證醫(yī)學(xué)方法將200 多種腦保護(hù)藥物用于治療急性顱腦創(chuàng)傷病人，未能發(fā)現(xiàn)任何一種藥物對(duì)顱腦損傷病人具有肯定的療效.因此中藥Traditional Chinese medicine對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)保護(hù)作用的研究越來(lái)越受到重視，尋找新型有效藥物是目前研究的熱點(diǎn).除了顱腦急性創(chuàng)傷外，缺血性腦血管病嚴(yán)重影響人類生活質(zhì)量.而對(duì)于缺血引起的腦組織損傷尚無(wú)有效治療藥物.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究認(rèn)為腦缺血再灌注損傷是缺血腦組織在恢復(fù)血液灌注后，出現(xiàn)的比灌注前更明顯更嚴(yán)重的損傷和功能障礙，是大多數(shù)缺血性腦血管疾病的主要病理生理過(guò)程.研究表明，腦缺血再灌注損傷的中心區(qū)以壞死為主，缺血邊緣區(qū)以凋亡為主.因此，臨床治療的重點(diǎn)是早期干預(yù)、阻止、中斷其凋亡程序，防止向壞死發(fā)展，誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞分化增殖以修復(fù)、重塑受損神經(jīng)細(xì)胞Brain cells.中藥的腦保護(hù)Protective effect作用也主要體現(xiàn)在以下幾方面.

1 對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化的作用

神經(jīng)干細(xì)胞是一類特殊細(xì)胞，具有多種分化潛能的具有終身自我更新能力的細(xì)胞.研究表明，神經(jīng)干細(xì)胞不僅存在于胚胎腦內(nèi)，還存在于成年腦內(nèi).鑒于此，神經(jīng)干細(xì)胞為神經(jīng)元損傷的修復(fù)及再生提供了機(jī)會(huì)，通過(guò)神經(jīng)干細(xì)胞移植，臨床治療退行性病變，缺血缺氧性腦病后遺癥，腦損傷后的修復(fù)重建.采用免疫組化方法研究由人參、茯苓、遠(yuǎn)志、石菖蒲的標(biāo)準(zhǔn)提取物顆粒組成的定志小丸檢測(cè)齒狀回神經(jīng)干細(xì)胞增殖情況.研究表明，該藥不僅能維持齒狀回的神經(jīng)細(xì)胞的正常增殖，還能夠明顯促進(jìn)其增殖，提高了自我修復(fù)的能力.中藥龜板對(duì)局灶性腦缺血后的神經(jīng)干細(xì)胞的影響表明，龜板能促使Nestin表達(dá)增強(qiáng)，由此可以得出成年哺乳動(dòng)物腦內(nèi)的神經(jīng)干細(xì)胞可能參與損傷的神經(jīng)元的再生及修復(fù).與其促進(jìn)成年神經(jīng)干細(xì)胞強(qiáng)的增殖作用有關(guān).通過(guò)對(duì)黃芩、梔子的提取物黃芩苷、梔子苷對(duì)體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞的研究表明可誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞特異性分化，使其分化成非成熟神經(jīng)元.蔡光先等通過(guò)含有補(bǔ)陽(yáng)還五湯的含藥血清對(duì)體外低糖低氧損傷后的海馬神經(jīng)干細(xì)胞的研究發(fā)現(xiàn)，大部分神經(jīng)球增大，同時(shí)部分神經(jīng)球伴有貼壁，并有突起生長(zhǎng)，表明當(dāng)腦組織損傷微環(huán)境改變時(shí)，神經(jīng)干細(xì)胞被激活并開(kāi)始增殖.并且發(fā)現(xiàn)補(bǔ)陽(yáng)還五湯還能維持神經(jīng)干細(xì)胞增殖的高峰時(shí)間.從而提出補(bǔ)陽(yáng)還五湯能提高神經(jīng)干細(xì)胞的分化的結(jié)論.通過(guò)對(duì)銀杏葉提取物的黃酮糖類和烯內(nèi)酯類的研究，發(fā)現(xiàn)后者的銀杏內(nèi)酯B 可促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化.并證實(shí)與其濃度關(guān)系不大.銀杏內(nèi)酯B 不能促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞分化為少突膠質(zhì)樣細(xì)胞，但有能促進(jìn)其分化化為星形膠質(zhì)樣細(xì)胞的作用.對(duì)銀杏內(nèi)酯B 進(jìn)行了同樣的研究.用不同濃度的銀杏內(nèi)酯B 培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞3d 和7d.結(jié)果發(fā)現(xiàn)，能使分化的細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)更成熟，對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞分化更為明顯，且其百分率與藥物呈劑量依賴關(guān)系.對(duì)少突膠質(zhì)細(xì)胞的百分率無(wú)影響.高唱研究左歸丸在神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)及免疫熒光雙標(biāo)組化染色后發(fā)現(xiàn)，陽(yáng)性細(xì)胞百分率明顯高于對(duì)照組.表明左歸丸能促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖及分化.王晗等研究中藥益智提取物原兒茶酸能夠促進(jìn)脂肪干細(xì)胞的增殖.經(jīng)過(guò)原兒茶酸處理的細(xì)胞與對(duì)照組具有明顯的的劑量依賴性和時(shí)間依賴性.

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，人的脂肪干細(xì)胞能夠在體外一定條件下分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞.在促進(jìn)人脂肪干細(xì)胞增殖的同時(shí)，保持間充質(zhì)干細(xì)胞多分化潛能的特性.楊萍等對(duì)中藥制劑肌萎靈注射液不同濃度的神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)與對(duì)照組比較，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，1%的肌萎靈組NF-200 陽(yáng)性細(xì)胞最多，誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞主要向神經(jīng)元方向分化.劉建軍等研究單味中藥黃芪、紅花、丹參3 種注射液分別對(duì)培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞進(jìn)行研究.黃芪組的神經(jīng)干細(xì)胞貼壁分化快，免疫組化顯示，分化后的細(xì)胞主要是NF200 陽(yáng)性細(xì)胞及GFAP 陽(yáng)性細(xì)胞.流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，NF 陽(yáng)性細(xì)胞比例上升，GFAP 陽(yáng)性比例下降.由此可知，黃芪有利于神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化.丹參組用不同濃度的丹參注射液，發(fā)現(xiàn)神經(jīng)干細(xì)胞有不同程度的死亡，且與丹參濃度正相關(guān).紅花組作用于神經(jīng)干細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)不同濃度的紅花注射液對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞的分化作用不明顯.石田寅夫等用人參皂甙Rg1 和黃芪皂甙ASIV 的不同劑量對(duì)胚胎神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)二者有明顯的促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖作用.高中低劑量均能明顯增加神經(jīng)球的數(shù)量，兩者均以低劑量作用顯著.李紅梅等采用中藥血清藥理方法和體外神經(jīng)細(xì)胞PC12 的培養(yǎng)研究補(bǔ)腎益智方對(duì)不同年齡段大鼠腦髓的作用及影響.選用健康的15 月Wistar 大鼠作衰老動(dòng)物模型，選健康的3 月Wistar 大鼠作青年對(duì)照組.結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型動(dòng)物在低濃度時(shí)促突起生長(zhǎng)低，高濃度時(shí)突起數(shù)目多而細(xì)胞生長(zhǎng)能力下降.青年組低濃度時(shí)促突起生長(zhǎng)高，高濃度時(shí)突起數(shù)目多而細(xì)胞生長(zhǎng)能力上升.從而得出模型組經(jīng)藥物作用后，不僅增值率提高而且突起數(shù)目也較青年組多，說(shuō)明了補(bǔ)腎益智方可能促進(jìn)神經(jīng)元的生長(zhǎng).秦亞靜等探討中藥紅景天對(duì)抑郁大鼠大腦海馬神經(jīng)細(xì)胞增殖分化及神經(jīng)元數(shù)量的影響.首先給大鼠分組建立抑郁癥模型，采用免疫熒光組化雙標(biāo)記染色檢測(cè)海馬神經(jīng)干細(xì)胞增殖及分化，用形態(tài)計(jì)量學(xué)法計(jì)數(shù)海馬神經(jīng)元.結(jié)果發(fā)現(xiàn)，紅景天能使大鼠海馬齒狀回Brdu 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量增加，Brdu 和β-tubulinIII 雙標(biāo)記細(xì)胞數(shù)量增加，二者的百分比均增加并達(dá)到正常組大鼠水平.該研究推測(cè)，紅景天的有效成分之一紅景天苷可能起到促進(jìn)海馬神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化作用，從而證明紅景天具有神經(jīng)保護(hù)作用.

2 抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡的作用

細(xì)胞凋亡又稱程序性細(xì)胞死亡，是一種受基因調(diào)控的自主性、程序性細(xì)胞死亡過(guò)程.腦缺血再灌注損傷細(xì)胞的主要死亡方式為凋亡.細(xì)胞DNA 早期降解為其特征.細(xì)胞凋亡需要啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)特殊基因轉(zhuǎn)錄及表達(dá).這些基因產(chǎn)物主要有Bcl-2 蛋白、Caspase、IGF、P53 家族等.孫向紅等采用血清藥理學(xué)方法，對(duì)中藥復(fù)方海康靈進(jìn)行研究.用神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，用含藥血清培養(yǎng)H2O2損傷的神經(jīng)細(xì)胞.證明海康靈有明顯抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡的作用.牛英才等采用大鼠海馬立體定向注射技術(shù)誘導(dǎo)阿爾茨海默病動(dòng)物模型，觀察加減地黃引子提取物對(duì)模型腦組織的海馬錐體細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響及對(duì)模型動(dòng)物腦組織Caspase-3 蛋白表達(dá)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，加減地黃飲子組胞質(zhì)內(nèi)脂褐素和尼氏體較多，突觸小泡數(shù)量大量增多，損傷的錐體細(xì)胞有不同程度的恢復(fù).而加減地黃飲子組海馬勻漿的Caspase-3 表達(dá)相對(duì)值較對(duì)照組降低.表明加減地黃引子能明顯抑制Aβ誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，減少了神經(jīng)元的丟失.徐遠(yuǎn)坤等采用大鼠自體第7 頸椎棘突椎間移植法造大鼠脊髓壓迫模型.用中藥健身丹灌胃給藥，TUNEL 法檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞凋亡率.實(shí)驗(yàn)表明，灌藥組在第7d、14d 細(xì)胞凋亡數(shù)顯著減少，細(xì)胞凋亡率維持較低水平.肖嵐等研究腦溢安,用體外培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞，造缺氧損傷模型，并用原位末端標(biāo)記方法行細(xì)胞凋亡檢測(cè).用免疫共沉淀等技術(shù)研究缺氧損傷下神經(jīng)干細(xì)胞內(nèi)P38 MAPK 活性.從而表明腦溢安具有抑制缺氧狀態(tài)神經(jīng)干細(xì)胞的凋亡，提高神經(jīng)干細(xì)胞存活等保護(hù)作用.陳小睿等通過(guò)線栓法復(fù)制大鼠腦缺血再灌注模型，運(yùn)用免疫組化法研究通脈醒腦滴丸對(duì)腦缺血卒中的作用.測(cè)定促凋亡基因Bax、Caspase-3、Cytc 表達(dá)，結(jié)果通脈醒腦滴丸能下調(diào)凋亡基因的表達(dá).證實(shí)對(duì)腦缺血損傷具有保護(hù)作用.鐘森等通過(guò)復(fù)制大鼠缺血再灌注模型，應(yīng)用免疫組化方法觀察三七總皂苷（PNS）對(duì)Bcl-2、Nestin、BDNF、EGF 蛋白的表達(dá).結(jié)果表明，三七總皂苷上調(diào)Bcl-2 的表達(dá)，從而減少腦細(xì)胞凋亡.同時(shí)增強(qiáng)Nestin、BDNF、FGF 的表達(dá)促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖而達(dá)到抗缺血再灌注作用.薛茜等采用栓線法復(fù)制大鼠缺血再灌注模型，運(yùn)用TUNEL 法及免疫組化法觀察由黃芪、三七等8 味中藥煎制的康腦液1 號(hào)對(duì)缺血半暗帶凋亡陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目及Bcl-2/Bax 比值的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，康腦液1 號(hào)能減少半暗帶區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)目，上調(diào)Bcl-2/Bax 比值，從而促進(jìn)腦損傷修復(fù).王少綱通過(guò)大鼠缺血再灌注模型，采用免疫組化法探討疏血通對(duì)腦細(xì)胞Caspase-3 蛋白表達(dá)的影響，結(jié)果表明，疏血通能抑制Caspase-3 蛋白表達(dá)，從而具有腦保護(hù)作用.

3對(duì)腦缺血再灌注的保護(hù)作用

腦缺血又稱腦梗死，是一種由于腦血流供應(yīng)障礙而致的局限性腦缺血壞死、腦軟化.腦缺血再灌注損傷是其重要環(huán)節(jié)，其發(fā)生機(jī)制尚未完全闡明.因此圍繞著這方面的研究是目前的熱點(diǎn).趙紅念等通過(guò)線栓法制備大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞的局灶性腦缺血模型，采用三七三醇皂苷術(shù)前6d 腹腔注射，并設(shè)生理鹽水對(duì)照組及假手術(shù)組.用免疫組化方法行腦細(xì)胞染色及圖像分析，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理.用藥組與對(duì)照組比較有顯著性差異，說(shuō)明三七三醇皂苷能促進(jìn)Nestin 表達(dá).表明三七三醇皂苷能促進(jìn)新生血管形成，腦缺血損傷后的神經(jīng)修復(fù)與血管再生同步進(jìn)行.

崔榮太等采用同樣的方法制作局灶性腦缺血模型，免疫組織化學(xué)染色.研究表明，人參皂甙Rg1 能增強(qiáng)腦缺血后Nestin 的表達(dá)，促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖.并進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性細(xì)胞中可能有兩類神經(jīng)干細(xì)胞，一類是能分化為神經(jīng)元的以取代損傷神經(jīng)元的細(xì)胞，另一類是能減少 缺血區(qū)的擴(kuò)大的反應(yīng)性膠質(zhì)細(xì)胞，能修復(fù)神經(jīng)元的細(xì)胞.從而驗(yàn)證該藥具有神經(jīng)保護(hù)作用.祝慧鳳等研究中藥地黃的活性成分梓醇對(duì)局灶性腦缺血的神經(jīng)功能的影響，用免疫熒光組織化學(xué)染色法和Westemblot 檢測(cè)腦缺血區(qū)GAP—43 蛋白的表達(dá)，并根據(jù)神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分及肌力評(píng)定.結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該中藥能促進(jìn)腦缺血大鼠的神經(jīng)功能恢復(fù)，并能促進(jìn)癱瘓大鼠肢體肌力恢復(fù).免疫熒光組化檢測(cè)比較，梓醇各劑量組的GAP—43 陽(yáng)性細(xì)胞增加最明顯.表明梓醇對(duì)大腦缺血后軸突再生有促進(jìn)作用.祁存芳等用川芎嗪對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷模型進(jìn)行研究，行BrdU 免疫組化染色，結(jié)果腦缺血再灌注損傷后海馬齒狀回陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目增加，且明顯高于對(duì)照組，表明川芎嗪能促進(jìn)海馬齒狀回神經(jīng)細(xì)胞的增殖，對(duì)缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用.王立新等通過(guò)復(fù)制腦缺血再灌注損傷模型，研究中藥通心絡(luò)對(duì)腦缺血后神經(jīng)巢蛋白的影響及血管內(nèi)皮因子的影響.分別采用熒光免疫組織化學(xué)法、RT—PCR 法研究大鼠大腦缺血區(qū)室管膜及室管膜下區(qū)及海馬齒狀回的神經(jīng)巢蛋白的數(shù)值變化.應(yīng)用Nestin 免疫熒光染色方法測(cè)缺血區(qū)的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目及568 內(nèi) 蒙 古 民 族 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 2010年陽(yáng)性細(xì)胞熒光強(qiáng)度值.用RT— PCR 法檢測(cè)缺血區(qū)VEGFmRNA 的含量.研究發(fā)現(xiàn)通心絡(luò)治療組與模型組比較，通心絡(luò)能增加神經(jīng)干細(xì)胞的表達(dá)，并且通過(guò)促進(jìn)缺血區(qū)腦組織VEGFmRNA的表達(dá)，誘導(dǎo)內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的增殖，從而促進(jìn)神經(jīng)的修復(fù).王立新等進(jìn)一步研究了通心絡(luò)對(duì)腦缺血再灌注損傷后胰島素樣生長(zhǎng)因子-1與神經(jīng)巢蛋白的表達(dá)關(guān)系.方法同上，采用RT—PCR法測(cè)缺血區(qū)腦組織內(nèi)IGF-1mRNA.與劑量關(guān)系無(wú)顯著差異，推斷通心絡(luò)可能通過(guò)促進(jìn)缺血區(qū)IGF-1mRNA的表達(dá)，誘導(dǎo)內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的存活及增殖.陳勇等通過(guò)復(fù)制大鼠缺血再灌注模型，觀察自由基指標(biāo)、NO 改變、腦組織損傷程度及微循環(huán)超微結(jié)構(gòu)情況.以研究羌菖注射液對(duì)脂質(zhì)過(guò)氧化損傷的保護(hù)作用.結(jié)果發(fā)現(xiàn)，治療組的過(guò)氧化脂質(zhì)(LPO)明顯低于模型組，超氧化物歧化酶（SOD）明顯高于模型組，表明羌活、石菖蒲具有清除超氧化物自由基、減輕脂質(zhì)過(guò)氧化損傷，從而保護(hù)缺血再灌注腦細(xì)胞損傷的作用.

綜上所述，近年來(lái)關(guān)于中藥對(duì)神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用的研究取得了可喜的成績(jī)，為中醫(yī)藥防治腦病奠定了一定的理論基礎(chǔ).但目前研究多是處于實(shí)驗(yàn)階段，需要進(jìn)一步深入到臨床治療中.中藥具有副作用少，易于取材、價(jià)格低廉、歷史悠久等特點(diǎn)，是具有開(kāi)發(fā)潛力的治療腦細(xì)胞損傷的藥物.因此，多機(jī)制、多藥物聯(lián)合應(yīng)用的綜合性研究有待于進(jìn)一步開(kāi)展.同時(shí)也為提高中藥治療腦損傷的臨床療效提供科學(xué)依據(jù).