【原】科研菜鳥如何搞定PCR引物

解螺旋 2020-08-27

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作者：解螺旋.靜靜（本文為解螺旋征稿）

如需轉(zhuǎn)載請注明來源：解螺旋·醫(yī)生科研助手

導(dǎo)語

PCR是生物科學(xué)中常見的實(shí)驗(yàn)方法，而那些網(wǎng)上的教程對于初學(xué)者來說還是過于復(fù)雜了，這次解螺旋吐血介紹種炒雞簡單的方法來做PCR。

菜鳥科研汪一枚，最近剛拿到標(biāo)書。。。額-_-||，居然要設(shè)計(jì)pcr引物，這么高端的工作，還是交給我親愛的師兄吧，哈哈哈！?。?br style="box-sizing: border-box;">

"偷什么懶，網(wǎng)上這么多方法，自己不會學(xué)呀?。?！"，額-_-||，說好的親師兄呢？?。?！

好吧，那就讓我自立自強(qiáng)吧。

額-_-||，這些個(gè)方法也忒復(fù)雜了吧，動不動就下軟件，搜基因，查找對應(yīng)的mRNA，復(fù)制目標(biāo)序列，再下軟件，pick primers，再逐條blast。。。醉醉噠。。。醉醉噠。。。關(guān)鍵是大前提還必須要學(xué)會個(gè)什么黃金法則?。?！

你妹兒?。?！我要弄這么多條引物，還要不要人活了呀?。。‰娨晞〔挥每戳搜?，淘寶不用逛了呀，戀愛不用談了呀。。。我想靜靜。。。（好吧，其實(shí)我就叫靜靜，昂~，好害羞?。?br style="box-sizing: border-box;">

好吧，差不多得了。。。寫這里重點(diǎn)也應(yīng)該來了，用腳趾頭想都知道，如我一般懶的同學(xué)當(dāng)然不會就此罷休咯，一番痛苦掙扎以后，靜靜發(fā)現(xiàn)了一個(gè)超級簡單的方法喲。。。

！以下圖片請點(diǎn)擊查看清晰大圖！

首先呢，進(jìn)入pubmed （http://www.ncbi.nlm./pubmed/）在gene欄搜索指定基因（例如：erk2）；

在下一個(gè)界面找到其mesh詞：MAPK1及其ID：5594；

然后在瀏覽器中打開另一個(gè)網(wǎng)頁primerbank （https://pga.mgh./primerbank/），選擇NCBI Gene ID,在For text中輸入該基因ID：5594，點(diǎn)擊submit;

接下來就是見證奇跡的時(shí)刻。。。沒錯(cuò)，就是這么簡單粗暴，下面三條序列任你挑。。。

哈哈哈，你不會真的以為就這么結(jié)束了吧？居然還有比我更懶的人-_-||，你真的敢用？

哎喲，親愛的，序列是有了啦，但是我們還要檢驗(yàn)一下是不是真的靠譜好么。

所以下一步呢，我們就是打開這個(gè)網(wǎng)頁https://www.ncbi.nlm./tools/primer-blast/index.cgi?LINK_LOC=BlastHome，在圖示對話框中輸入上圖得到的三條引物中的任意一條的前引和后引(例如：第一條序列TACACCAACCTCTCGTACATCG 和 CATGTCTGAAGCGCAGTAAGATT)，然后點(diǎn)擊頁面底部的get primer圖標(biāo);