細(xì)胞凍存是保存細(xì)胞的重要方法。細(xì)胞凍存將細(xì)胞置于-196℃的液氮中或-80冰箱中低溫保存，可以使細(xì)胞脫離生長(zhǎng)狀態(tài)，保留細(xì)胞特性，因此可以在需要的時(shí)候復(fù)蘇細(xì)胞繼續(xù)用于實(shí)驗(yàn)。

細(xì)胞凍存的原理是向細(xì)胞中加入保護(hù)劑，最常見是終濃度5%-15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，從而使溶液的冰點(diǎn)降低，然后在緩慢降溫（細(xì)胞凍存和細(xì)胞復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融）的條件下，使細(xì)胞內(nèi)的水分析出，減少了冰晶的形成，從而避免細(xì)胞損傷。 

目前，實(shí)驗(yàn)室常用的細(xì)胞凍存液主要有以下幾種：

（1）20%血清（FBS）、10%DMSO、70%培養(yǎng)基。

（2）90%血清（FBS）、10%DMSO

由于DMSO的毒性，因此在復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)需要離心去除上清中的DMSO，然后重懸細(xì)胞。

（3）商品化的無血清細(xì)胞凍存液

無血清的細(xì)胞凍存液的配方比較復(fù)雜，可能有以下幾種：

• 主要是人血清白蛋白，添加10%的DMSO、13.3%的復(fù)方電解質(zhì)注射液和16.70%的右旋糖苷

• 主要含有DMSO、葡萄糖等各種細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)成分的細(xì)胞凍存液，不含血清等動(dòng)物來源的成分，該無血清細(xì)胞凍存液能夠提高細(xì)胞存活率和活力，特別適合于無血清培養(yǎng)的細(xì)胞。另外，該無血清細(xì)胞凍存液可以減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染。

• 主要含有DMSO和氨基酸的細(xì)胞凍存液，能夠提高細(xì)胞凍存活率和復(fù)蘇活力。該無血清細(xì)胞凍存液不含動(dòng)物來源蛋白，同樣可以減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染，確保凍存細(xì)胞的安全。

（4）羧化 ε-聚-?-賴氨酸 （COOH-PLL） 組成的多兩性電解質(zhì)細(xì)胞凍存液

1949 年，Polge 等人在冷凍保存領(lǐng)域取得了第一次突破，當(dāng)時(shí)他們報(bào)道了甘油的添加使家禽精子能夠被冷凍保存。隨后發(fā)現(xiàn)二甲基亞砜 （DMSO） 可以有效地冷凍保存紅細(xì)胞，這引起了全世界冷凍生物學(xué)家的注意，并成為最受歡迎的冷凍保護(hù)劑 （CPA），主要是因?yàn)樗軌虼┩讣?xì)胞。盡管最終發(fā)現(xiàn)甘油僅表現(xiàn)出較弱的冷凍保護(hù)特性，并且 DMSO 對(duì)細(xì)胞具有細(xì)胞毒性，但由于缺乏有效的替代品，這些 CPA 不可避免地被使用;因此，開發(fā)更高效的 CPA 至關(guān)重要。考慮到上述討論，有學(xué)者之前開發(fā)了一種由羧化 ε-聚-?-賴氨酸 （COOH-PLL） 組成的多兩性電解質(zhì)，并發(fā)現(xiàn)它表現(xiàn)出顯著的冷凍保護(hù)特性。這種膜非穿透性聚合物試劑為多種細(xì)胞類型（包括人間充質(zhì)干細(xì)胞和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞）提供了極好的活力特征。還發(fā)現(xiàn)合成多兩性電解質(zhì)對(duì)冷凍保存細(xì)胞非常有效。