上回我們綜述了CAR-T治療的原理，對(duì)比了CAR-αβT和CAR-γδT治療的優(yōu)勢(shì)和局限性，以及在臨床試驗(yàn)中的研究進(jìn)展，其中提到了CRS（細(xì)胞因子釋放綜合征）和免疫抑制性腫瘤微環(huán)境等原因限制了CAR-T療法的有效性和安全性（具體請(qǐng)閱讀：CAR-T的T需要passion）。為了解決這些問(wèn)題，研究人員已經(jīng)研究出了CAR-NK、CAR-NKT、CAR-M等CAR-免疫治療，這些療法使用的都是先天性免疫細(xì)胞，安裝上CAR后，可以通過(guò)抗原依賴性和抗原非依賴性途徑殺傷腫瘤細(xì)胞，為提高免疫治療療效和減輕毒副作用帶來(lái)了希望。

添加微信

精彩推送不錯(cuò)過(guò)

NK細(xì)胞是先天免疫系統(tǒng)中的一種淋巴細(xì)胞，具有產(chǎn)生大量的炎性細(xì)胞因子和快速而強(qiáng)大的細(xì)胞毒作用，可以在沒(méi)有事先致敏的情況下靶向和殺死癌細(xì)胞（即為先天免疫）。

NK細(xì)胞識(shí)別癌細(xì)胞的機(jī)制：“缺失自我”、“誘導(dǎo)自我”和抗體依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)。

①腫瘤細(xì)胞表面的MHC-I經(jīng)常缺乏或低表達(dá)，可觸發(fā)NK誘導(dǎo)的殺傷，稱為“缺失自我”識(shí)別。

②NK細(xì)胞可以識(shí)別應(yīng)激細(xì)胞表面上調(diào)的配體，稱為“誘導(dǎo)自我”識(shí)別。

③抗體依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)：NK細(xì)胞可以通過(guò)CD16 (FCγRIII)介導(dǎo)IgG調(diào)理的細(xì)胞毒作用，F(xiàn)CγRIII與IgG抗體的FC部分結(jié)合并誘導(dǎo)細(xì)胞毒性。

NK細(xì)胞殺傷癌細(xì)胞的機(jī)制：首先通過(guò)形成溶解性免疫突觸來(lái)消滅靶細(xì)胞，并分泌含有顆粒酶B和穿孔素的細(xì)胞溶解顆粒，導(dǎo)致靶細(xì)胞凋亡；然后通過(guò)死亡受體，如Fas配體和TNF相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（TRAIL），誘導(dǎo)靶細(xì)胞死亡。此外，NK細(xì)胞可以產(chǎn)生多種促炎細(xì)胞因子，包括IFN-γ和TNF-α，以限制靶細(xì)胞的生長(zhǎng)并協(xié)調(diào)其他先天和適應(yīng)性免疫細(xì)胞的功能。

T細(xì)胞的CAR結(jié)構(gòu)可以用于NK細(xì)胞（圖1）。

①第一代：具有單個(gè) CD3ζ 信號(hào)結(jié)構(gòu)域，通常需要額外的共刺激信號(hào)才能獲得強(qiáng)大的細(xì)胞毒性反應(yīng)。

②第二代：CAR 通過(guò)將單個(gè)共刺激結(jié)構(gòu)域（如 CD28、CD137 （4-1BB） 或 CD134 （OX40））與 CD3ζ 聯(lián)合來(lái)解決這個(gè)問(wèn)題。

③第三代：CAR通過(guò)結(jié)合兩個(gè)與CD3ζ融合的共刺激結(jié)構(gòu)域進(jìn)一步增強(qiáng)了活化和持久性。

④第四代：利用合成生物學(xué)來(lái)增強(qiáng)功能和安全性，這些包括整合用于自分泌激活的細(xì)胞因子基因和誘導(dǎo)型半胱天冬酶9系統(tǒng)作為管理效應(yīng)細(xì)胞毒性的安全開關(guān)。

目前為了提高CAR-NK抗腫瘤的潛力，CAR-NK結(jié)構(gòu)仍然在不斷進(jìn)行優(yōu)化，比如將一種靶向NK細(xì)胞特異性抑制受體的抑制性CAR(iCAR)引入NK細(xì)胞，防止NK細(xì)胞相互攻擊，以提高CAR-NK細(xì)胞的活性和壽命。

圖1.CAR-NK細(xì)胞的構(gòu)建

CAR-NK細(xì)胞相對(duì)于CAR-T細(xì)胞的潛在優(yōu)勢(shì)包括：

①與T細(xì)胞不同，NK細(xì)胞與降低GVHD 風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)，因?yàn)镹K細(xì)胞以HLA不受限制的方式發(fā)揮作用，即不需要供體和受體之間的完美匹配。這使得NK細(xì)胞成為同種異體細(xì)胞治療的選擇。

②NK細(xì)胞產(chǎn)生的促炎細(xì)胞因子水平低于T細(xì)胞，這降低了嚴(yán)重CRS的風(fēng)險(xiǎn)，CRS是一種全身性疾病，在最嚴(yán)重的病例中表現(xiàn)為全身癥狀、發(fā)熱、低血壓和器官功能障礙，它由細(xì)胞因子的大量釋放引發(fā)，IL-1 和 IL-6、CAR-T 細(xì)胞和TME在癌細(xì)胞識(shí)別后起著關(guān)鍵的致病作用。

③NK細(xì)胞具有抗原依賴性和抗原非依賴性方式（天然的細(xì)胞毒作用）識(shí)別和消除癌細(xì)胞。

④NK細(xì)胞識(shí)別并殺死具有下調(diào)MHC I類分子的細(xì)胞，這是癌細(xì)胞逃避T細(xì)胞檢測(cè)的常見機(jī)制。

⑤CAR-NK細(xì)胞在早期臨床試驗(yàn)中證明了安全性和潛在療效，有望用于治療實(shí)體瘤，包括胃腸道癌。

圖2.CAR-NK的優(yōu)勢(shì)和局限性

CAR-NK細(xì)胞的首次大規(guī)模試驗(yàn)結(jié)果表明，它們?cè)贑D19+慢性淋巴細(xì)胞白血病和B細(xì)胞淋巴瘤患者中的安全性和強(qiáng)大的臨床活性（NCT03056339）。如前所述，CAR-NK細(xì)胞作為癌癥免疫治療方案比CAR-T細(xì)胞具有多項(xiàng)優(yōu)勢(shì)。然而，CAR-NK細(xì)胞療法也面臨挑戰(zhàn)，例如靶抗原丟失、腫瘤異質(zhì)性、腫瘤免疫抑制微環(huán)境和CAR-NK細(xì)胞的持久性。因此，能最大限度地提高CAR-NK細(xì)胞療法療效的策略至關(guān)重要。

①CAR-NK細(xì)胞的靶抗原：CAR-NK細(xì)胞具有通過(guò)CAR依賴性途徑和天然機(jī)制（ADCC）對(duì)癌細(xì)胞發(fā)揮細(xì)胞毒作用的獨(dú)特能力，因此可以改變CAR的設(shè)計(jì)，利用NK細(xì)胞的天然細(xì)胞毒性途徑，從而降低對(duì)可能表達(dá)靶抗原的正常細(xì)胞造成損傷的風(fēng)險(xiǎn)。例如，可以設(shè)計(jì)缺乏共刺激結(jié)構(gòu)域的CAR，使CAR-NK細(xì)胞主要利用其先天性細(xì)胞毒性能力，同時(shí)最大限度地減少CAR誘導(dǎo)的直接細(xì)胞毒性。此外，NK細(xì)胞可以被修飾為攜帶非激活的CAR，該CAR不會(huì)直接觸發(fā)細(xì)胞毒性，而是增強(qiáng)NK細(xì)胞的靶向、粘附和向癌細(xì)胞的遷移。這種方法能夠靶向更廣泛的抗原，包括HER2、EGFR和間皮素。

②腫瘤異質(zhì)性：理想的靶標(biāo)應(yīng)在癌細(xì)胞上高表達(dá)，在正常組織中表達(dá)最少或沒(méi)有表達(dá)。這種特異性對(duì)于降低脫靶效應(yīng)和相關(guān)毒性的風(fēng)險(xiǎn)至關(guān)重要。所以可以鑒定一組最優(yōu)的靶標(biāo)，也可以開發(fā)多靶點(diǎn)CAR-NK細(xì)胞。

③腫瘤免疫抑制微環(huán)境：TME包含各種免疫抑制因子，包括缺氧、TGF-β、PGE-2以及阻礙免疫細(xì)胞活性的細(xì)胞外代謝物（如乳酸和腺苷），這些顯著阻礙了免疫細(xì)胞對(duì)腫瘤的破壞。因此，可以修飾NK細(xì)胞以抵抗這些抑制因子，例如，降低NK細(xì)胞上TGF-β受體II的表達(dá)已被證明可以部分抵消TME的負(fù)面影響，而不會(huì)影響抗白血病療效。

④CAR-NK細(xì)胞的持久性：CAR-NK細(xì)胞壽命較短，往往僅持續(xù)1-2周，在沒(méi)有細(xì)胞因子支持的情況下，它們的療效受到了極大的限制，而外源性細(xì)胞因子可能會(huì)引發(fā)副作用并激活其他免疫細(xì)胞，例如調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，從而損害NK細(xì)胞的功能。應(yīng)用基因工程技術(shù)，使NK細(xì)胞不僅攜帶CAR，還攜帶細(xì)胞因子、抗體和蛋白酶等激活劑，以促進(jìn)其生長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)和腫瘤滲透。例如，IL-15在NK細(xì)胞發(fā)育、存活和活化中起著至關(guān)重要的作用，表達(dá)IL-15的CAR-NK細(xì)胞在體內(nèi)表現(xiàn)出增強(qiáng)的持久性和抗腫瘤活性。

目前CAR-NK已經(jīng)在血液系統(tǒng)腫瘤和實(shí)體瘤中顯示出了可喜的療效，包括急性髓系白血病、淋巴瘤、肝細(xì)胞癌、結(jié)直腸癌、胰腺癌、胃癌、食管鱗狀細(xì)胞癌等。

例如，在胃癌中，HER2蛋白顯著過(guò)表達(dá)，研究人員設(shè)計(jì)了HER2-CAR-NK細(xì)胞，特異性靶向并破壞HER2陽(yáng)性胃癌細(xì)胞，并產(chǎn)生更高水平的細(xì)胞因子。但是HER2-CAR-NK細(xì)胞在較大的實(shí)體瘤中的療效降低，深入研究表明，阿帕替尼治療可使NK細(xì)胞浸潤(rùn)到更大的腫瘤中，從而提高HER2-CAR-NK細(xì)胞的治療效果。這種方法提出了一種通過(guò)將藥物治療與免疫細(xì)胞療法相結(jié)合來(lái)治療大腫瘤或耐藥性腫瘤的新策略，以改善整體治療結(jié)果。

巨噬細(xì)胞是主要的先天免疫細(xì)胞（激活先天性免疫），具有強(qiáng)大的吞噬能力、抗原呈遞活性、分泌細(xì)胞因子和趨化因子，以及穿透致密組織并在腫瘤中積累等多種特性。 這些屬性使巨噬細(xì)胞成為CAR免疫治療的潛在候選者。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞TAM有兩種類型，分別為M1和M2。

①M(fèi)1巨噬細(xì)胞為抗腫瘤亞群，因?yàn)樗鼈冊(cè)谕淌砂┘?xì)胞后釋放促炎因子和趨化因子，表現(xiàn)出抗原信號(hào)以激活CD4+T細(xì)胞和細(xì)胞毒性CD8+T細(xì)胞，從而激活機(jī)體免疫。并且M1巨噬細(xì)胞產(chǎn)生腫瘤殺傷分子，包括活性氧（ROS）和有毒一氧化氮（NO），對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生直接的細(xì)胞毒作用。

②M2巨噬細(xì)胞為促腫瘤亞群，可以產(chǎn)生IL-10、IL-4 和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）等抗炎細(xì)胞因子，高表達(dá)精氨酸酶1（Arg1）可以介導(dǎo)多胺合成和膠原蛋白形成，以及刺激腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和修復(fù)受損組織，它們還分泌血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）和基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）以促進(jìn)腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移。

基于以上對(duì)巨噬細(xì)胞的介紹，研究人員對(duì)巨噬細(xì)胞進(jìn)行重編程，使得TAM的表型從促腫瘤表型轉(zhuǎn)變?yōu)榭鼓[瘤表型（即M2重編程為M1）?？梢杂袃煞N策略：

①針對(duì)巨噬細(xì)胞極化信號(hào)通路：使用TLR激動(dòng)劑、CSF1-R抑制劑、PI3K抑制劑和某些表觀遺傳學(xué)抑制劑。

②針對(duì)特定的TAM功能：通過(guò)靶向SIRP1α-CD47、LILRB1-β2M、Siglec10-CD24和PD1-PDL1等增強(qiáng)吞噬作用，還可以通過(guò)抑制Siglec1、PD-L1、MARCO 和LILRB2來(lái)靶向巨噬細(xì)胞免疫抑制活性。

重編程使巨噬細(xì)胞維持在M1表型，促進(jìn)促炎細(xì)胞因子和ROS的分泌，吞噬能力的提高和巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的CD8+T細(xì)胞、NK細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的免疫功能的增強(qiáng)。

圖3.TAM的重編程

基于以上認(rèn)識(shí)，CAR-M的機(jī)制就是使巨噬細(xì)胞維持在M1抗腫瘤的狀態(tài)（目前臨床上CAR-M的細(xì)胞來(lái)源通常是外周血單核細(xì)胞和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞），CAR-M通過(guò)釋放 TNF、NO 和 ROS 介導(dǎo)直接細(xì)胞毒作用（圖4a），也通過(guò)其表面的FcR與腫瘤細(xì)胞上包被的抗原肽結(jié)合來(lái)發(fā)揮ADCC和抗體依賴的吞噬作用ADP(圖4b)。當(dāng) CAR-M 將腫瘤抗原呈遞給輔助性 T 細(xì)胞并募集其他免疫細(xì)胞時(shí)，可以實(shí)現(xiàn)協(xié)同免疫反應(yīng)(圖4c)。并且CAR-M可以根據(jù)CAR的設(shè)計(jì)發(fā)揮不同的作用，比如CCL19-CAR-M促進(jìn) CCR7 陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞的吞噬，從而減緩腫瘤進(jìn)展和轉(zhuǎn)移；CD147-CAR-M觸發(fā) MMP產(chǎn)生以降解ECM，并促進(jìn)更多的免疫細(xì)胞浸潤(rùn)（圖4d）。

圖4.CAR-M的機(jī)制

目前對(duì)CAR-M的設(shè)計(jì)結(jié)果表明，CAR-T的設(shè)計(jì)原則也適用于CAR-M，而細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域通常被修飾為包含促進(jìn)巨噬細(xì)胞活化和極化的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)基序。

①第一代CAR-M（圖5a、b和c）：

a. 將CD3ζ作為細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域可以促進(jìn)CAR-M的能力。

b.細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域Megf10顯著增強(qiáng)吞噬作用，并且PI3K的加入進(jìn)一步促進(jìn)了吞噬能力。

c. 細(xì)胞內(nèi)CD147信號(hào)導(dǎo)致ECM降解，從而將更多的T細(xì)胞募集到TME。

②第二代CAR-M（圖5d、e和f）：

d. 利用腺病毒載體Ad5f35將抗HER2-CAR轉(zhuǎn)移到巨噬細(xì)胞中，使巨噬細(xì)胞向M1表型傾斜。

e. 誘導(dǎo)多能干細(xì)胞IPSC分化的巨噬細(xì)胞為CAR-M提供了充足的來(lái)源。表達(dá)CD86-FcRγ-CAR的巨噬細(xì)胞的抗腫瘤活性顯著增強(qiáng)，f. 表達(dá)CD3ζ-TIR-CAR的巨噬細(xì)胞可以維持長(zhǎng)期的M1極化。

③第三代CAR-M（圖5g和h）：

g. 通過(guò)CAR-IFN-γ納米復(fù)合物將IFN-γ添加到細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域，顯著增強(qiáng)抗腫瘤療效。

h. 攜帶RP-182肽的納米復(fù)合物不僅將巨噬細(xì)胞表型促進(jìn)到M1，而且還將CAR-ErbB2基因遞送給巨噬細(xì)胞，從而改善其吞噬作用。

圖5.CAR-M的構(gòu)建

在這里研究人員比較了CAR-T、CAR-NK和CAR-M的優(yōu)勢(shì)和面臨的問(wèn)題（圖6）。CAR-T面臨的GVHD和CRS、神經(jīng)毒性等副作用，而CAR-NK和CAR-M療法大大減少，部分是因?yàn)镹K細(xì)胞和巨噬細(xì)胞是先天免疫細(xì)胞，安裝上CAR之后，具有抗原依賴性和自身天然的細(xì)胞毒作用來(lái)發(fā)揮抗腫瘤的作用，多重殺傷機(jī)制使得CAR-NK和CAR-M的毒副作用降低；細(xì)胞的擴(kuò)增問(wèn)題和缺乏腫瘤特異性抗原是三種療法均面臨的問(wèn)題，這提示探索最優(yōu)的靶標(biāo)（在癌細(xì)胞上高表達(dá)，而在正常細(xì)胞上低表達(dá)或不表達(dá)）對(duì)未來(lái)提高治療療效，減少毒副作用是至關(guān)重要的，這也符合精準(zhǔn)醫(yī)療的準(zhǔn)則。

①大量浸潤(rùn)腫瘤組織的能力：細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）由多種大分子蛋白、纖維分子、蛋白多糖、糖蛋白和糖胺聚糖組成，是大多數(shù)抗腫瘤治療（包括 CAR-T 和 CAR-NK 治療）的物理屏障。相比之下，巨噬細(xì)胞能夠通過(guò)分泌多種參與細(xì)胞外基質(zhì)降解的基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）來(lái)浸潤(rùn)TME。

②很少發(fā)生重度CRS和神經(jīng)毒性。

③提高了抗原提呈的能力并促進(jìn)了T細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用（激活適應(yīng)性免疫反應(yīng)），有更強(qiáng)的吞噬活性和腫瘤殺傷能力。

④具有可靠的細(xì)胞來(lái)源和擴(kuò)展擴(kuò)增：目前臨床上CAR-M的細(xì)胞來(lái)源通常是外周血單核細(xì)胞和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞。

⑤降低了靶標(biāo)特異性非腫瘤毒性：這是由于CAR表達(dá)的瞬時(shí)性質(zhì)。

①高插入突變風(fēng)險(xiǎn)：CAR-M基因轉(zhuǎn)移主要通過(guò)病毒轉(zhuǎn)染進(jìn)行，插入突變風(fēng)險(xiǎn)提高。

②缺乏腫瘤特異性抗原（這是CAR-T、CAR-NK、CAR-M均面臨的挑戰(zhàn)）

③靜脈輸入的巨噬細(xì)胞在體內(nèi)的遷移特性會(huì)嚴(yán)重影響治療效果。

圖6. CAR-T、CAR-NK和CAR-M的優(yōu)勢(shì)和面臨的問(wèn)題的比較

研究人員發(fā)現(xiàn)CAR-M和CAR-T可以在體外協(xié)同殺死腫瘤細(xì)胞。CAR-T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，如IFN-γ和GM-CSF，可以將巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化為M1表型，從而增強(qiáng)CAR-M的細(xì)胞毒性。同時(shí)，這些細(xì)胞因子可以觸發(fā)CAR-M上CD80或CD86的上調(diào)，這反過(guò)來(lái)又可能通過(guò)CD28正向調(diào)節(jié)CAR-T細(xì)胞的細(xì)胞毒能力。此外，當(dāng)CAR-T和CAR-M共培養(yǎng)時(shí)，IFN-γ、IL-1β、CXCL1、MIP-2、IL-6和單核細(xì)胞趨化蛋白（MCP）-1等細(xì)胞因子的水平急劇增加，可能在體內(nèi)形成炎癥TME。CAR-T和CAR-M的協(xié)同效應(yīng)表明聯(lián)合治療癌癥治療的可行性。此外，CAR-M的腫瘤浸潤(rùn)能力可能會(huì)將更多的CAR-T細(xì)胞募集到腫瘤部位，并發(fā)揮強(qiáng)大的腫瘤殺傷能力。

NKT細(xì)胞稱為自然殺傷T細(xì)胞，其細(xì)胞表面同時(shí)表達(dá)T細(xì)胞受體TCR和NK細(xì)胞受體。NKT細(xì)胞能大量產(chǎn)生細(xì)胞因子，且可以發(fā)揮與NK細(xì)胞相似的細(xì)胞毒作用（這里我們應(yīng)該想到CAR-NKT的CRS和神經(jīng)毒性也是大大降低的），即NKT細(xì)胞可以調(diào)節(jié)先天性免疫和特異性免疫。

CAR-γδT 和CAR-NKT細(xì)胞都可以通過(guò) CAR-、ADCC-、Fas/FasL-、TRAIL 和 TNFR 介導(dǎo)的方式殺死腫瘤細(xì)胞，并可以通過(guò)分泌細(xì)胞因子來(lái)動(dòng)員其他免疫細(xì)胞。CAR-γδT 細(xì)胞也可以被選定的受體激活，而 CAR-NKT 細(xì)胞的激活受體僅限于CD1d。此外，CAR-γδT 細(xì)胞可以將抗原呈遞給 T 細(xì)胞，CAR-NKT 細(xì)胞可以促進(jìn)樹突狀細(xì)胞成熟并被樹突狀細(xì)胞激活。

圖7. CAR-γδT和CAR-NKT抗腫瘤的機(jī)制

CAR-NKT細(xì)胞療法由于其NK細(xì)胞和T細(xì)胞雙重特性的優(yōu)勢(shì)，可以彌補(bǔ)CAR-T細(xì)胞療法的缺點(diǎn)。

①CRS減少：與傳統(tǒng)的CAR-T細(xì)胞療法相比，CAR-NKT細(xì)胞療法具有與CAR-T細(xì)胞相當(dāng)?shù)哪[瘤細(xì)胞毒性，但CRS等副作用明顯減少。

②多種機(jī)制殺傷腫瘤細(xì)胞：CAR-NKT細(xì)胞可以通過(guò)CAR和CD1d依賴性機(jī)制雙重特異性殺傷能力（NKT細(xì)胞殺傷依賴于靶細(xì)胞CD1d的表達(dá)，因此NKT對(duì)CD1d陰性腫瘤細(xì)胞無(wú)效；但是，將其與CAR結(jié)合使用可以彌補(bǔ)這一限制）；也可以通過(guò)FASL、TNF-α、TRAIL和穿孔素/顆粒酶以靶點(diǎn)非依賴性方式直接殺死腫瘤細(xì)胞，這使得它們更適用于消除異質(zhì)性腫瘤。

③改善腫瘤微環(huán)境：CAR-NKT細(xì)胞可以通過(guò)啟動(dòng)Th1/Th2細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)來(lái)募集和激活其他免疫細(xì)胞，包括激活NK細(xì)胞和成熟的樹突狀細(xì)胞以刺激細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞并抑制TAM。

④不會(huì)誘導(dǎo)GvHD：NKT細(xì)胞識(shí)別CD1d，一種非經(jīng)典的MHC-I樣分子，因此，CAR-NKT細(xì)胞療法不會(huì)誘導(dǎo)GvHD。

4、CAR-NKT面臨的挑戰(zhàn)及解決方案

①與CAR-γδT一樣，面臨數(shù)量少、擴(kuò)增困難的問(wèn)題。研究人員發(fā)現(xiàn)，將iNKT TCR基因工程化為造血干細(xì)胞（HSC），以生成工程化iNKT細(xì)胞。這些HSC-iNKT細(xì)胞與內(nèi)源性iNKT細(xì)胞非常相似，在體內(nèi)有效抑制多發(fā)性骨髓瘤和黑色素瘤異種移植物的生長(zhǎng)。

②持久性差。CAR-NKT細(xì)胞注入體內(nèi)后活性和增殖逐漸下降，需要多次輸注CAR-NKT細(xì)胞才能達(dá)到預(yù)期的治療效果，這加劇了NKT細(xì)胞數(shù)量少的問(wèn)題。有研究表明CD62L NKT細(xì)胞在小鼠模型中具有更好的持久性和抗腫瘤活性。

到目前為止，只注冊(cè)了5項(xiàng)CAR-NKT臨床試驗(yàn)。其中，靶向GD2的自體CAR-NKT細(xì)胞用于治療復(fù)發(fā)或耐藥性神經(jīng)母細(xì)胞瘤的I期臨床試驗(yàn)結(jié)果（NCT03294954）顯示：通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)從3例患者的外周血單個(gè)核細(xì)胞中產(chǎn)生CAR-NKT細(xì)胞，并分別擴(kuò)增了15、14和9天，分泌IL-15的CAR-NKT細(xì)胞輸注患者后在體內(nèi)擴(kuò)增，有效浸潤(rùn)腫瘤部位，介導(dǎo)腫瘤消退。3例患者中有1例達(dá)到CR，骨轉(zhuǎn)移消退，無(wú)患者出現(xiàn)明顯的副作用。這項(xiàng)研究表明，盡管NKT細(xì)胞在外周血中很少見，但可以進(jìn)行基因修飾以表達(dá)CAR，在臨床規(guī)模上擴(kuò)增，并安全地用于治療患者。

不同于T細(xì)胞，NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、NKT細(xì)胞都是先天性免疫細(xì)胞，本身都具有先天的細(xì)胞毒作用，可以在事先沒(méi)有致敏的情況下迅速作出反應(yīng)。這些細(xì)胞安裝上CAR結(jié)構(gòu)之后，就擁有了抗原依賴性和本身的細(xì)胞毒作用兩種殺傷腫瘤的機(jī)制，研究人員重新設(shè)計(jì)CAR結(jié)構(gòu)，可以最大程度的降低CAR引發(fā)的毒副作用，同時(shí)最大程度的激發(fā)這些細(xì)胞本身的天然抗腫瘤作用，這樣就做到了提高療效的同時(shí)減少了毒副作用。但是細(xì)胞數(shù)量少、擴(kuò)增困難、缺乏特異性抗原是CAR免疫療法共同面臨的問(wèn)題，這也指給了我們未來(lái)的研究方向，解決這些問(wèn)題，CAR-免疫療法將更上一層樓。

參考文獻(xiàn)

[1] Zhu X, Xue J, Jiang H, Xue D. CAR-NK cells for gastrointestinal cancer immunotherapy: from bench to bedside. Mol Cancer. 2024;23(1):237. Published 2024 Oct 23. IF: 27.7

[2] Peng L, Sferruzza G, Yang L, Zhou L, Chen S. CAR-T and CAR-NK as cellular cancer immunotherapy for solid tumors. Cell Mol Immunol. 2024;21(10):1089-1108. F: 21.8

[3] Bahramloo M, Shahabi SA, Kalarestaghi H, et al. CAR-NK cell therapy in AML: Current treatment, challenges, and advantage. Biomed Pharmacother. 2024;177:117024. IF: 6.9

[4] Lu J, Ma Y, Li Q, Xu Y, Xue Y, Xu S. CAR Macrophages: a promising novel immunotherapy for solid tumors and beyond. Biomark Res. 2024;12(1):86. Published 2024 Aug 23. IF: 9.5

[5] Li N, Geng S, Dong ZZ, et al. A new era of cancer immunotherapy: combining revolutionary technologies for enhanced CAR-M therapy. Mol Cancer. 2024;23(1):117. Published 2024 Jun 1. IF: 27.7

[6] Zhang P, Zhang G, Wan X. Challenges and new technologies in adoptive cell therapy. J Hematol Oncol. 2023;16(1):97. Published 2023 Aug 18. IF: 29.5