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《動(dòng)物模型構(gòu)建與行為評(píng)估》電子版pdf，網(wǎng)盤(pán)發(fā)貨 創(chuàng)傷性腦損傷（traumatic brain injury，TBI）是通過(guò)控制皮層沖擊（Rodent controlled cortical impact injury，CCI）模型誘導(dǎo)的。8周齡雄性SD大鼠，首先將大鼠稱重后麻醉，麻醉后以俯臥位固定在手術(shù)墊上，用剃須刀片剃除大鼠頭頂部毛發(fā)，暴露頭皮，用手術(shù)刀作頭頂皮膚正中切口，暴露顱骨、表面筋膜和軟組織。使用40%雙氧水緩慢輕柔地溶解掉顱骨表面軟組織。使用直徑0.4cm鉆頭在顱左側(cè)以中線旁2.5mm，前囟后1.5mm為中心磨開(kāi)一直徑為5mm的骨窗，同時(shí)保留硬腦膜。隨后，將大鼠固定在TBI建模裝置上，設(shè)置如下參數(shù)：沖擊深度3.5mm，速度5m/s，接觸時(shí)間500ms。撞擊后，將大鼠從裝置中取出，用棉簽短暫壓迫止血，清理手術(shù)野，間斷縫合切口。對(duì)于Sham組，僅開(kāi)放顱窗而不進(jìn)行TBI操作。整個(gè)操作過(guò)程中盡量避免出血和對(duì)周?chē)M織的刺激。所有大鼠處理完畢后放置于加熱墊上待其自然蘇醒。神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損評(píng)估改良神經(jīng)功能評(píng)分（Mahmood’s method neurological severity score，mNSS）改良神經(jīng)功能評(píng)分（mNSS）是一種用于評(píng)估實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（特別是嚙齒類(lèi)動(dòng)物，如大鼠和小鼠）神經(jīng)功能缺損程度的綜合評(píng)分系統(tǒng)。能夠全面地考量動(dòng)物在運(yùn)動(dòng)、感覺(jué)和反射等多個(gè)方面的神經(jīng)功能表現(xiàn)，在研究腦損傷（如腦卒中、腦外傷等）、神經(jīng)退行性疾病以及神經(jīng)保護(hù)藥物篩選等實(shí)驗(yàn)中被廣泛應(yīng)用。- 正常運(yùn)動(dòng)（0分）：動(dòng)物能夠正常行走、奔跑，四肢運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)，無(wú)任何異常步態(tài)或肢體無(wú)力的表現(xiàn)。例如，小鼠或大鼠在開(kāi)闊場(chǎng)地內(nèi)能夠自由、快速地移動(dòng)，四肢動(dòng)作流暢，沒(méi)有拖曳肢體、搖晃或跌倒等情況。
- 輕度運(yùn)動(dòng)障礙（1分）：動(dòng)物行走時(shí)表現(xiàn)出輕微的步態(tài)異常，如輕微的肢體不協(xié)調(diào)或行走時(shí)稍顯不穩(wěn)，但仍能夠自主行走并保持身體平衡?？赡軙?huì)出現(xiàn)輕微的肢體拖曳，但不影響正常活動(dòng)。
- 中度運(yùn)動(dòng)障礙（2分）：動(dòng)物行走困難，有明顯的步態(tài)不穩(wěn)，肢體協(xié)調(diào)性差。可能會(huì)頻繁出現(xiàn)肢體拖曳，甚至偶爾會(huì)跌倒，但在輔助下（如輕推）能夠繼續(xù)行走。
- 重度運(yùn)動(dòng)障礙（3分）：動(dòng)物幾乎不能自主行走，肢體活動(dòng)嚴(yán)重受限，大部分時(shí)間處于臥倒?fàn)顟B(tài)，只有在強(qiáng)烈刺激下（如疼痛刺激）才能引起肢體微弱的活動(dòng)。
- 肢體癱瘓（4分）：動(dòng)物完全喪失肢體運(yùn)動(dòng)能力，對(duì)任何刺激均無(wú)肢體運(yùn)動(dòng)反應(yīng)。
- 正常感覺(jué)（0分）：動(dòng)物對(duì)觸覺(jué)、痛覺(jué)和本體感覺(jué)等刺激的反應(yīng)正常。例如，用棉棒輕觸動(dòng)物的肢體、身體等部位，動(dòng)物能夠迅速做出反應(yīng)，如躲避、轉(zhuǎn)頭等；對(duì)輕微的針刺（使用合適的針具，控制針刺深度和力度）能產(chǎn)生正常的痛覺(jué)反應(yīng)，如縮肢、鳴叫等；在放置于傾斜平面或抬起四肢等操作時(shí)，動(dòng)物能通過(guò)本體感覺(jué)維持身體平衡。
- 輕度感覺(jué)障礙（1分）：動(dòng)物對(duì)觸覺(jué)、痛覺(jué)或本體感覺(jué)的反應(yīng)稍遲鈍。如棉棒輕觸時(shí)反應(yīng)延遲，針刺引起的痛覺(jué)反應(yīng)較正常減弱，在傾斜平面上維持平衡的能力稍差，但仍能察覺(jué)到刺激并做出一定反應(yīng)。
- 中度感覺(jué)障礙（2分）：動(dòng)物對(duì)感覺(jué)刺激的反應(yīng)明顯遲鈍。需要較強(qiáng)的觸覺(jué)刺激（如用力按壓）才能引起反應(yīng)，痛覺(jué)反應(yīng)明顯減弱，在傾斜平面上很難維持平衡，本體感覺(jué)明顯受損。
- 重度感覺(jué)障礙（3分）：動(dòng)物幾乎對(duì)觸覺(jué)、痛覺(jué)和本體感覺(jué)刺激無(wú)反應(yīng)，僅在非常強(qiáng)烈的刺激下可能出現(xiàn)微弱反應(yīng)或無(wú)反應(yīng)。
- 正常反射（0分）：包括角膜反射、耳反射、翻正反射等生理反射正常。例如，用細(xì)棉絲輕觸角膜時(shí)，動(dòng)物會(huì)迅速眨眼；在耳部受到輕微聲音或氣流刺激時(shí)，動(dòng)物會(huì)有耳部抖動(dòng)等反應(yīng)；將動(dòng)物從空中倒置后，動(dòng)物能夠迅速翻轉(zhuǎn)身體恢復(fù)正常姿勢(shì)。
- 輕度反射減弱（1分）：部分反射減弱。如角膜反射或耳反射稍有延遲，翻正反射稍慢，但仍能完成反射動(dòng)作。
- 中度反射減弱（2分）：反射明顯減弱。需要較強(qiáng)的刺激才能引出反射，且反射動(dòng)作不完整或延遲明顯。例如，角膜反射可能只有輕微的眼球轉(zhuǎn)動(dòng)，翻正反射可能需要較長(zhǎng)時(shí)間才能完成。
- 重度反射減弱或消失（3分）：大部分反射消失，即使給予強(qiáng)烈刺激也很難引出反射動(dòng)作。
- mNSS總分為0-10分，分?jǐn)?shù)越高表示神經(jīng)功能缺損越嚴(yán)重。
- 0-3分：一般認(rèn)為神經(jīng)功能基本正?；騼H有輕微缺損，動(dòng)物的日常生活活動(dòng)（如進(jìn)食、飲水、自主活動(dòng)等）基本不受影響。
- 4-6分：提示中度神經(jīng)功能缺損，動(dòng)物可能出現(xiàn)明顯的運(yùn)動(dòng)、感覺(jué)或反射異常，對(duì)正常生活活動(dòng)有一定影響，如活動(dòng)范圍減小、進(jìn)食稍有困難等。
- 7-10分：表示重度神經(jīng)功能缺損，動(dòng)物的生存質(zhì)量嚴(yán)重下降，可能需要特殊護(hù)理，如無(wú)法自主進(jìn)食、飲水，活動(dòng)能力極度受限等。
進(jìn)行抓力實(shí)驗(yàn)時(shí)將大鼠放置在抓力板上，向后牽拉鼠尾，待動(dòng)物抓牢后，均勻用力向后拉，使動(dòng)物松爪。此時(shí)記錄儀會(huì)記錄下動(dòng)物的最大抓力。依次檢測(cè)左右抓力并記錄。每只大鼠測(cè)試5次以上，待抓力讀數(shù)穩(wěn)定在某一數(shù)值上下波動(dòng)時(shí)記錄5個(gè)讀數(shù)。新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)評(píng)估大鼠情景記憶能力：新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)（Novel Object Recognition Test）主要基于大鼠對(duì)新奇事物的探索天性來(lái)評(píng)估其情景記憶。大鼠在熟悉環(huán)境中的物體后，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間間隔，對(duì)新出現(xiàn)物體的探索時(shí)間會(huì)相對(duì)較長(zhǎng)。這種對(duì)新物體的偏好反映了大鼠對(duì)之前接觸物體情景的記憶，從而可以用于評(píng)估其情景記憶能力。一個(gè)方形的、大小合適的實(shí)驗(yàn)箱，一般為40-60cm長(zhǎng)、40-60cm寬、30-50cm高，材料可以是有機(jī)玻璃或塑料，以方便觀察大鼠行為。實(shí)驗(yàn)箱放置在安靜、光線均勻的環(huán)境中，避免外界干擾。準(zhǔn)備三個(gè)不同形狀、大小和材質(zhì)的物體，如塑料玩具、金屬小擺件等。物體的大小要適中，以保證大鼠能夠方便地探索，同時(shí)避免物體過(guò)大影響大鼠在實(shí)驗(yàn)箱內(nèi)的活動(dòng)。這些物體表面應(yīng)該是無(wú)毒、無(wú)異味的，并且易于清潔。將大鼠放入空的實(shí)驗(yàn)箱中，讓其自由探索10-15分鐘，使大鼠熟悉實(shí)驗(yàn)箱環(huán)境。這一步是為了減少大鼠對(duì)新環(huán)境的好奇和緊張情緒，以便后續(xù)更好地觀察其對(duì)物體的探索行為。在實(shí)驗(yàn)箱內(nèi)放置兩個(gè)相同的物體（A和A'），將大鼠放入實(shí)驗(yàn)箱中，讓其自由探索這兩個(gè)物體10-15分鐘。觀察并記錄大鼠對(duì)每個(gè)物體的探索時(shí)間。探索行為可以定義為大鼠用鼻子嗅聞物體、用爪子觸碰物體、圍繞物體轉(zhuǎn)圈等行為，當(dāng)大鼠的鼻尖距離物體在2-3cm以內(nèi)或者直接接觸物體時(shí)，就認(rèn)為大鼠在探索該物體。將實(shí)驗(yàn)箱中的一個(gè)熟悉物體（如A'）換成一個(gè)新物體（B），把大鼠再次放入實(shí)驗(yàn)箱，觀察并記錄大鼠在5-10分鐘內(nèi)對(duì)新物體（B）和熟悉物體（A）的探索時(shí)間。記錄大鼠在訓(xùn)練階段對(duì)兩個(gè)相同物體的探索時(shí)間（T1和T1'），以及在測(cè)試階段對(duì)新物體和熟悉物體的探索時(shí)間（T2和T2'）。計(jì)算辨別指數(shù)（Discrimination Index，DI）來(lái)評(píng)估大鼠的情景記憶能力。計(jì)算公式為：DI=(T2-T2')/(T2+T2')。如果DI>0，說(shuō)明大鼠對(duì)新物體有偏好，即能夠區(qū)分新物體和熟悉物體，反映其具有情景記憶能力；如果DI=0，表明大鼠對(duì)新物體和熟悉物體的探索時(shí)間相同，可能沒(méi)有情景記憶；如果DI<0，這是一種異常情況，可能是由于實(shí)驗(yàn)誤差或者大鼠的異常行為導(dǎo)致。 該測(cè)試通常用于評(píng)估大鼠的空間學(xué)習(xí)和工作記憶能力。水迷宮由水池、攝像頭及計(jì)算機(jī)分析系統(tǒng)組成。池壁周邊3處放置光源，用遮光簾隔開(kāi)外界，將水池分為SE、SW、NS、NW4個(gè)象限，池壁上貼3個(gè)形狀不同的提示物。適應(yīng)時(shí)不放置平臺(tái)，將鼠頭朝壁輕輕放入水中，60s后撈出并擦干放歸鼠籠。實(shí)驗(yàn)第1~5天為訓(xùn)練，每天在同一時(shí)間，第3象限固定平臺(tái)，將每只大鼠依次從不同的象限放入，讓其在60s內(nèi)尋找平臺(tái)，如60s后仍未找到平臺(tái)，則將其引導(dǎo)至平臺(tái)，后撈出擦干。每天進(jìn)行4次訓(xùn)練重復(fù)，每只大鼠訓(xùn)練間隔30min以上。第6天進(jìn)行測(cè)試，移去平臺(tái)，將大鼠從第1象限放入水中，記錄其在60s內(nèi)活動(dòng)情況。ANY maze系統(tǒng)自動(dòng)記錄并計(jì)算大鼠逃避潛伏期、學(xué)習(xí)期軌跡和實(shí)驗(yàn)期在第3象限呆的時(shí)間和穿越平臺(tái)的次數(shù)等實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。1、Israelsson C，Bengtsson H，Kylberg A，et al. Distinct cellular pat? terns of upregulated chemokine expression supporting a prominent in? flammatory role in traumatic brain injury[J]. J Neurotrauma，2008，25 （8）：959-974. 2、Chen T，Liu WB，Chao XD，et al. Salvianolic acid B attenuates brain damage and inflammation after traumatic brain injury in mice[J]. Brain Res Bull，2011，84（2）：163-168.3、Mahmood A，Lu DY，Wang L，et al. Treatment of traumatic brain injury in female rats with intravenous administration of bone marrow stromal cells[J]. Neurosurgery，2001，49（5）：1196-1204.4、Wang ZY，Wang ZY，Wang AQ，et al. The neuroprotective mecha? nism of sevoflurane in rats with traumatic brain injury via FGF2[J]. J Neuroinflammation，2022，19（1）：51.5、朱林,夏雷,袁浩,等.抑制AMPARs內(nèi)吞可改善創(chuàng)傷性腦損傷大鼠的運(yùn)動(dòng)和認(rèn)知功能[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2024,49(11):1377-1384.DOI:10.13406/j.cnki.cyxb.003617.6、Yu YZ，Huang ZL，Dai CF，et al. Facilitated AMPAR endocytosis causally contributes to the maternal sleep deprivation-induced impair? ments of synaptic plasticity and cognition in the offspring rats[J]. Neuro? pharmacology，2018，133：155-162. 動(dòng)物行為實(shí)驗(yàn)相關(guān)方法電子版pdf推薦，網(wǎng)盤(pán)發(fā)貨
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