技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種中藥飲片，具體講是的制附片的炮制加工方法。

背景技術(shù)

    附子為毛莨科植物烏頭(Aconitum carmichaeli Debx)子根的加工品，是一味著名和療效確切的中藥材。附子性辛、甘，大熱，有毒，歸心、腎、脾經(jīng)，具有回陽救逆、補火助陽、散寒止痛之功效。附子既為有毒中藥的代表，亦為臨床常用的中藥，歷代醫(yī)家特別重視附子的炮制減毒工藝研究。

已有研究表明，附子中的有效成分和毒性成分均為生物堿。其中主要的毒性成分是雙酯型生物堿，因此附子炮制的目的就是為去除其毒性成分。雙酯型生物堿的毒性與其結(jié)構(gòu)中的酯鍵直接相關(guān)，此類生物堿的酯鍵不穩(wěn)定，加熱水解可使其斷裂。在炮制過程中，首先是烏頭堿水解掉其8位的乙?；杀郊柞躅^原堿（其毒性約為烏頭堿的1/200），再進一步水解掉其14位的苯甲?；蔀躅^原堿（其毒性僅為烏頭堿的1/2000），同時也伴隨發(fā)生脫氧反應(yīng)，生成塔拉烏頭胺。附子中的新烏頭堿、次烏頭堿也會發(fā)生類似反應(yīng)。另外，烏頭堿類生物堿中8位上的乙?；€可以被一些脂肪?；脫Q生成毒性較小的脂類生物堿（lipo-alkaloid），附子炮制過程中因生物堿被破壞和流失，也可以使毒性降低。

附子的炮制始于我國漢代。自清代開始采用膽巴水浸泡、煮、漂、蒸等方法。中國藥典（2010版）沿用了膽巴炮制方法。例如將生附子用食用膽巴水浸泡、煮透、水漂、切片、再水漂、染色、蒸制、干燥即為黑附片。白附片同樣亦需經(jīng)蒸制炮制。因炮制過程需經(jīng)反復(fù)的水浸泡、漂洗等處理，炮制工藝繁瑣，方法復(fù)雜，可控性差，有效成分損失嚴重，存在炮制過度之嫌。附子炮制過程中生物堿的減少主要在于膽巴水泡（損失31.6%）、漂片（損失33.6%）、水解（損失16.9%），生物堿總量減少了81.3%，又因為泡、煮、漂、蒸的時間、溫度等不同，不同批次附片成分含量相差可高達10倍。此外，膽巴漂洗不盡或殘留也是影響附片質(zhì)量和安全性的重要因素之一。亦有文獻報道生附片用水潤透后再蒸制，或生附子經(jīng)蒸制后再切片干燥的加工方法。

公開號CN1785328A的中國專利報道了一種附子的炮制方法，采用水浸陰干烘制法，常溫下將附子生品置水中浸泡后，取出陰干，用烘箱高溫烘烤后取出，即得制附子。其將附子生品置水中浸泡后會導(dǎo)致有效成分的流失。公開號CN101485746A的中國專利報道了一種附子的炮制方法，是將附子原料去皮后用堿水充分浸潤，再采用高溫高壓設(shè)備進行加熱減毒處理后烘干，即得附子炮制成品。其將附子用堿水浸潤后使炮制品呈堿性，可能會影響后續(xù)的中藥復(fù)方配伍，導(dǎo)致藥物煎煮成分的變化。而且，這些文獻報道的炮制方法，都是將生附子干品用水或堿水浸泡/浸潤后再加熱干燥等處理，炮制加工方法較為復(fù)雜繁瑣。

發(fā)明內(nèi)容

    針對上述情況，本發(fā)明提供了一種更為簡單、有效的制附片的炮制加工方法，既能使所得到的制附片顯著降低有毒成分雙酯型生物堿的含量，同時能有效保留單酯型生物堿及附子強心、升壓的有效成分鹽酸多巴胺和去甲豬毛菜堿，確保制附片回陽救逆、強心升壓藥效作用的發(fā)揮。

本發(fā)明制附片的炮制加工方法，是將生附片在102~240℃溫度下進行維持0.25~2小時的熱處理后，干燥，即得到炮制后的制附片。

本發(fā)明上述炮制方法中所說的生附片，可以包括有潤濕狀態(tài)的生附片或干燥狀態(tài)的生附片等不同形式。不同形式的生附片進行炮制時還可分別采用下述的優(yōu)選條件和方式：

對于潤濕狀態(tài)的生附片，如直接由新鮮生附子得到的切片，或是由干燥的附片被水充分潤濕后所成的生附片，可直接在102~108℃的水蒸汽濕熱條件下進行維持0.5~2小時的熱處理。更進一步，熱處理優(yōu)選溫度為105℃和/或，熱處理時間為保持0.5~1小時。

對于新鮮生附子切片后經(jīng)曬干或烘干后的干燥狀態(tài)的生附片，可于140~240℃的干熱條件下進行維持0.25~1小時的熱處理。更進一步的熱處理優(yōu)選溫度為140~200℃。

    本發(fā)明上述炮制加工方法在具體實施時，可以采用如制藥工業(yè)中的干熱滅菌（干熱空氣烘制）、濕熱滅菌（濕熱水蒸汽蒸制）等常用設(shè)備及方式進行。

本發(fā)明上述炮制加工方法，充分利用了附子中酯型生物堿對熱不穩(wěn)定的特點，直接通過加熱使其酯鍵斷裂，先熱解（水解）掉其8位的乙酰基生成苯甲酰烏頭類原堿，再進一步熱解（水解）掉其14位的苯甲?；蔀躅^類原堿，從而達到減毒增效的目的。

本發(fā)明上述炮制加工方法由于不對附子用膽巴水浸泡、煮和水漂洗等處理，有效避免了生物堿等水溶性有效成分的流失。而將附子切片后直接采用目前的干熱滅菌柜、高壓蒸汽滅菌柜等進行干熱烘制或濕熱蒸制，簡便高效，且附片受熱均勻、質(zhì)量穩(wěn)定可控，適合于工業(yè)化大生產(chǎn)。

以下通過實施例的具體實施方式再對本發(fā)明的上述內(nèi)容作進一步的詳細說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。在不脫離本發(fā)明上述技術(shù)思想情況下，根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)知識和慣用手段做出的各種替換或變更，均應(yīng)包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。

具體實施方式

實施例1

取新鮮生附子，按藥典規(guī)定的方法（以下同此）除去母根、須根及泥沙，洗凈，切片，曬干，即為生附片。將生附片置干熱滅菌柜中，于200℃干熱高溫烘制30 min，即得本發(fā)明所述的制附片。

實施例2

取新鮮生附子，除去母根、須根及泥沙，洗凈，切片后，直接置于濕熱滅菌柜中，于105±3 ℃濕熱高壓蒸制60 min，再曬干，即得本發(fā)明所述的制附片。

實施例3

取新鮮生附子，除去母根、須根及泥沙，洗凈，切片，曬干，即為生附片。取生附片置干熱滅菌柜中，于240℃干熱高溫烘制15 min，即得本發(fā)明所述的制附片。

實施例4

取新鮮生附子，除去母根、須根及泥沙，洗凈，切片，烘干，即為生附片。取生附片置干熱滅菌柜中，于140℃干熱高溫烘制60 min，即得本發(fā)明所述的制附片。

對采用本發(fā)明上述炮制方法得到的制附片進行的下述檢測，表明了其能具有理想的效果。

．本發(fā)明炮制方法中的干熱烘制和濕熱蒸制對附子6種酯型生物堿含量的影響實驗

1.1  炮制加工新方法與制附片制備

取新鮮生附子，除去母根、須根及泥沙，洗凈，切片（0.3-0.5cm），曬干，即為生附片；取生附片分別于140、200、240 ℃干熱高溫烘制15，30，60 min，即為干熱烘制附片。上述新鮮生附子切片后直接采用105±3 ℃、115±3 ℃、125±3 ℃濕熱高壓蒸制30，60，120 min，再曬干，即為濕熱蒸制附片。

HPLC法測定6種酯型生物堿的含量

1.2.1  色譜條件  色譜柱：Agilent Eclipse XDB C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相A為0.1 mol·L-1醋酸銨溶液（每1000 mL加0.5 mL冰醋酸），B相為乙腈-四氫呋喃（25:15）混合溶液，梯度洗脫程序：0～48 min：85%～74%A，48～49 min：74%～65%A，維持9 min。流速：1 mL·min-1，檢測波長：235 nm；柱溫：35 ℃。

  對照品溶液的制備  取新烏頭堿、次烏頭堿、烏頭堿、苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿對照品適量，精密稱定，加0.05%鹽酸甲醇溶液配置成每1 mL含新烏頭堿14.85 μg、次烏頭堿15.01 μg、烏頭堿15.36 μg、苯甲酰新烏頭原堿14.79 μg、苯甲酰次烏頭原堿15.13 μg、苯甲酰烏頭原堿15.64 μg的混合對照品溶液

1.2.3  供試品溶液的制備  上述制附片粉碎過三號篩，分別稱取約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入0.05 mol·L-1鹽酸溶液50 mL，搖勻，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，搖勻，于12 000r·min-1離心5 min。取上清液，即得。

含量測定  照現(xiàn)行版中國藥典中高效液相色譜法（附錄Ⅳ D）測定，分別精密吸取對照品溶液10-20μL與供試品溶液50μL，注入液相色譜儀，測定，計算含量，結(jié)果見表1。

表1    6種酯型生物堿含量測定結(jié)果（10-5 g·g-1，n=3）

樣品編號 炮制方法 苯甲酰新烏頭堿 苯甲酰烏頭堿 苯甲酰次烏頭堿 新烏頭堿 次烏頭堿 烏頭堿 單酯型生物堿總量 雙酯型生物堿總量 1 生附片 5.73 1.13 1.95 42.7 151.4 7.38 8.81 201.48 2 140℃/15min 10.1 1.45 8.28 12.4 57.3 2.17 19.83 71.87 3 140℃/30min 26.5 14.73 20.9 4.8 13.7 — 62.13 18.5 4 140℃/60min 78.6 20.8 25.3 3.5 8.1 — 124.7 11.6 5 200℃/15min 20.3 2.86 28.9 — 9.01 — 52.06 9.01 6 200℃/30min 76.0 20.5 27.3 — 4.12 — 123.8 4.12 7 200℃/60min 42.5 8.53 11.6 — 2.74 — 62.63 2.74 8 240℃/15min 32.6 5.74 31.5 — 5.14 — 74.6 5.14 9 240℃/30min 33.2 7.3 15.7 — 2.23 — 56.2 2.23 10 240℃/60min 29.5 5.86 7.9 — 1.05 — 43.26 1.05 11 105±3℃/30min 21.0 2.34 10.5 1.14 16.0 — 33.84 17.14 12 105±3℃/60min 35.8 5.50 21.8 — 1.25 — 63.1 1.25 13 105±3℃/120min 63.6 12.7 29.3 — — — 105.6 — 14 115±3℃/30min 71.4 13.5 15.2 — — — 100.1 — 15 115±3℃/60min 105.1 21.3 45.4 — — — 171.8 — 16 115±3℃/120min 83.9 19.7 27.2 — — — 130.8 — 17 125±3℃/30min 96.5 23.4 22.6 — — — 142.5 — 18 125±3℃/60min 85.1 16.8 37.3 — — — 139.2 — 19 125±3℃/120min 56.5 12.4 25.0 — — — 93.9 —

注：— 未檢出

1.3  結(jié)論  由表1可見，附子在140-240℃干熱烘制，雙酯型生物堿含量迅速降低，與加熱溫度和受熱時間呈負相關(guān)；140℃干熱烘制，單酯型生物堿逐漸增加，200-240℃干熱烘制，單酯型生物堿先增后降；其中140-200℃干熱烘制單酯型生物堿含量總體高于240℃。附子在105-125℃濕熱蒸制，雙酯型生物堿極不穩(wěn)定，含量迅速降低；105℃濕熱蒸制，單酯型生物堿逐漸增加，115-125℃濕熱蒸制，單酯型生物堿先增后降。中國藥典規(guī)定制附片含雙酯型生物堿總量不得過0.020%，含單酯型生物堿總量不少于0.010%，本發(fā)明上述的制附片除140℃烘制15 min外，其余均符合藥典規(guī)定。

．本發(fā)明炮制方法中的濕熱蒸制對附子中2種水溶性生物堿含量的影響實驗

2.1  炮制加工新方法與制附片制備

取新鮮生附子，除去母根、須根及泥沙，洗凈，切片（0.3-0.5cm），曬干，即為生附片；取生附片分別于140、200、240 ℃干熱高溫烘制15，30，60 min，即為干熱烘制附片。上述新鮮生附子切片后直接采用105±3 ℃、115±3 ℃、125±3 ℃濕熱高壓蒸制30，60，120 min，再曬干，即為濕熱蒸制附片。

HPLC法測定鹽酸多巴胺和去甲豬毛菜堿2種水溶性生物堿的含量

2.2.1  色譜條件  色譜柱：Agilent Eclipse C18（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動相：0.1%磷酸水溶液；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：280 nm；柱溫：35 ℃；進樣量：10~50 μL。

  對照品溶液的制備  取鹽酸多巴胺對照品和去甲豬毛菜堿對照品適量，精密稱定，加流動相溶解并配置成每1 mL含鹽酸多巴胺2.54 μg和去甲豬毛菜堿2.49 μg的混合對照品溶液。

  供試品溶液的制備  上述制附片粉碎過三號篩，分別稱取約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入0.05 mol·L-1鹽酸50 mL，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz ）30 min，放冷，再稱定重量，用0.05 mol·L-1鹽酸補足減失的重量，搖勻，高速離心（12 000 r·min-1）5 min，取上清液，即得。

含量測定  照現(xiàn)行版中國藥典中高效液相色譜法（附錄Ⅳ D）測定，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，計算含量，結(jié)果見表2。

表2   制附片中鹽酸多巴胺和去甲豬毛菜堿的含量測定結(jié)果

樣品編號 炮制方法 鹽酸多巴胺/mg·g-1 去甲豬毛菜堿/mg·g-1 1 生附片 0.304 0.270 11 105±3℃/30min 0.285 0.248 12 105±3℃/60min 0.261 0.223 13 105±3℃/120min 0.246 0.205 14 115±3℃/30min 0.240 0.191 15 115±3℃/60min 0.217 0.164 16 115±3℃/120min 0.185 0.112 17 125±3℃/30min 0.194 0.133 18 125±3℃/60min 0.119 0.087 19 125±3℃/120min 0.042 0.028

         注：— 未檢出

2.3  結(jié)論  由表2可見，附子在105-125℃濕熱蒸制，對鹽酸多巴胺和去甲豬毛菜堿含量有明顯影響，與溫度和時間呈負相關(guān)。105℃濕熱蒸制對鹽酸多巴胺和去甲豬毛菜堿含量影響較小，115-125℃濕熱蒸制可顯著降低鹽酸多巴胺和去甲豬毛菜堿的含量。鹽酸多巴胺和去甲豬毛菜堿為附子強心、升壓的有效成分，故為確保制附片回陽救逆、強心升壓的藥效作用，以105℃濕熱蒸制附片為佳。

．不同炮制方法所得制附片中生物堿含量的比較實驗

3.1  不同炮制方法與制附片樣品制備

新鮮生附子，除去母根、須根及泥沙，洗凈，切片（0.3-0.5cm），曬干，即為生附片；取生附片置烘箱中于200 ℃烘制20 min，即為附子炮制成品Ⅰ。另取生附片用pH 11.5的堿水充分浸潤，浸潤過程中附片的吸液量控制在0.25-0.5ml/g，浸潤后采用高溫高壓設(shè)備于210℃熱處理20min，隨后置于真空度為0.090MPa、85℃烘制6h，即得附子炮制成品Ⅱ。再取生附片置水中泡24小時，取出陰干，置烘箱中于200℃烘制20 min，即得附子炮制成品Ⅲ。上述新鮮生附子切片后直接采用105±3 ℃濕熱高壓蒸制60 min，再曬干，即為濕熱蒸制附片。

6種酯型生物堿和總生物的含量測定

按上述方法和藥典方法分別測定生附片、附子炮制成品Ⅰ～Ⅲ、濕熱蒸制附片中6種酯型生物堿和總生物的含量，結(jié)果見表3。

表3   6種酯型生物堿含量（10-5 g·g-1）和總生物堿的含量（10-3 g·g-1）測定結(jié)果

附片樣品 苯甲酰新烏頭堿 苯甲酰烏頭堿 苯甲酰次烏頭堿 新烏頭堿 次烏頭堿 烏頭堿 單酯型生物堿總量 雙酯型生物堿總量 總生物堿含量 生附片 5.45 1.27 2.11 41.9 154.6 7.25 8.83 203.75 127.4 炮制成品Ⅰ 31.4 8.49 30.3 — 7.17 — 70.19 7.17 103.5 炮制成品Ⅱ — — 3.82 — — — 3.82 — 95.8 炮制成品Ⅲ 22.3 6.05 21.9 — 4.31 — 50.25 5.31 78.1 濕熱蒸制附片 34.7 6.14 23.5 — 1.96 — 63.44 1.96 105.6

注：— 未檢出

3.3  結(jié)論  由表3可見，附子炮制成品Ⅱ不符合藥典規(guī)定，附子炮制成品Ⅲ單酯型生物堿和總生物損失嚴重，綜合評價以附子炮制成品Ⅰ和濕熱蒸制附片為佳。