ELISA試劑盒是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。 在檢測時,受檢標(biāo)本(測定其中的抗原)與固相載體表面的抗體反應(yīng)。洗滌后加入酶標(biāo)記的抗體,通過反應(yīng)結(jié)合在固相載體上。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。 1. 要留意防止呈現(xiàn)嚴(yán)峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類似過氧化物的活性,因而,在以HRP為符號酶的ELISA測定中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很簡單在溫育過程中吸附于固相,然后與后邊參加的HRP底物反應(yīng)顯色。 2. 冰凍保存的血清標(biāo)本須留意防止因停電等形成的重復(fù)凍融。標(biāo)本的重復(fù)凍融所發(fā)生的機械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分子發(fā)生損壞效果,然后引起假陰性結(jié)果。此外,凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)留意,不要進行劇烈振蕩,重復(fù)倒置混勻即可。 3. 標(biāo)本在保存中如呈現(xiàn)細(xì)菌污染所造成的的混濁或絮狀物時,應(yīng)離心沉積后取上清檢測。 4. 樣本的收集及血清別離中要留意盡量防止細(xì)菌污染,一則細(xì)菌的成長,其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白發(fā)生分化效果;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作符號的測定方法發(fā)生非特異性攪擾。 5. 血清標(biāo)本如是以無菌操作別離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則主張冰凍保存。樣本的長期保存,應(yīng)在-70℃以下。 好了,上述是ELISA試劑盒檢測血清的詳細(xì)留意事項介紹這里,大家在用ELISA檢測血清時,要留意上述注意事項,保證實驗的準(zhǔn)確性。 |
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