無菌藥生產(chǎn)過程中，尤其對(duì)于非終端滅菌產(chǎn)品，主要依靠除菌過濾和無菌生產(chǎn)工藝來達(dá)到無菌控制要求。各個(gè)監(jiān)管機(jī)構(gòu)頒布的GMP指南都要求進(jìn)行藥品生產(chǎn)的工藝驗(yàn)證，以證明所使用的過濾器能達(dá)到既定的使用要求。小編就《除菌過濾技術(shù)及應(yīng)用指南》之除菌過濾驗(yàn)證做一個(gè)簡(jiǎn)單的要點(diǎn)解讀。

為指導(dǎo)和規(guī)范除菌過濾技術(shù)在無菌藥品生產(chǎn)中的應(yīng)用，保證無菌藥品的安全、有效和質(zhì)量穩(wěn)定，依據(jù)《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂）》及附錄，制定本指南。

本指南中的除菌過濾是指采用物理截留的方法去除液體或氣體中的微生物，以達(dá)到無菌藥品相關(guān)質(zhì)量要求的過程。

本指南包括除菌過濾系統(tǒng)的設(shè)計(jì)、選擇、驗(yàn)證、使用等內(nèi)容，適用于無菌藥品從工藝開發(fā)到上市生產(chǎn)的整個(gè)生命周期。

除菌過濾驗(yàn)證包含除菌過濾器本身的性能確認(rèn)和過濾工藝驗(yàn)證兩部分。除菌過濾器性能確認(rèn)和過濾工藝驗(yàn)證，兩者很難互相替代，應(yīng)獨(dú)立完成。

除菌過濾器本身的性能確認(rèn)一般由過濾器生產(chǎn)商完成；除菌過濾工藝驗(yàn)證可以由過濾器的使用者或委托試驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)（例如：過濾器的生產(chǎn)者或第三方試驗(yàn)室）完成，但過濾器使用者應(yīng)最終保證實(shí)際生產(chǎn)過程中操作參數(shù)和允許的極值在驗(yàn)證時(shí)已被覆蓋，并有相應(yīng)證明文件。

1. 不同過濾器生產(chǎn)商的驗(yàn)證文件一般是不能相互替代的，同一生產(chǎn)商的同一材質(zhì)的除菌過濾驗(yàn)證文件往往也不能直接互換，除非有合理的聲明或文件支持。

2. 如果在生產(chǎn)過程中有兩個(gè)或以上不同生產(chǎn)商提供同一材質(zhì)或者不同材質(zhì)的過濾器，或同一生產(chǎn)商的同一材質(zhì)（不同的成膜工藝）的過濾器，驗(yàn)證應(yīng)該分別進(jìn)行。這是因?yàn)橛锌赡艹赡すに嚥煌砑觿┎煌?，膜的結(jié)構(gòu)可能并不完全相同。

細(xì)菌截留試驗(yàn)的研究目的是模擬實(shí)際生產(chǎn)過濾工藝中的最差條件（解讀：過濾溫度相對(duì)越高，過濾時(shí)間越長(zhǎng)，批量越大，壓差越高越是最差條件），過濾含有一定量挑戰(zhàn)微生物的產(chǎn)品溶液或者產(chǎn)品替代溶液，以確認(rèn)除菌過濾器的微生物截留能力。

在進(jìn)行細(xì)菌截留試驗(yàn)測(cè)試前，活度實(shí)驗(yàn)（生存性實(shí)驗(yàn)），確認(rèn)挑戰(zhàn)微生物于工藝條件下在藥品中的存活情況，以確定合理的細(xì)菌挑戰(zhàn)方法。

細(xì)菌挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證策略決策樹

1. 缺陷型假單胞菌是除菌過濾驗(yàn)證中細(xì)菌截留試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)挑戰(zhàn)微生物。（選用缺陷型假單胞菌作為標(biāo)準(zhǔn)挑戰(zhàn)微生物原因：a.它是水源性的革蘭氏陰性菌，對(duì)于藥品生產(chǎn)過程中可能的污染菌有廣泛的代表性；b.該細(xì)菌尺寸非常小，直徑大約為0.3~0.4μm，長(zhǎng)度0.6~1.0μm；c.不致病且能相對(duì)穩(wěn)定地產(chǎn)生大小和形態(tài)可重現(xiàn)的單細(xì)胞菌群）

2. 微生物截留試驗(yàn)通常包括三個(gè)批次，其中至少應(yīng)有一個(gè)批次為低起泡點(diǎn)（低規(guī)格）濾膜。（解讀：三個(gè)批次中，其中2個(gè)批次為隨機(jī)選取的商業(yè)化的正常規(guī)格濾膜，第3個(gè)批次即低起泡點(diǎn)濾膜是專門生產(chǎn)的接近起泡點(diǎn)限值的濾膜，其生產(chǎn)工藝與正常規(guī)格略有差異，代表濾膜的“最差條件”。）

3. 低泡點(diǎn)要求：接近標(biāo)準(zhǔn)泡點(diǎn)值10%范圍內(nèi)。（例如，假設(shè)某過濾器，供應(yīng)商提供的標(biāo)準(zhǔn)起泡點(diǎn)值為50psi, 低泡點(diǎn)膜的起泡點(diǎn)通常在50-55psi之間。泡點(diǎn)值越低，越能代表最差條件。）

4. 如果在驗(yàn)證中沒有使用低起泡點(diǎn)濾膜，那么在實(shí)際生產(chǎn)中所使用的標(biāo)準(zhǔn)溶液濾膜/芯起泡點(diǎn)值，必須高于驗(yàn)證試驗(yàn)中實(shí)際使用的濾膜的最小起泡點(diǎn)值。

5. 設(shè)置一個(gè)0.45um平行對(duì)照。（解讀：0.45μm為了排除實(shí)驗(yàn)菌的影響因素，如果0.45μm過濾下游無菌，則此實(shí)驗(yàn)菌不符合要求。）

6. 應(yīng)盡可能將挑戰(zhàn)微生物直接接種在藥品中進(jìn)行細(xì)菌挑戰(zhàn)。

7. 如果使用替代溶液進(jìn)行試驗(yàn)，需要提供合理的數(shù)據(jù)和解釋。

8. 對(duì)于同一族產(chǎn)品，即具有相同組分而不同濃度的產(chǎn)品，可以用挑戰(zhàn)極限濃度的方法進(jìn)行驗(yàn)證。（解讀：對(duì)于細(xì)菌挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)，影響因素比較復(fù)雜，既有產(chǎn)品對(duì)膜的影響，也有產(chǎn)品對(duì)細(xì)菌大小形態(tài)的影響。所以通常有高中低相同組分不同濃度的產(chǎn)品，通常建議挑戰(zhàn)最高和最低的濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。）

可提取物：是指通過使用模擬的或更加苛刻的作用力（例如，溶劑、溫度或時(shí)間）可能會(huì)從接觸表面萃取的化學(xué)成分。在模擬溶劑和“最差”條件下確定。（解讀：模型溶劑的選擇、滅菌條件參數(shù)、過濾最高溫度、接觸最長(zhǎng)時(shí)間等最差條件。）

浸出物：在實(shí)際工藝條件下，從任一產(chǎn)品接觸材料或組件向工藝流體中遷移的、并可能存在于終產(chǎn)品中的化學(xué)物質(zhì)及元素。浸出物通常是可提取物的子集，也可能是可提取物的反應(yīng)產(chǎn)物或降解產(chǎn)物。

可提取物和浸出物測(cè)試驗(yàn)證策略決策樹

1. 應(yīng)先獲得最差條件下的可提取物數(shù)據(jù)，將其用于藥品的安全性評(píng)估?？商崛∥锓从沉私鑫锏淖畲罂赡埽瑹o論是否要做浸出物試驗(yàn)，可提取物的測(cè)試和評(píng)估都非常重要。（解讀：可提取物是一定要做的，浸出物可以根據(jù)可提取物的測(cè)試和評(píng)估其風(fēng)險(xiǎn)，如果當(dāng)風(fēng)險(xiǎn)不可忽略時(shí)，浸出物的測(cè)試也是不可避免的。）

2. 用于測(cè)試的模型溶劑應(yīng)能夠模擬實(shí)際的藥品處方，同時(shí)與過濾器不應(yīng)有化學(xué)兼容性方面的問題。通常應(yīng)具有與產(chǎn)品相同或相似的理化性質(zhì)，如pH值、極性或離子強(qiáng)度等。（解讀：根據(jù)配方中的理化性質(zhì)(pH，有機(jī)溶質(zhì)/溶劑)和占比選擇模型溶劑，通常所選模型溶劑提取能力比實(shí)際配方更強(qiáng)。）

3. 使用最長(zhǎng)過濾時(shí)間、最高過濾溫度、最多次蒸汽滅菌循環(huán)、增加伽瑪輻射的次數(shù)和劑量都可能會(huì)增加可提取物水平。（解讀：可提取物的檢測(cè)影響因素比較多，平行對(duì)比測(cè)試的條件需要保持一致。）

4. 可提取物試驗(yàn)應(yīng)使用滅菌后的濾器來完成。用于試驗(yàn)的過濾器盡量不進(jìn)行預(yù)沖洗。

5. 可提取物和浸出物的檢測(cè)需要采用定性和定量結(jié)合的方法。

6. 在完成可提取物或者浸出物試驗(yàn)后，應(yīng)針對(duì)過濾器可提取物或浸出物的種類和含量，結(jié)合藥品最終劑型中的濃度、劑量大小、給藥時(shí)間、給藥途徑等對(duì)結(jié)果進(jìn)行安全性評(píng)估，以評(píng)估可提取物和浸出物是否存在安全性風(fēng)險(xiǎn)。

化學(xué)兼容性試驗(yàn)的研究目的：用來評(píng)估在特定工藝條件下，待過濾介質(zhì)對(duì)過濾裝置的化學(xué)影響。

化學(xué)兼容性驗(yàn)證策略決策樹

1. 化學(xué)兼容性試驗(yàn)應(yīng)涵蓋整個(gè)過濾裝置，不只是濾膜。（解讀：除了濾膜，其外殼骨架、密封圈、支撐導(dǎo)流層均需要考慮。）

2. 應(yīng)考慮率最差工藝條件（過濾流速、接觸時(shí)間和溫度等）。

3. 化學(xué)兼容性試驗(yàn)檢測(cè)項(xiàng)目一般包括：過濾器接觸待過濾介質(zhì)前后的目視檢查；過濾過程中流速變化；濾膜重量/厚度的變化；過濾前后起泡點(diǎn)等完整性測(cè)試數(shù)值的變化；濾膜拉伸強(qiáng)度的變化；濾膜電鏡掃描確認(rèn)等。

1. 待過濾介質(zhì)中的某些成分粘附在濾器上的過程，可能影響待過濾介質(zhì)的組成和濃度。（解讀：吸附實(shí)驗(yàn)的目的就是考察濾膜或?yàn)V芯是否會(huì)帶走藥液中的關(guān)鍵成分，從而影響最終產(chǎn)品的質(zhì)量。）

2. 過濾器中吸附性的材料包括濾膜、外殼和支撐性材料。流速、過濾時(shí)間、待過濾介質(zhì)濃度、防腐劑濃度、溫度和pH值等因素都可能影響吸附效果。（解讀：通常情況下，吸附實(shí)驗(yàn)通常分兩個(gè)階段，第一階段是在實(shí)驗(yàn)室縮小規(guī)模下來確認(rèn)過濾器對(duì)介質(zhì)的吸附程度，第二階段是在放大或者生產(chǎn)規(guī)模下做進(jìn)一步確認(rèn)。）

實(shí)驗(yàn)室縮小規(guī)模下流程圖

1. 應(yīng)明確過濾器使用后完整性測(cè)試的潤(rùn)濕介質(zhì)。

2. 如果采用的潤(rùn)濕介質(zhì)為藥液，則應(yīng)進(jìn)行產(chǎn)品相關(guān)完整性標(biāo)準(zhǔn)的驗(yàn)證以支持該標(biāo)準(zhǔn)的確定。

3. 實(shí)驗(yàn)室規(guī)模下按比例縮小的研究是產(chǎn)品完整性試驗(yàn)的第一部分。第二部分是在實(shí)際工藝條件下定期監(jiān)測(cè)產(chǎn)品起泡點(diǎn)或者產(chǎn)品擴(kuò)散流的趨勢(shì)，作為驗(yàn)證的一部分。

解讀：完整性測(cè)試不同法規(guī)要求見下表格：