國(guó)自然的前期“工作基礎(chǔ)”部分，也是國(guó)自然項(xiàng)目判斷延續(xù)性最重要的部分。

需要注意的是，該部分有兩個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)：

• 與本項(xiàng)目相關(guān)的研究工作積累

• 已取得的研究工作成績(jī)

那么我們就今年審閱的幾百份標(biāo)書，總結(jié)出來(lái)的“工作基礎(chǔ)”問(wèn)題給大家陳述一下：

（一）預(yù)實(shí)驗(yàn)體量不足

這個(gè)問(wèn)題最為突出，可想而知，本身作為臨床醫(yī)生，科研只是附帶做做，哪有精力跟大家一起“卷”，所以最后形成的本子中的預(yù)實(shí)驗(yàn)，往往只有大量的“生信圖”和少量的柱狀圖、WB結(jié)果。

而除了精力問(wèn)題導(dǎo)致預(yù)實(shí)驗(yàn)不足以外，還有一個(gè)認(rèn)知問(wèn)題也很嚴(yán)重，就是申請(qǐng)人設(shè)計(jì)的國(guó)自然假說(shuō)太簡(jiǎn)單導(dǎo)致，殊不知?jiǎng)e人的本子不僅思路“卷”、預(yù)實(shí)驗(yàn)也“卷”，所以這就導(dǎo)致“瞎子摸象”的困局，始終摸不到國(guó)自然的“真象”，那么距離國(guó)自然中標(biāo)也就十分遙遠(yuǎn)。

為什么預(yù)實(shí)驗(yàn)要足夠多？①專家挑刺時(shí)，不會(huì)以證據(jù)鏈不足秒殺你；②預(yù)實(shí)驗(yàn)多可以彌補(bǔ)一下“文章不夠好”的短板；③預(yù)實(shí)驗(yàn)多，證明你花了很多經(jīng)費(fèi)，那你并不是白嫖的態(tài)度來(lái)對(duì)待國(guó)自然，專家也能看到你的努力。

有些童鞋會(huì)問(wèn)：會(huì)不會(huì)因?yàn)轭A(yù)實(shí)驗(yàn)多，專家覺(jué)得你都做完了而不予資助？

既然國(guó)自然本子包含多方面顧慮，存在各種心理維度的博弈，青椒哥在面對(duì)這個(gè)問(wèn)題時(shí)，更愿意相信專家喜歡“預(yù)實(shí)驗(yàn)充足”的本子。

兩害相權(quán)取其輕，永遠(yuǎn)是國(guó)自然本子的正解。

所以預(yù)實(shí)驗(yàn)應(yīng)該包括3-4張組圖：

①　第一張：證明你的細(xì)胞系和動(dòng)物模型，成功；

②　第二張：生信分析、分子信號(hào)軸關(guān)鍵分子和臨床問(wèn)題的相關(guān)性，驗(yàn)證關(guān)鍵分子在臨床樣本、細(xì)胞系和動(dòng)物模型中的表達(dá)趨勢(shì)；

③　第三張：過(guò)表達(dá)或者沉默干預(yù)后，觀察細(xì)胞和動(dòng)物模型的表型，檢測(cè)一下XXX通路的激活情況；

④　第四張：數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)以及分子對(duì)接分析；加一個(gè)分子互作的實(shí)驗(yàn)圖，證明分子機(jī)制的假說(shuō)成立。

（二）圖注（legend）不詳實(shí)、預(yù)實(shí)驗(yàn)圖模糊不清

字面意思，就是圖注缺失，或者描述過(guò)于粗糙，沒(méi)有介紹單圖的實(shí)驗(yàn)方法和分組情況。    

而有些童鞋的預(yù)實(shí)驗(yàn)圖非常模糊，圖像像素極低，這又不利于專家審閱，不美觀

（三）對(duì)照組缺失

對(duì)照組包括空白對(duì)照、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照，但一般來(lái)講，至少要有陰性對(duì)照，空白對(duì)照可以忽略。陽(yáng)性對(duì)照大部分情況不是必須的，但是藥物實(shí)驗(yàn)中陽(yáng)性對(duì)照卻是必須的。

而過(guò)表達(dá)和敲低這種實(shí)驗(yàn)，陰性對(duì)照組一定需要，切不可省略。一般用“空白質(zhì)?！薄皊crambles”“sh-NC”“si-NC”“Mock”作為陰性對(duì)照組。

（四）內(nèi)參前后文不一致

全細(xì)胞WB內(nèi)參一般有GAPDH、β-actin、β-tubulin等，但有時(shí)候因?yàn)榇碜鲗儆谠鐜啄臧l(fā)表的，所以和現(xiàn)在預(yù)實(shí)驗(yàn)之間的內(nèi)參可能會(huì)存在差異，這種都可以理解，但最好是內(nèi)參保持一致。但有時(shí)候同一批預(yù)實(shí)驗(yàn)中內(nèi)參也有不一致的情況，還望前后保持一致。

（五）沒(méi)有統(tǒng)計(jì)顯著性標(biāo)注

預(yù)實(shí)驗(yàn)按理來(lái)講都是要做到技術(shù)性重復(fù)和生物學(xué)重復(fù)，因此每個(gè)實(shí)驗(yàn)務(wù)必形成一個(gè)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果，并且附帶顯著性標(biāo)注“***”“ns（不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義）”等。

當(dāng)然如果預(yù)實(shí)驗(yàn)太多，可以選擇性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

（六）WB條帶背景不均一或者分子量（kDa）沒(méi)標(biāo)注

有些WB看起來(lái)比較假，因?yàn)楸尘安痪猓痪?，像是不同?shí)驗(yàn)條件下產(chǎn)生的，而且有時(shí)候單圖的邊緣有明顯的的切割的痕跡。

另外一個(gè)經(jīng)常出現(xiàn)的問(wèn)題就是：WB結(jié)果不標(biāo)注分子量。這不是一個(gè)特別規(guī)范的學(xué)術(shù)行為。

（七）分子機(jī)制的結(jié)果缺失

分子機(jī)制的證據(jù)鏈往往成本很高，畢竟CO-IP、pulldown、ChIP、熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)等的成本不低，而且往往做了也不一定有陽(yáng)性結(jié)果，所以很多本子并沒(méi)有放分子機(jī)制的預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖，這也是很多國(guó)自然本子的通病之一。解決方案就是用數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)、motif預(yù)測(cè)、各種炫酷的分子對(duì)接分析來(lái)彌補(bǔ)了。

（八）腫瘤本子預(yù)實(shí)驗(yàn)只有一株細(xì)胞系

強(qiáng)烈建議腫瘤類的本子，預(yù)實(shí)驗(yàn)中最好使用兩株細(xì)胞系做功能實(shí)驗(yàn)，并且腫瘤類的本子一定含有體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。

（九）已取得工作成績(jī)部分

已取得工作成績(jī)部分要簡(jiǎn)明扼要，一般的格式是

• 一段話介紹一下自己的科研經(jīng)歷，可以提一下自己的大牛導(dǎo)師；

• 然后列出自己的代表作文章，并標(biāo)注一下作者位次以及中科院分區(qū)；

• 挑2-3篇文章，把重要的實(shí)驗(yàn)結(jié)論（或者文章的機(jī)制圖）放一張出來(lái)，簡(jiǎn)單描述一下

而有些童鞋，把各種實(shí)驗(yàn)圖都抖出來(lái)，羅列出10-20張小圖，光圖片的序號(hào)都排到了10幾，這樣的閱讀感受非常不好，專家讀著累，打分不會(huì)太高。