微綠球藻(Nannochloropsisoculata),也稱眼點(diǎn)擬微球藻,屬于綠藻門綠藻綱四孢藻目膠球藻科微綠球藻屬,是一種海洋單細(xì)胞餌料微藻。微綠球藻細(xì)胞營養(yǎng)豐富,繁殖迅速,容易培養(yǎng),常作為水產(chǎn)動物人工育苗的優(yōu)質(zhì)餌料。目前微綠球藻已經(jīng)應(yīng)用于刺參(Stichopus japonicus)、合浦珠母貝(Pinctada fucata)、羅氏沼蝦(Macrobrachiumrosenbergii)、中華絨螯蟹(Spirulinaplatensis)等水產(chǎn)動物的育苗及輪蟲培養(yǎng),應(yīng)用效果均較好。

微綠球藻（Nannochloropsis oculata）作為一種單細(xì)胞藻類，具有易培養(yǎng)、繁殖迅速的特點(diǎn)，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中應(yīng)用較為廣泛。

多用于培養(yǎng)輪蟲等動物性生物餌料及親貝，在河蟹育苗中應(yīng)用也獲得良好的效 果。

有關(guān)營養(yǎng)鹽濃度及氮源對微綠球藻的生長及營養(yǎng)組成的影響已有報道。

一般認(rèn)為微綠球藻在有機(jī)質(zhì)多，特別是在氮肥多、銨鹽豐富的水體中生長特別繁茂，但對微綠球藻培養(yǎng)水體中氮磷水平的變化尚未見報道。

本文測定了不同營養(yǎng)鹽濃度下微綠球藻的生長及生長過程培養(yǎng)水體中三態(tài)氮（氨氮、亞硝酸氮和硝酸氮）和可溶性磷酸鹽的變化。

1 材料與方法

1.1 微綠球藻的培養(yǎng)

試驗(yàn)用微綠球藻藻種取自上海水產(chǎn)大學(xué)漁業(yè)學(xué)院藻種室。

試驗(yàn)在浙江平湖水產(chǎn)試驗(yàn)場單胞藻培養(yǎng)室中進(jìn)行。藻種經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)后，接種到五面貼有白色瓷磚的單胞藻培養(yǎng)池（規(guī)格為 250cm × 120cm × 50cm）中進(jìn)行一次性培養(yǎng)。接種濃度約為

。

培養(yǎng)用水為經(jīng)雙層 300 目篩絹過濾，并經(jīng)有效氯濃度為 20ppm 的漂白粉消毒的天然河口水（鹽度約為 10），培養(yǎng)過程中連續(xù)充氣，水溫 17. 4 ~ 20.1℃，室內(nèi)自然光照。

培養(yǎng)所采用的基本配方為 f / 2 配方，其主要成分為

74. 8mg，

4.4mg，

3.9mg，（五水檸檬酸鐵）培養(yǎng)液中營養(yǎng)鹽濃度設(shè) 3 個水平，分別為 1 倍、2 倍、3 倍 f / 2 配方的營養(yǎng)鹽濃度（以下分別稱為濃度組 1，濃度組 2，濃度組 3），每水平平行 2 組。

1.2 指標(biāo)的測定及方法

用三角燒瓶培養(yǎng)高濃度的微綠球藻藻液（約

），稀釋成一定的濃度梯度后用分光光度計（650nm）測定光密度值，制作工作曲線。

培養(yǎng)過程中每天上午定時用分光光度計（650nm）測出 各培養(yǎng)池中的相應(yīng)的藻細(xì)胞濃度，下午定時測定經(jīng) 0. 45μm 濾膜過濾的培養(yǎng)水體中的三態(tài)氮和磷酸鹽濃度。

含量采用鋅鎘還原 - 重氮偶氮法測定；

含量采用重氮偶氮法測定，

含量用 Wattenberg 法測定［4］；

含量用磷鉬藍(lán)法測定。

2 結(jié)果

2.1不同營養(yǎng)鹽濃度對微綠球藻生長的影響

圖 1 為不同營養(yǎng)鹽濃度組微綠球藻的指數(shù)生長 回歸曲線。從圖及回歸方程的相對生長常數(shù)可知，微綠球藻在濃度組 2 的培養(yǎng)水體中生長最快，在濃度組 3 的培養(yǎng)水體中的生長與在濃度組 1 的培養(yǎng)水體 中生長差異小。

對相對生長常數(shù)進(jìn)行方差分析結(jié)果表明，不同濃度的營養(yǎng)鹽對微綠球藻的相對生長常數(shù)有顯著影響（p < 0.05），濃度組 2 與濃度組 1 之間的差異顯著，而濃度組 1 與濃度組 3 之間的差異不顯著，濃度組 2與濃度組3之間的差異也不顯著。

2.2 添加不同營養(yǎng)鹽濃度微綠球藻培養(yǎng)池中三態(tài)氮的變化

表 1 為不同營養(yǎng)鹽濃度組培養(yǎng)池中三態(tài)氮的初始含量及在培養(yǎng)過程中的變化。

從表 1 可知，在微綠球藻培養(yǎng)過程中，水體的

含量持續(xù)下降，但下降量隨添加的營養(yǎng)鹽濃度 增加而加大。

在 6 天的培養(yǎng)過程中，濃度組 3 的培養(yǎng)池中，水體的

含量下降了 14. 6225mg / L；而 濃度組 1 的培養(yǎng)池中，

含量僅下降了 5. 6495mg / L。

而

的含量在培養(yǎng)過程中呈現(xiàn)出先降 后升的變化態(tài)勢，添加不同營養(yǎng)鹽水平對微綠球藻培養(yǎng)池中

的絕對含量影響不大。

添加不同營養(yǎng)鹽濃度的微綠球藻培養(yǎng)池中，

含量及變化趨勢無明顯差異，經(jīng) 6 天的培養(yǎng)，

含量的下降 范圍為 0.2985 ~ 0.3875mg / L，在前二天

含量下降明顯，第四天后含量趨于穩(wěn)定。

從三態(tài)氮的變化情況看，隨培養(yǎng)時間的延長，水體中三態(tài)氮總含量逐漸下降，添加營養(yǎng)鹽濃度越高，三態(tài)氮總量的下降也越多，濃度組 1 下降量為 5.9275mg / L，而濃度組 3 下降量為 15.9795mg / L。

從表 1 也可以看出，濃度組 1、2、3 實(shí)驗(yàn)條件下，生產(chǎn)相同產(chǎn)量（107Cells）的微綠球藻需要消耗的氮分別為 0. 0232、0. 0339、0. 0611mg， 即高濃度營養(yǎng)鹽濃度條件下生產(chǎn)單位產(chǎn)量的微綠球藻需要消耗更多的氮肥。

2.3 不同營養(yǎng)鹽濃水平下微綠球藻培養(yǎng)池中磷的變化

表 2 為添加不同營養(yǎng)鹽濃度微綠球藻培養(yǎng)池中磷的變化情況。

隨培養(yǎng)時間的延長，培養(yǎng)池中的磷含量逐漸降低，降低值與添加的營養(yǎng)鹽濃度相關(guān)，添加的營養(yǎng)鹽濃度越高，培養(yǎng)水體中的磷含量變化也越大。

2.4 不同營養(yǎng)鹽濃度下微綠球藻培養(yǎng)池中可溶性總氮和可溶性磷比值的變化

表 3 列出了微綠球藻在不同營養(yǎng)鹽濃度組的培養(yǎng)后，培養(yǎng)水體中可溶性總氮和可溶性磷比值 （DTN/ DP）的變化。濃度組 1，比值變化大；濃度組 2，變化最小。

3 討論

f / 2 配方是單細(xì)胞藻類培養(yǎng)的常用配方，廣泛應(yīng)用于多種藻類的培養(yǎng)。

由試驗(yàn)結(jié)果可知，微綠球藻在 2 倍 f / 2 配方的營養(yǎng)鹽濃度下生長最快。

但總體上三種營養(yǎng)鹽水平下微綠球藻的生長較 易翠萍等報道的緩慢，這可能與培養(yǎng)條件和接種濃度偏低有關(guān)。

已知營養(yǎng)鹽的形式和水平對微藻的營養(yǎng)價值有影響。易翠萍等報道了氮源及其水平對微綠球藻的脂肪及脂肪酸組成有影響。

周洪琪等認(rèn)為氮水平會影響三角褐指藻和牟氏角毛藻的脂肪及脂肪酸組成。

鄭愛榕等認(rèn)為銨的積累會抑制藻類氨基酸的合成。馮偉民等報道了氮的缺乏會降低螺旋藻的蛋白質(zhì)含量。

本試驗(yàn)中，生產(chǎn)單位產(chǎn)量的微綠球藻所消耗的氮量隨培養(yǎng)液中氮磷添加水平的增加而增大（見表 1）。

究其原因可能有：

① 在高氮磷的營養(yǎng)水平下培養(yǎng)的微綠球藻含有較高的粗蛋白；

② 在生產(chǎn)性培養(yǎng)條件下，藻液中的其他微生物利用了培養(yǎng)液中的部分氮肥。

浮游植物利用可溶性無機(jī)氮的能力，一般是

>

>

，

一般不被植物直接所利用，同時不同藻類對

、

的吸收具有選擇性。

徐寧等認(rèn)為細(xì)弱海鏈藻選擇吸收

，而對

吸收不明顯，裸甲藻優(yōu)先吸收

，同時也少量吸收

，角毛藻主要吸收

，而對

則無明顯吸收。

從本試驗(yàn)的結(jié)果看，微綠球藻主要吸收

，水體中

含量略有升高，可能是不吸收

，同時在充氣培養(yǎng)條件下，水體中的

氧化成

所致。

由 此可見，把微綠球藻應(yīng)用于生活污水或養(yǎng)殖廢水的處理可有效的去除

和部分的

，同時可重新利用于養(yǎng)殖生產(chǎn)。

DTN/ DP 比值在一定程度上可表明藻類培養(yǎng)過程中水體的營養(yǎng)狀況，是藻類受氮、磷限制的重要指標(biāo)，高的 DTN/ DP 比值意味磷的限制。

在不同營養(yǎng)鹽水平下，微綠球藻培養(yǎng)后水體中的氮磷比均比培養(yǎng)前水體中的氮磷比大（表 3），說明隨著微綠球藻培養(yǎng)的進(jìn)行，水體中的磷元素相對與氮元素，正逐漸成為微綠球藻進(jìn)一步生長的限制因子。

從培養(yǎng)前后氮磷比變化的方差大小，也反映出濃度組 2 的培養(yǎng)水體中的氮磷比更接近微綠球藻在現(xiàn)有培養(yǎng)條件下的氮磷比的實(shí)際需求。

從生長情況也可證實(shí)濃度組 2 更適合微綠球藻的實(shí)際需求，其生長也最快。

在池塘中培養(yǎng)浮游生物時，氮、磷酸、氧化鉀的施放比例以2∶2∶1為好。

例如，在對一口20畝的池塘進(jìn)行施肥時，同時一次性施用氮、磷、鉀混合肥，其中所用氮肥為硫酸銨，含氮（N）20%，磷肥為過磷酸鈣，含磷酸（P2O5）17%，鉀肥為硫酸鉀，含氧化鉀（K2O）33%。它們的用量可按下述方法計算：

按N∶P2O5∶K2O為2∶2∶1配合時，需：

硫酸銨的比例是2×100/20=10

過磷酸鈣的比例是2×100/17=11.8

硫酸鉀的比例是1×100/33=3.03

三者合計：24.83

如每畝池塘施用上述混合肥料7千克，它們的各自的用量為：

硫酸銨（氮肥）用量為10×7千克/24.83=2.8千克

過磷酸鈣（磷肥）用量為11.8×7千克/24.83=3.3千克

硫酸鉀（鉀肥）用量為3.03×7千克/24.83=0.9千克

那么整個20畝的池塘總施肥量為混合肥料7千克×20=140千克，它們的各自的用量為：

硫酸銨（氮肥）用量為2.8千克×20=56千克

過磷酸鈣（磷肥）用量為3.3千克×20=66千克

硫酸鉀（鉀肥）用量為0.9千克×20=18千克