小鼠CSDS模型的建立及檢測(cè)方法

一. CSDS模型的定義

CSDS的全稱是chronic social defeated stress，又稱慢性社會(huì)挫敗應(yīng)激模型，是一種用來(lái)制作動(dòng)物抑郁模型的方法

二. CSDS模型的造模方法

該部分實(shí)驗(yàn)內(nèi)容是參照了有關(guān)文獻(xiàn)。首先根據(jù)需要選取一定數(shù)量的CD 1小鼠作為攻擊性小鼠，在正式實(shí)驗(yàn)前2-3周開(kāi)始對(duì)其攻擊性進(jìn)行篩選。具體方法就是:每個(gè)飼養(yǎng)籠中飼養(yǎng)雄性和雌性兩只周齡相近的CD1小鼠，一定時(shí)間內(nèi)讓CD1雄性小鼠產(chǎn)生領(lǐng)地意識(shí)；1周以后，將配對(duì)飼養(yǎng)的雌鼠分離出飼養(yǎng)籠，隨機(jī)放入一只陌生的C57小鼠作為領(lǐng)地入侵者，如果CD1雄性小鼠在1 min之內(nèi)就開(kāi)始對(duì)C57小鼠發(fā)動(dòng)攻擊，那么該CD1小鼠則被視為攻擊性CD1小鼠。運(yùn)用同樣的方法篩選出所有需要的攻擊性雄性CD1小鼠。正式實(shí)驗(yàn)前，選取雄性C57小鼠(7周)，隨機(jī)分配成正常組和應(yīng)激組，每組10只，對(duì)照組每2只一籠，其余均單籠飼養(yǎng)，給正常飲食飲水一周充分適應(yīng)環(huán)境。當(dāng)實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，提前分離CD1雌鼠，取模型組C57小鼠一只，直接放入陌生雄性CD1小鼠（8-9周）飼養(yǎng)籠中，使C57小鼠遭受雄性CD1小鼠持續(xù)性攻擊約5-10 min;然后將兩只小鼠用帶有密集小孔的透明塑料隔板隔開(kāi)，使兩只小鼠彼此仍能互視和聞嗅但是無(wú)法接觸，運(yùn)用這種方法持續(xù)到下次進(jìn)行攻擊前為止，完成該過(guò)程后即為第一天應(yīng)激。第二天再將該C57鼠放入另一不同的CD1雄性鼠的籠中，使C57小鼠受到相同程度的應(yīng)激;第三天再放入第三只CD1雄性鼠的籠中，同樣使C57小鼠受到同樣程度的應(yīng)激。如此連續(xù)應(yīng)激10天，并保證每天同一只C57小鼠受到不同CD1雄性鼠的攻擊。在此期間，對(duì)照組和應(yīng)激組C57小鼠均維持正常飲食飲水，而對(duì)照組則保持2只一籠，每天相互更換接觸不同的小鼠。

三. CSDS模型的檢測(cè)方法

10天連續(xù)應(yīng)激結(jié)束后即開(kāi)始行為學(xué)測(cè)試。常規(guī)的抑郁樣行為檢測(cè)實(shí)驗(yàn)方法有糖水偏好實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)、懸尾實(shí)驗(yàn)、高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)、O迷宮實(shí)驗(yàn)、明暗箱實(shí)驗(yàn)等。這里重點(diǎn)介紹根據(jù)糖水消耗，社會(huì)接觸的行為學(xué)和懸尾測(cè)試的結(jié)果將C57小鼠分為正常組，抑郁敏感組，抑郁非敏感組。

1.糖水偏好實(shí)驗(yàn)

糖水偏好測(cè)試是檢測(cè)抑郁癥快感缺失的經(jīng)典方法。測(cè)試前用自來(lái)水配制好1%蔗糖水，與不含蔗糖的正常自來(lái)水同時(shí)放在C57模型鼠的鼠籠處，保證其自由飲用，同時(shí)提供充足的鼠食，每12h將糖水和白水互換位置，以防止C57模型鼠產(chǎn)生位置偏好。到第三天將所有的水和食物同時(shí)撤走，將C57模型鼠禁食24 h。禁食結(jié)束后分別稱量糖水和白水的重量并記錄，然后將兩瓶水隨機(jī)放在飼養(yǎng)籠上供模型鼠自由飲用，1h后取下兩瓶水分別測(cè)量?jī)善克Ｏ碌闹亓浚?jì)算出糖水消耗重量A和白水消耗重量B，利用公式A/（A+B） X 100%即得到CSDS模型鼠的糖水偏好率。糖水偏好率的值與動(dòng)物的快感程度呈正相關(guān)，其值越小則表明動(dòng)物快感缺失越嚴(yán)重。

2.社會(huì)接觸實(shí)驗(yàn)

    該實(shí)驗(yàn)方法主要用于檢測(cè)小鼠對(duì)陌生目標(biāo)的靠近，探索和躲避行為。正常的嚙齒類(lèi)動(dòng)物是社會(huì)性動(dòng)物，當(dāng)正常鼠與陌生鼠相遇后會(huì)與陌生鼠頻繁接觸;而遭受過(guò)社會(huì)挫敗應(yīng)激的小鼠則會(huì)產(chǎn)生孤立和逃避接觸的行為，該行為一般判定為抑郁樣行為;而相比之下，在一定的時(shí)間內(nèi)，正常鼠在單位時(shí)間內(nèi)與正常鼠接觸的時(shí)間明顯長(zhǎng)于模型鼠在單位時(shí)間內(nèi)與正常鼠接觸的時(shí)間，因此，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)計(jì)算出模型鼠與攻擊鼠接觸的時(shí)間能反應(yīng)出模型鼠的抑郁程度。其具體操作方法是:在敞箱(45 X 45 X 45 cm)一側(cè)的中央放入隔板(10 x 6 cm，底部有密集小孔，用來(lái)放置陌生CD1小鼠)，以中央放置CD1小鼠的區(qū)域?yàn)橹行?，劃出一矩形區(qū)域作為接觸區(qū)域(14 x 26 cm ) }46}。結(jié)果通過(guò)由上海欣軟信息科技有限公司公司提供的VisuTrack軟件進(jìn)行接觸時(shí)間的統(tǒng)計(jì)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)步驟如下:

（1）打開(kāi)軟件和攝像頭后將實(shí)驗(yàn)籠放置到合適的位置，然后進(jìn)行軟件的設(shè)置;

（2）不放入陌生的CD1小鼠，然后放入C57小鼠，然后開(kāi)始計(jì)時(shí)，時(shí)間設(shè)定為2.5 min

    最后得到接觸區(qū)和非接觸區(qū)的累積時(shí)間，此階段為Target absent;

（3）放入陌生的CD1小鼠，然后放入C57小鼠，然后開(kāi)始計(jì)時(shí)，時(shí)間設(shè)定為2.5 min

    最后得到接觸區(qū)和非接觸區(qū)的累積時(shí)間，此階段為Target present;

（4）分別統(tǒng)計(jì)對(duì)照組和模型組的Target absent和Target present的累積時(shí)間，在Target

    absent階段，對(duì)照組和模型鼠無(wú)明顯差異，但是在Target present階段，模型鼠的

接觸時(shí)間明顯降低。

3.懸尾實(shí)驗(yàn)

將高60 cm的架子放置于安靜的實(shí)驗(yàn)環(huán)境中，用夾子夾住小鼠尾巴末端1 cm處，然后將夾子固定在架子上，使其倒吊于架子上，小鼠為克服不正常體位而掙扎活動(dòng)，在此期間采用上海欣軟VisuTrack動(dòng)物行為學(xué)分析軟件記錄小鼠的不動(dòng)時(shí)間?？偣矔r(shí)間為6 min，開(kāi)始1 min為適應(yīng)時(shí)間，隨后5 min為記錄時(shí)間。