Masson三色染色法

選擇固定液很重要

Ⅰ 固定液：甲醛升汞液

⑴流水沖洗，入70%酒精，加碘液脫汞至酒精呈極淺的棕色，5%硫代硫酸鈉（sodium hyposulfite）水溶液去碘，水洗

⑵70%、80%、90%、95%、無(wú)水酒精脫水

⑶二甲苯透明

⑷浸蠟兩次

⑸石蠟包埋

⑹切片8微米以下，貼片，烘干

⑺切片經(jīng)二甲苯脫蠟，經(jīng)各級(jí)酒精下行至蒸餾水

⑻1%地衣紅液染彈性纖維30~60分鐘，蒸餾水洗去多余染料

地衣紅液：80%酒精100毫升，地衣紅（orcein）1克，鹽酸（hydrochloric acid ）1毫升

⑼Weigert蘇木精或明礬蘇木精染細(xì)胞核10~15分鐘，充分水洗

⑽必要時(shí)用鹽酸酒精分色，自來(lái)水洗至切片呈藍(lán)色

⑾麗春紅品紅液染色5~10分鐘，用濾紙沾干

麗春紅品紅液：蒸餾水100毫升，依次溶解：麗春紅（Ponceau S）0.8克，酸性品紅（acid fuchsin）0.4克，冰醋酸(glacial acetic acid)1毫升

⑿0.5%醋酸(acetic acid)水溶液洗30~60秒，蒸餾水略洗

⒀1%磷鉬酸(phosphomolybdic acid hydrate)水溶液分色3~5分鐘至膠原纖維呈淡紅色或無(wú)色、肌纖維紅色

⒁1%醋酸水溶液洗30秒

⒂2%亮綠液染色3~5分鐘

亮綠液：蒸餾水98毫升，亮綠Y(Light green Y) 2克，冰醋酸2毫升

⒃1%醋酸水溶液洗滌

⒄95%酒精和無(wú)水酒精脫水各1分鐘

⒅二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片

結(jié)果：膠原纖維綠色；彈性纖維棕色或深棕色；肌纖維紅色；纖維素紅色；紅細(xì)胞紅色；細(xì)胞核藍(lán)黑色

Ⅱ 固定液：Zenker液

⑴流水沖洗，入70%酒精，加碘液脫汞至酒精呈極淺的棕色，5%硫代硫酸鈉水溶液去碘，水洗

⑵70%、80%、90%、95%、無(wú)水酒精脫水

⑶二甲苯透明

⑷浸蠟兩次

⑸石蠟包埋

⑹切片8微米以下，貼片，烘干

⑺切片經(jīng)二甲苯脫蠟，經(jīng)各級(jí)酒精下行至蒸餾水

⑻1%地衣紅液染彈性纖維30~60分鐘，蒸餾水洗去多余染料

地衣紅液：80%酒精100毫升，地衣紅1克，鹽酸1毫升

⑼Weigert蘇木精或明礬蘇木精染細(xì)胞核10~15分鐘，充分水洗

⑽必要時(shí)用鹽酸酒精分色，自來(lái)水洗至切片呈藍(lán)色

⑾麗春紅品紅液染色5~10分鐘，用濾紙沾干

麗春紅品紅液：蒸餾水100毫升，依次溶解：麗春紅0.8克，酸性品紅0.4克，冰醋酸1毫升

⑿0.5%醋酸水溶液洗30~60秒，蒸餾水略洗

⒀1%磷鉬酸水溶液分色3~5分鐘至膠原纖維呈淡紅色或無(wú)色、肌纖維紅色

⒁1%醋酸水溶液洗30秒

⒂2%亮綠液染色3~5分鐘

亮綠液：蒸餾水98毫升，亮綠Y2克，冰醋酸2毫升

⒃1%醋酸水溶液洗滌

⒄95%酒精和無(wú)水酒精脫水各1分鐘

⒅二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片

結(jié)果：膠原纖維綠色；彈性纖維棕色或深棕色；肌纖維紅色；纖維素紅色；紅細(xì)胞紅色；細(xì)胞核藍(lán)黑色

Ⅲ 固定液：Bouin液

⑴入70~80%酒精浸泡至基本無(wú)黃色（可加少量碳酸鋰幫助脫去黃色）

⑵90%酒精 、95%酒精、無(wú)水酒精脫水

⑶二甲苯透明

⑷浸蠟，包埋，切片小于8微米，粘片，烘干

⑸切片經(jīng)二甲苯脫蠟，經(jīng)各級(jí)酒精下行至蒸餾水

⑹1%地衣紅液染彈性纖維30~60分鐘，蒸餾水洗去多余染料

地衣紅液：80%酒精100毫升，地衣紅1克，鹽酸1毫升

⑺Weigert蘇木精或明礬蘇木精染細(xì)胞核10~15分鐘，充分水洗

⑻必要時(shí)用鹽酸酒精分色，自來(lái)水洗至切片呈藍(lán)色

⑼麗春紅品紅液染色5~10分鐘，用濾紙沾干

麗春紅品紅液：蒸餾水100毫升，依次溶解：麗春紅0.8克，酸性品紅0.4克，冰醋酸1毫升

⑽0.5%醋酸水溶液洗30~60秒，蒸餾水略洗

⑾1%磷鉬酸水溶液分色3~5分鐘至膠原纖維呈淡紅色或無(wú)色、肌纖維紅色

⑿1%醋酸水溶液洗30秒

⒀2%亮綠液染色3~5分鐘

亮綠液：蒸餾水98毫升，亮綠Y2克，冰醋酸2毫升

⒁1%醋酸水溶液洗滌

⒂95%酒精和無(wú)水酒精脫水各1分鐘

⒃二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片

結(jié)果：膠原纖維綠色；彈性纖維棕色或深棕色；肌纖維紅色；纖維素紅色；紅細(xì)胞紅色；細(xì)胞核藍(lán)黑色

Ⅳ 固定液：甲醛（水或生理鹽水或磷酸鹽緩沖液）、多聚甲醛

染色前必須用升汞(mercuric chloride)液或苦味酸(picric acid)酒精液媒染。

⑴組織塊常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片不超過(guò)8微米

⑵切片經(jīng)二甲苯脫蠟，經(jīng)各級(jí)酒精下行至蒸餾水

⑶在3%升汞液或苦味酸酒精溶液媒染1小時(shí)

⑷1%地衣紅液染彈性纖維30~60分鐘，蒸餾水洗去多余染料

地衣紅液：80%酒精100毫升，地衣紅1克，鹽酸1毫升

⑸Weigert蘇木精或明礬蘇木精(alum hematoxylin)染細(xì)胞核10~15分鐘，充分水洗

⑹必要時(shí)用鹽酸酒精分色，自來(lái)水洗至切片呈藍(lán)色

⑺麗春紅品紅液染色5~10分鐘，用濾紙沾干

麗春紅品紅液：蒸餾水100毫升，依次溶解：麗春紅0.8克，酸性品紅0.4克，冰醋酸1毫升

⑻0.5%醋酸水溶液洗30~60秒，蒸餾水略洗

⑼1%磷鉬酸水溶液分色3~5分鐘至膠原纖維呈淡紅色或無(wú)色、肌纖維紅色

⑽1%醋酸水溶液洗30秒

⑾2%亮綠液染色3~5分鐘

亮綠液：蒸餾水98毫升，亮綠Y2克，冰醋酸2毫升

⑿1%醋酸水溶液洗滌

⒀95%酒精和無(wú)水酒精脫水各1分鐘

⒁二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片

結(jié)果：膠原纖維綠色；彈性纖維棕色或深棕色；肌纖維紅色；纖維素紅色；紅細(xì)胞紅色；細(xì)胞核藍(lán)黑色

可用地衣紅染彈性纖維。分色時(shí)鏡檢。醋酸分色不要過(guò)度。亮綠可用苯胺藍(lán)代替

附：Weigert鐵蘇木精染色法

兩液分別配制，用時(shí)混合。只能用幾次。

A液：1%蘇木精（95%酒精）溶液  10毫升

B液：29%氯化鐵(ferric trichloride)水溶液4毫升，鹽酸（25%）1毫升，蒸餾水95毫升

（三氯化鐵1.16克，蒸餾水98毫升，鹽酸1毫升）

使用時(shí)將A、B兩液等量混合（各50毫升），染色數(shù)分鐘。

附：明礬蘇木精

1  Hansen鉻明礬蘇木精

4%鉻明礬水溶液：鉻明礬(chromic potassium sulfate)10克溶于蒸餾水250毫升，煮沸至溶液呈綠色

蘇木精(haematoxylin)1克溶于熱蒸餾水15毫升

10%硫酸（2N）水溶液：濃硫酸(sulfuric acid)10毫升，蒸餾水90毫升

2.76%重鉻酸鉀水溶液：重鉻酸鉀(potassium dichromate )0.552克溶于蒸餾水20毫升

充分振蕩混合；

再加10%硫酸（2N）5毫升

蘇木精水溶液倒入鉻明礬液，充分振蕩混合，加入硫酸液5毫升

倒入重鉻酸鉀液20毫升，煮沸1~2分鐘。待溶液冷卻后過(guò)濾。

此液保存性好，不會(huì)過(guò)染，也不易褐色

染30秒至2分鐘，可使細(xì)胞核呈藍(lán)黑色；若硫酸減至1~3毫升，可使細(xì)胞漿著色，也能染神經(jīng)元內(nèi)的尼氏體（虎斑）

2 Mayer酸性明礬蘇木精

蘇木精1克，蒸餾水100毫升；碘酸鈉(sodium iodate )0.2克，鉀明礬(aluminium potassium sulfate)50克。加溫溶解，溶液呈藍(lán)紫色。

加水合氯醛(chloral hydrate)50克，枸櫞酸(citric acid)1克，溶液呈紅紫色。能長(zhǎng)久保存。陳液著色力較強(qiáng)?？捎?/span>2%鉀明礬水溶液稀釋，染后流水洗至細(xì)胞核至深藍(lán)色。

切片染色4~6分鐘，小塊組織染24小時(shí)。

3 Mayer鉀明礬蘇木紅

蘇木紅（haematein）1克溶于95%酒精50毫升，稍加溫溶解。加5%鉀明礬（aluminium potassium sulfate)水溶液100毫升，最后加樟腦(camphor)少許防腐。

4  Delafield蘇木精

蘇木精4克溶于無(wú)水酒精25毫升，倒入10%銨明礬（aluminum ammonium sulfate）水溶液400毫升，置有光處3~4天，過(guò)濾，加甘油(glycerin)和甲醇(methanol)各100毫升。數(shù)日后過(guò)濾。能長(zhǎng)久使用。

此液對(duì)細(xì)胞核和嗜堿性物質(zhì)染色效果很好。著色力強(qiáng)。

一般染色數(shù)分鐘；也可用蒸餾水稀釋50~100倍，染色4~24小時(shí)。

5  Ehrlich酸性蘇木精

蘇木精2克溶于95%酒精100毫升，加蒸餾水及純甘油各100毫升、鉀明礬3克、冰醋酸10毫升。混合后溶液呈紅色。用紗布封閉瓶蓋，2周后成熟，溶液呈暗紅紫色。

切片染數(shù)分鐘。

此液適合于塊染，需用蒸餾水或50%酒精稀釋4~5倍，小塊組織染1~2天。

6  Harris蘇木精

10%蘇木精（95%或無(wú)水酒精）溶液10毫升與10%鉀明礬水溶液（加熱溶解）200毫升混合于1000毫升燒瓶?jī)?nèi)。繼續(xù)加熱煮沸1分鐘，?；穑徛友趸?/span>(mercuric oxide)0.5克，再加熱煮沸1分鐘。迅速將三角燒瓶放入冷水中冷卻?？杉颖姿?/span>5~10毫升，加強(qiáng)細(xì)胞核的著色能力。

切片染色約3~10分鐘。

不適合整塊組織染色。