腹腔注射的方式適用于脂肪、肌肉、胰腺、腸道等全身器官,以及新生鼠(造成的損傷較小),通過這種遞送途徑,腸道的平滑肌及漿膜感染概率更大,可以觀測到散在的GFP染色,但是上皮細胞感染的概率較小。 具體步驟如下: 腹腔注射示意圖 1. 實驗前準備 準備內(nèi)容:小鼠、病毒液 ( 冰浴融化)、1ml 注射器。 吸取病毒:用 1ml 注射器吸取適量病毒,置于冰上備用。 2. 小鼠固定 a. 首先提取小鼠尾巴,將其放在鼠籠蓋或手臂上,并進行適當安撫; b. 然后左手握小鼠,用拇指和食指捏住小鼠頸背部,用無名指及小指固定其尾和后肢,確保小鼠軀體舒展且不能亂動。 3. 病毒注射 a. 右手取吸好病毒的注射器,翻轉(zhuǎn)左手使小鼠頭部朝下且腹部完全暴露給操作者; b. 手持注射器在下腹部離腹白線約 0.5cm 處下針,使針頭與小鼠腹部約成 30°夾角刺入腹部,刺入過程中如感覺到抵抗力突然消失,表明針頭已進入腹腔,此時調(diào)整針頭方向約與小鼠腹部平行,緩緩進針; c. 針頭進入適當距離后,勻速注射病毒液后,緩緩拔出針頭 ( 旋轉(zhuǎn)針頭以避免漏液)。 4. 動物復蘇 將小鼠放回原飼養(yǎng)籠中,注意觀察小鼠狀態(tài)。 除了系統(tǒng)性的遞送方式外也可通過局部注射的方式實現(xiàn)AAV的遞送,腸道方向包括灌腸和腸系膜動脈注射的方式,優(yōu)點是病毒劑量更小、可以直接感染需求部位,但同時也具備一定的缺點,那就是對動物造成的損傷更大。 |
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