慢病毒載體系統(tǒng)是一種能非常高效的把外源基因穩(wěn)定整合到哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的載體工具。除了常規(guī)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染外,目前該系統(tǒng)也是把外源基因轉(zhuǎn)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞的最常用方法之一。由于具有目的基因和啟動(dòng)子選擇的靈活性以及轉(zhuǎn)染細(xì)胞類型的廣泛性兩大特點(diǎn),使得慢病毒載體系統(tǒng)成為倍受歡迎的外源基因表達(dá)系統(tǒng)。 慢病毒載體來(lái)源于人類免疫缺陷病毒HIV,屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒家族。野生型慢病毒基因組是線性雙正鏈RNA。 慢病毒重組載體構(gòu)建完成后與輔助質(zhì)粒一起轉(zhuǎn)染進(jìn)入包裝細(xì)胞。在包裝細(xì)胞中,位于兩個(gè)長(zhǎng)末端重復(fù)序列(LTR)之間的DNA片段會(huì)被轉(zhuǎn)錄成RNA,由輔助質(zhì)粒表達(dá)的病毒蛋白將其包裝形成病毒顆粒。包裝后的活體病毒將會(huì)被釋放到上清液中,可以直接收集或進(jìn)一步濃縮病毒轉(zhuǎn)染靶細(xì)胞。 當(dāng)病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)靶細(xì)胞時(shí),釋放到宿主細(xì)胞中的病毒RNA借助逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄成雙鏈DNA,然后隨機(jī)整合進(jìn)宿主細(xì)胞的基因組中。在病毒載體中,位于兩個(gè)LTR的DNA片段和病毒基因組都會(huì)穩(wěn)定整合到靶細(xì)胞的基因組中。 |
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