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TMT蛋白質(zhì)組定量技術(shù)

 生物學(xué)渣 2021-04-19

 TMT?(Tandem Mass Tag?)技術(shù)是由美國(guó)Thermo Scientific公司研發(fā)的一種多肽體外標(biāo)記技術(shù)。該技術(shù)采用10種同位素的標(biāo)簽,通過(guò)特異性標(biāo)記蛋白多肽N末端或賴氨酸側(cè)鏈基團(tuán),而后進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析,可同時(shí)比較10組不同樣品中蛋白質(zhì)的相對(duì)含量。

  TMT技術(shù)是常用的差異蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),在疾病標(biāo)記物篩選、藥物作用靶點(diǎn)、動(dòng)植物抗病/抗脅迫機(jī)制、動(dòng)植物發(fā)育分化機(jī)理等領(lǐng)域都有廣泛應(yīng)用。

技術(shù)優(yōu)勢(shì)

靈敏度高:低豐度蛋白也能檢測(cè)出
適用范圍廣:幾乎可對(duì)任何物種的各類蛋白質(zhì)進(jìn)行分離鑒定
高通量:能同時(shí)對(duì)10組樣本中包含的蛋白進(jìn)行鑒定及表達(dá)差異分析
高效:液相色譜與串聯(lián)質(zhì)譜連用,自動(dòng)化操作,分析速度快,分離效果好

研究背景

全球溫度升高會(huì)對(duì)微生物群落造成影響,進(jìn)而直接影響全球生態(tài)系統(tǒng)??茖W(xué)家們?cè)跍囟葘?duì)微生物群落的群落結(jié)構(gòu)和特定的代謝過(guò)程做了許多研究,而較少使用組學(xué)手段對(duì)整個(gè)群落的反應(yīng)做出全面的評(píng)估。

研究?jī)?nèi)容

本文首次將TMT標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)應(yīng)用在微生物群落研究上,精確地和可重復(fù)地在40℃、43℃和46℃三個(gè)溫度條件下定量到上千個(gè)微生物蛋白質(zhì)。作者發(fā)現(xiàn),溫度升高會(huì)引起單個(gè)微生物和整個(gè)群落的氨基酸代謝相關(guān)蛋白質(zhì)上調(diào),并抑制兩類螺菌屬微生物的固碳蛋白表達(dá),然而在高溫下第三類螺菌屬微生物固碳蛋白則顯著上調(diào)。

生物群落蛋白豐度變化分析

研究結(jié)果

定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可以用于群落微生物研究,能鑒定到與代謝、生長(zhǎng)、信號(hào)與壓力反應(yīng)等過(guò)程相關(guān)的上千個(gè)差異表達(dá)蛋白,并能在生態(tài)群落中對(duì)單個(gè)微生物組實(shí)現(xiàn)定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究。

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