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細胞運動能力檢測技術(shù)原理

 生物學(xué)渣 2021-04-13

細胞運動能力
細胞運動具有粘附性和趨向性。當(dāng)細胞受到外界刺激時,細胞內(nèi)的粘附趨化因子激活,根據(jù)刺激性質(zhì)做出不同的反應(yīng),細胞在骨架蛋白的作用下細胞伸出偽足,會在支撐物上反復(fù)的粘附和脫離,向刺激點或者遠離刺激點運動。不同的刺激條件下會有不同的反應(yīng),根據(jù)細胞對不同刺激的反應(yīng),一般使用細胞劃痕實驗、細胞遷移能力實驗、細胞侵襲能力實驗檢測細胞的運動能力。
 
細胞劃痕實驗是體外模擬細胞遷移能力和修復(fù)能力快捷的檢測方法。
實驗流程:
1.1、在六孔板中待細胞長滿后,使用移液器槍頭或其他硬物在六孔板中劃1-3條平行的直線,加入PBS輕輕搖晃,去除PBS,重復(fù)使用PBS洗5次,以去除劃出的細胞;
1.2、細胞分別培養(yǎng)0h、12h、24h后,觀察細胞往中線遷移情況,同時使用ImageJ軟件對劃痕的距離進行檢測,以判斷細胞遷移能力。
懸浮細胞不適宜做細胞劃痕實驗。

細胞遷移和侵襲實驗是體外模擬腫瘤細胞遷移和侵襲能力的檢測方法。使用不同孔徑的聚碳酸酯膜transwell小室放入培養(yǎng)板中,將腫瘤細胞接種于小室中,利用培養(yǎng)液成分的差異誘導(dǎo)細胞運動,檢測細胞的遷移和侵襲能力的差異。
實驗流程
細胞遷移:
1.1、細胞經(jīng)不同刺激后,去除細胞培養(yǎng)基,加入PBS洗一次,去除PBS,加入胰酶將細胞消化后將細胞轉(zhuǎn)移至離心管中,1000rpm常溫離心5min;
1.2、使用無血清培養(yǎng)基將細胞重懸,使用血球計數(shù)板對細胞計數(shù),接種5×104個細胞于transwell小室上室,下室加入10%含血清的培養(yǎng)基,輕輕混勻后放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)8h;
1.3、去除上室和下室中的培養(yǎng)基,使用4%多聚甲醛或者乙醇常溫固定細胞10min;
1.4、加入PBS洗2次,加入結(jié)晶紫染色液,常溫染色20min,使用棉簽輕輕擦拭以去除未遷移的細胞,加入水或者PBS洗兩次,去除殘留的染色液;
1.5、將transwell小室放在顯微鏡下拍照。
細胞侵襲
2.1、將matrigel放入4℃冰箱融化過夜,加入預(yù)冷的PBS,1:3比例將matrigel稀釋,使用預(yù)冷的移液器將matrigel加入transwell小室上室中,輕輕加入防止出現(xiàn)氣泡,加好后,將transwell小室放入細胞培養(yǎng)箱中凝固30min;
2.2、細胞經(jīng)不同刺激后,去除細胞培養(yǎng)基,加入PBS洗一次,去除PBS,加入胰酶將細胞消化后將細胞轉(zhuǎn)移至離心管中,1000rpm常溫離心5min;
2.3、使用無血清培養(yǎng)基將細胞重懸,使用血球計數(shù)板對細胞計數(shù),接種1×105個細胞于transwell小室上室,下室加入10%含血清的培養(yǎng)基,輕輕混勻后放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h;
2.4、去除上室和下室中的培養(yǎng)基,使用4%多聚甲醛或者乙醇常溫固定細胞10min;
2.5、加入PBS洗2次,加入結(jié)晶紫染色液,常溫染色20min,使用棉簽輕輕擦拭以去除未遷移的細胞和殘留的matrigel,加入水或者PBS洗兩次,去除殘留的染色液;
2.6、將transwell小室放在顯微鏡下拍照。

結(jié)果示例:

圖 A 細胞劃痕實驗圖;B,C 細胞遷移和侵襲實驗圖

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